本文選題：腎癌　切入點(diǎn)：ErbB3　出處：《福建醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：第一部分ErbB3在腎細(xì)胞癌及其相應(yīng)的癌旁組織中的mRNA和蛋白質(zhì)水平的表達(dá)的研究 目的： 1、研究ErbB3mRNA及蛋白在腎癌及其相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)情況; 2、探討ErbB3表達(dá)與腎癌發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系。 方法： 1、分別應(yīng)用普通RT-PCR和實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)ErbB3mRNA在38例新鮮腎癌及其癌旁相應(yīng)的腎組織的表達(dá)情況;用Western Blotting檢測(cè)ErbB3蛋白在38例腎癌組織及其相應(yīng)的癌旁腎組織中的表達(dá)情況。 2、統(tǒng)計(jì)分析ErbB3mRNA和蛋白在38例腎癌及相應(yīng)癌旁組織中的表達(dá)情況，同時(shí)探討25例腎癌及相應(yīng)癌旁組織中ErbB3的表達(dá)與腎癌TNM分期的關(guān)系。 結(jié)果： 普通RT-PCR及實(shí)時(shí)定量RT-PCR均顯示：17例腎癌組織較其相應(yīng)癌旁組織ErbB3mRNA明顯高表達(dá)，高表達(dá)率為44.74%（17/38），而有6例癌旁組織較癌組織ErbB3mRNA高表達(dá)，其相應(yīng)高表達(dá)率為15.79%（6/38），，余15例腎癌組織及癌旁組織ErbB3mRNA表達(dá)差異不明顯，占39.47%（15/38）；Western Blotting分析顯示：在38例配對(duì)的腎癌及癌旁組織中，其ErbB3表達(dá)情況與普通RT-PCR及實(shí)時(shí)定量RT-PCR結(jié)果一致，其在PCR中ErbB3高表達(dá)的腎癌組織在Western Blotting檢測(cè)中也同樣高表達(dá)，且ErbB3在腫瘤組織中的表達(dá)明顯高于癌旁組織；而25例腎癌及癌旁組織中ErbB3的表達(dá)與腎癌的TNM分期無(wú)明顯相關(guān)性（P=0.379＞0.05；r=0.184）。 結(jié)論： ErbB3在腎癌組織較癌旁組織中高表達(dá)，提示ErbB3高表達(dá)可能與腎癌的發(fā)生密切相關(guān)，而與腎癌的TNM分期關(guān)系不明顯。 第二部分慢病毒介導(dǎo)ErbB3基因過(guò)表達(dá)對(duì)A498細(xì)胞生物學(xué)特性影響的研究 目的： 觀察慢病毒載體介導(dǎo)的ErbB3基因過(guò)表達(dá)對(duì)A498細(xì)胞生物特性的影響。 方法： 1、 HEK293T的培養(yǎng)使用含10%胎牛血清的DMEM/F12培養(yǎng)基；A498細(xì)胞的培養(yǎng)使用含10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基，置于5%CO2、37℃的飽和濕度的溫箱中培養(yǎng)； 2、實(shí)驗(yàn)分兩組： pLEX-ErbB3慢病毒載體組及對(duì)照病毒載體（pLEX MCS）組；在聚乙烯亞胺（PEI）的介導(dǎo)下，分別與相應(yīng)包裝質(zhì)粒psPAX2、pMD2.G共轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞來(lái)包裝病毒； 3、將上述兩組適量病毒分別稀釋入含Polybrene (終濃度8μg/mL)的常規(guī)培養(yǎng)基，感染A498細(xì)胞24小時(shí)后，用1ug/ml的嘌呤霉素培養(yǎng)基篩選24小時(shí)，普通RT-PCR及實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)ErbB3mRNA在pLEX-ErbB3慢病毒載體組及對(duì)照病毒載體組A498細(xì)胞中的表達(dá)情況;用Western Blotting檢測(cè)ErbB3蛋白在pLEX-ErbB3慢病毒載體組及對(duì)照病毒載體組A498細(xì)胞中的表達(dá)情況，并比較分析； 4、取經(jīng)嘌呤霉素篩選24小時(shí)后的兩組A498細(xì)胞接種于96孔板，在第3、4、5、6、7、8、9天分別以MTS法計(jì)算活細(xì)胞數(shù)量，并繪制生長(zhǎng)曲線，比較兩組細(xì)胞生長(zhǎng)情況； 5、用MTS法檢測(cè)經(jīng)病毒感染后的兩組A498細(xì)胞在不同順鉑濃度下的存活情況，繪制存活曲線并比較分析。 6、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，結(jié)果行t-test統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 結(jié)果： 經(jīng)普通RT-PCR及實(shí)時(shí)定量RT-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn)pLEX-ErbB3慢病毒載體組細(xì)胞較對(duì)照病毒載體組細(xì)胞ErbB3mRNA明顯高表達(dá)，說(shuō)明PLEX-ErbB3慢病毒載體成功介導(dǎo)ErbB3基因在A498細(xì)胞中的高表達(dá)；Western Blotting結(jié)果也顯示經(jīng)pLEX-ErbB3慢病毒感染的A498細(xì)胞ErbB3蛋白同樣高表達(dá)；經(jīng)MTS結(jié)果顯示pLEX-ErbB3慢病毒載體組細(xì)胞組較對(duì)照病毒載體組細(xì)胞明顯增長(zhǎng)更快；pLEX-ErbB3慢病毒載體組細(xì)胞組較對(duì)照病毒載體組在多種順鉑濃度下有更高的生存率。 結(jié)論： 慢病毒載體系統(tǒng)可有效介導(dǎo)外源基因ErbB3在A498細(xì)胞中表達(dá)；ErbB3的高表達(dá)能促進(jìn)A498細(xì)胞的生長(zhǎng)；ErbB3的高表達(dá)能促使A498細(xì)胞對(duì)順鉑的耐藥；推測(cè)ErbB3高表達(dá)可能與腎癌耐藥性有關(guān)。
[Abstract]:The study of the expression of mRNA and protein in the first part of ErbB3 in renal cell carcinoma and its corresponding para cancerous tissue
Objective:
1, to study the expression of ErbB3mRNA and protein in renal carcinoma and its adjacent tissues.
2, to explore the relationship between the expression of ErbB3 and the development of renal carcinoma.
Method錛

本文編號(hào)：1573962