本文關(guān)鍵詞： 枸杞多糖 糖尿病腎病 蛋白尿延緩 腎小球?yàn)V過(guò)功能 炎癥相關(guān)因子 氧化應(yīng)激 NF-κB　出處：《武漢大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：糖尿病(diabetes mellitus, DM)是一種嚴(yán)重且復(fù)雜的慢性疾病,以慢性高血糖為主要特征。根據(jù)國(guó)際糖尿病聯(lián)合會(huì)(IDF)預(yù)測(cè),2035年全球糖尿病患者將達(dá)到5.92億人。糖尿病腎病(diabetic nephropathy, DN)是以持續(xù)性蛋白尿、基底膜增厚、腎小球?yàn)V過(guò)率下降等為主要特征的微血管病變,是DM最為常見(jiàn)且嚴(yán)重的慢性并發(fā)癥,也是導(dǎo)致終末期腎衰竭(ESRD)的主要原因之一。大量實(shí)驗(yàn)與臨床研究發(fā)現(xiàn),炎癥是DN發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素。 枸杞子(Lycium barbarum L.)是我國(guó)傳統(tǒng)名貴中藥,性甘平,具有補(bǔ)腎養(yǎng)陰,治虛勞消渴的功用。枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharides, LBP)是其有效成分之一,具有降血糖、降血脂、抗氧化、提高機(jī)體免疫等多種生物活性。本研究以大耳白兔作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象,從整體動(dòng)物及分子水平上闡述了LBP對(duì)DN兔腎臟組織炎癥損傷及其相關(guān)機(jī)制的影響,旨在探討LBP能否延緩蛋白尿的出現(xiàn),抑制腎臟組織炎癥反應(yīng),從而延緩DN的發(fā)生發(fā)展。 第一部分糖尿病腎病免模型的建立及枸杞多糖對(duì)糖尿病腎病兔腎臟炎癥損傷的保護(hù)作用 目的：觀察LBP對(duì)DN兔腎臟炎癥損傷的影響。方法：采用四氧嘧啶(ALX)聯(lián)合高脂飲食(4%豬油+1%膽固醇)誘導(dǎo)糖尿病腎病兔動(dòng)物模型。將20只雄性日本大二白兔隨機(jī)分為5組,每組4只,分別為正常對(duì)照組、DN模型組、LBP預(yù)防組、美卡素組(陽(yáng)性對(duì)照組)和LBP治療組。LBP預(yù)防組于DM成模后即灌胃LBP(10mg/kg)持續(xù)12w,同時(shí)正常對(duì)照組與DN模型組分別灌胃等體積的生理鹽水。美卡素組和LBP治療組于DN成模后(第8w)分別灌胃美卡素(3.7mg/kg)/LBP (10mg/kg)持續(xù)4w。實(shí)驗(yàn)第OW、2、4w、6w、8w和12w末稱重并測(cè)定空腹血糖濃度；實(shí)驗(yàn)0w、4w、8w和12w末測(cè)定血脂四項(xiàng)(TC、TG、LDL-c和HDL-c)；實(shí)驗(yàn)第4w、6w、8w和12w末收集24h尿液測(cè)定尿蛋白含量；實(shí)驗(yàn)第8w和12w末測(cè)定腎功能二項(xiàng)(BUN、SCr),同時(shí)計(jì)算出肌酐清除率(CCr)；于第12w末處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,測(cè)定血清CRP濃度,腎皮質(zhì)中AGEs含量；采用ELISA法檢測(cè)腎皮質(zhì)中AngⅡ。結(jié)果：DN組大耳白兔血糖、血脂明顯升高(P0.01),體重明顯減輕(P0.01),血清中BUN和SCr明顯升高(P0.01),CCr明顯降低(P0.01),從第4w起出現(xiàn)蛋白尿,血清中CRP及腎皮質(zhì)中AGEs、AngⅡ含量明顯增加(P0.01)。