本文關鍵詞： 枸杞多糖 糖尿病腎病 蛋白尿延緩 腎小球濾過功能 炎癥相關因子 氧化應激 NF-κB　出處：《武漢大學》2014年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：糖尿病(diabetes mellitus, DM)是一種嚴重且復雜的慢性疾病,以慢性高血糖為主要特征。根據國際糖尿病聯(lián)合會(IDF)預測,2035年全球糖尿病患者將達到5.92億人。糖尿病腎病(diabetic nephropathy, DN)是以持續(xù)性蛋白尿、基底膜增厚、腎小球濾過率下降等為主要特征的微血管病變,是DM最為常見且嚴重的慢性并發(fā)癥,也是導致終末期腎衰竭(ESRD)的主要原因之一。大量實驗與臨床研究發(fā)現(xiàn),炎癥是DN發(fā)生發(fā)展的關鍵因素。 枸杞子(Lycium barbarum L.)是我國傳統(tǒng)名貴中藥,性甘平,具有補腎養(yǎng)陰,治虛勞消渴的功用。枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides, LBP)是其有效成分之一,具有降血糖、降血脂、抗氧化、提高機體免疫等多種生物活性。本研究以大耳白兔作為實驗對象,從整體動物及分子水平上闡述了LBP對DN兔腎臟組織炎癥損傷及其相關機制的影響,旨在探討LBP能否延緩蛋白尿的出現(xiàn),抑制腎臟組織炎癥反應,從而延緩DN的發(fā)生發(fā)展。 第一部分糖尿病腎病免模型的建立及枸杞多糖對糖尿病腎病兔腎臟炎癥損傷的保護作用 目的：觀察LBP對DN兔腎臟炎癥損傷的影響。方法：采用四氧嘧啶(ALX)聯(lián)合高脂飲食(4%豬油+1%膽固醇)誘導糖尿病腎病兔動物模型。將20只雄性日本大二白兔隨機分為5組,每組4只,分別為正常對照組、DN模型組、LBP預防組、美卡素組(陽性對照組)和LBP治療組。LBP預防組于DM成模后即灌胃LBP(10mg/kg)持續(xù)12w,同時正常對照組與DN模型組分別灌胃等體積的生理鹽水。美卡素組和LBP治療組于DN成模后(第8w)分別灌胃美卡素(3.7mg/kg)/LBP (10mg/kg)持續(xù)4w。實驗第OW、2、4w、6w、8w和12w末稱重并測定空腹血糖濃度；實驗0w、4w、8w和12w末測定血脂四項(TC、TG、LDL-c和HDL-c)；實驗第4w、6w、8w和12w末收集24h尿液測定尿蛋白含量；實驗第8w和12w末測定腎功能二項(BUN、SCr),同時計算出肌酐清除率(CCr)；于第12w末處死實驗動物,測定血清CRP濃度,腎皮質中AGEs含量；采用ELISA法檢測腎皮質中AngⅡ。結果：DN組大耳白兔血糖、血脂明顯升高(P0.01),體重明顯減輕(P0.01),血清中BUN和SCr明顯升高(P0.01),CCr明顯降低(P0.01),從第4w起出現(xiàn)蛋白尿,血清中CRP及腎皮質中AGEs、AngⅡ含量明顯增加(P0.01)。LBP預防組大耳白兔血糖、血脂明顯降低(P0.01),體重明顯增加(P0.01),血清中BUN和SCr明顯降低(P0.01),CCr明顯升高(P0.01),從第6w起出現(xiàn)蛋白尿(P0.01),且較DN組蛋白尿出現(xiàn)時間延緩,血清中CRP及腎皮質中AGEs、AngⅡ含量明顯降低(P0.01)。美卡素組和LBP治療組較DN組大耳白兔情況亦有所改善,兩組大耳白兔血清中BUN和SCr明顯降低(P0.05),24h尿蛋白明顯降低(P0.05,P0.01),且美卡素組降低更為明顯(P0.05),但仍高于LBP預防組。結論：LBP可減輕腎臟組織中炎癥損傷,改善腎功能,提高腎小球濾過率,延緩蛋白尿的出現(xiàn)。其中LBP的預防效果最佳,尿蛋白出現(xiàn)時間延遲1w。 第二部分枸杞多糖對炎癥所致糖尿病腎病兔腎小球形態(tài)結構及其濾過功能損傷的影響 目的：觀察LBP對炎癥所致DN兔腎小球形態(tài)結構及其濾過功能損傷的影響。 方法：動物分組及處理同第一部分。于第12w末處死實驗動物,取雙側腎臟,測定腎臟質量指數(shù)(KWI)；進行HE及PAS染色,光鏡下觀察腎臟組織形態(tài)變化；制作電鏡切片,電鏡下觀察腎臟組織超微結構變化；采用RT-PCR方法檢測腎皮質中Nephrin mRNA的表達。結果：DN組大耳白兔KWI明顯增高(P0.01),光鏡下觀察到腎小球體積增大,系膜細胞及基質增生,基底膜增厚,炎癥細胞浸潤,PAS紅染區(qū)明顯增大；電鏡下觀察到足突廣泛融合,甚至消失,基底膜明顯增厚。且足細胞相關蛋白Nephrin表達明顯下調(P0.01)。LBP預防組、美卡素組和LBP治療組大耳白兔較DN組均有不同程度改善,腎小球體積減小,基底膜增厚減輕,PAS紅染區(qū)減少,足突部分融合,足細胞相關蛋白Nephrin表達上調(P0.01),其中以LBP預防組情況最佳。結論：LBP可改善炎癥所致基底膜增厚、足突融合等情況,減緩腎小球濾過屏障功能損傷,從而延緩蛋白尿的出現(xiàn)。 第三部分枸杞多糖對糖尿病腎病兔腎皮質中炎癥相關因子表達的影響 目的：觀察LBP對DN兔腎皮質炎癥相關因子表達的影響。方法：動物分組及處理同第一部分。于第12w末處死實驗動物,采用免疫組化法檢測腎皮質中MCP-1、ICAM-1、TGF-β和TNF-a蛋白表達；采用RT-PCR法檢測腎皮質中MCP-1mRNA和ICAM-1mRNA的表達。結果：DN組大耳白兔腎皮質中MCP-1、ICAM-1、TGF-β和TNF-a蛋白表達明顯增高,同時MCP-1mRNA和ICAM-1mRNA表達明顯上調(P0.01)。LBP預防組、美卡素組和LBP治療組大耳白兔腎皮質中MCP-1、ICAM-1、TGF-β和TNF-a蛋白表達均有不同程度降低,同時MCP-1mRNA和ICAM-1mRNA表達亦下調(P0.01),其中以LBP預防組效果最佳,美卡素組優(yōu)于LBP治療組。結論：LBP可下調炎癥相關因子的表達,抑制單核巨噬細胞等炎癥細胞向腎小球遷移、黏附,減輕腎臟組織炎癥反應,從而延緩DN的發(fā)生發(fā)展。 第四部分枸杞多糖對糖尿病腎病兔腎皮質中氧化應激及NF-κB信號通路表達的影響 目的：觀察LBP對DN兔腎皮質中氧化應激及NF-κB信號通路表達的影響。方法：動物分組及處理同第一部分。于第12w末處死實驗動物,測定腎皮質中SOD、 GSH-Px、CAT活力,MDA、GSH含量;采用ELISA法檢測腎皮質中8-OHdG含量；采用RT-PCR和Western blot法檢測腎皮質中NF-κB mRNA和蛋白的表達。結果：DN組大耳白兔腎皮質中SOD、GSH-Px和CAT活力明顯降低(P0.01),8-OHdG、MDA和GSH含量明顯增加(P0.01),NF-κB mRNA和蛋白表達明顯上調(P0.01)。LBP預防組、美卡素組和LBP治療組大耳白兔腎皮質中SOD、GSH-Px和CAT活力明顯增加(P0.01),8-OHdG、MDA和GSH含量明顯降低(P0.01),NF-κB mRNA和蛋白表達明顯下調(P0.01),其中以LBP預防組效果最佳,美卡素組優(yōu)于LBP治療組。結論：LBP通過增強腎臟組織抗氧化能力,從而抑制NF-κB信號通路活化,下調炎癥因子的表達,緩解腎小球的損傷,從而延緩DN的發(fā)生發(fā)展。
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【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R587.2;R692

【參考文獻】

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本文編號：1555021