LBP預(yù)防組大耳白兔血糖、血脂明顯降低(P0.01),體重明顯增加(P0.01),血清中BUN和SCr明顯降低(P0.01),CCr明顯升高(P0.01),從第6w起出現(xiàn)蛋白尿(P0.01),且較DN組蛋白尿出現(xiàn)時(shí)間延緩,血清中CRP及腎皮質(zhì)中AGEs、AngⅡ含量明顯降低(P0.01)。美卡素組和LBP治療組較DN組大耳白兔情況亦有所改善,兩組大耳白兔血清中BUN和SCr明顯降低(P0.05),24h尿蛋白明顯降低(P0.05,P0.01),且美卡素組降低更為明顯(P0.05),但仍高于LBP預(yù)防組。結(jié)論：LBP可減輕腎臟組織中炎癥損傷,改善腎功能,提高腎小球?yàn)V過(guò)率,延緩蛋白尿的出現(xiàn)。其中LBP的預(yù)防效果最佳,尿蛋白出現(xiàn)時(shí)間延遲1w。 第二部分枸杞多糖對(duì)炎癥所致糖尿病腎病兔腎小球形態(tài)結(jié)構(gòu)及其濾過(guò)功能損傷的影響 目的：觀察LBP對(duì)炎癥所致DN兔腎小球形態(tài)結(jié)構(gòu)及其濾過(guò)功能損傷的影響。 方法：動(dòng)物分組及處理同第一部分。于第12w末處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,取雙側(cè)腎臟,測(cè)定腎臟質(zhì)量指數(shù)(KWI)；進(jìn)行HE及PAS染色,光鏡下觀察腎臟組織形態(tài)變化；制作電鏡切片,電鏡下觀察腎臟組織超微結(jié)構(gòu)變化；采用RT-PCR方法檢測(cè)腎皮質(zhì)中Nephrin mRNA的表達(dá)。結(jié)果：DN組大耳白兔KWI明顯增高(P0.01),光鏡下觀察到腎小球體積增大,系膜細(xì)胞及基質(zhì)增生,基底膜增厚,炎癥細(xì)胞浸潤(rùn),PAS紅染區(qū)明顯增大；電鏡下觀察到足突廣泛融合,甚至消失,基底膜明顯增厚。且足細(xì)胞相關(guān)蛋白Nephrin表達(dá)明顯下調(diào)(P0.01)。LBP預(yù)防組、美卡素組和LBP治療組大耳白兔較DN組均有不同程度改善,腎小球體積減小,基底膜增厚減輕,PAS紅染區(qū)減少,足突部分融合,足細(xì)胞相關(guān)蛋白Nephrin表達(dá)上調(diào)(P0.01),其中以LBP預(yù)防組情況最佳。結(jié)論：LBP可改善炎癥所致基底膜增厚、足突融合等情況,減緩腎小球?yàn)V過(guò)屏障功能損傷,從而延緩蛋白尿的出現(xiàn)。 第三部分枸杞多糖對(duì)糖尿病腎病兔腎皮質(zhì)中炎癥相關(guān)因子表達(dá)的影響 目的：觀察LBP對(duì)DN兔腎皮質(zhì)炎癥相關(guān)因子表達(dá)的影響。方法：動(dòng)物分組及處理同第一部分。于第12w末處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,采用免疫組化法檢測(cè)腎皮質(zhì)中MCP-1、ICAM-1、TGF-β和TNF-a蛋白表達(dá)；采用RT-PCR法檢測(cè)腎皮質(zhì)中MCP-1mRNA和ICAM-1mRNA的表達(dá)。結(jié)果：DN組大耳白兔腎皮質(zhì)中MCP-1、ICAM-1、TGF-β和TNF-a蛋白表達(dá)明顯增高,同時(shí)MCP-1mRNA和ICAM-1mRNA表達(dá)明顯上調(diào)(P0.01)。LBP預(yù)防組、美卡素組和LBP治療組大耳白兔腎皮質(zhì)中MCP-1、ICAM-1、TGF-β和TNF-a蛋白表達(dá)均有不同程度降低,同時(shí)MCP-1mRNA和ICAM-1mRNA表達(dá)亦下調(diào)(P0.01),其中以LBP預(yù)防組效果最佳,美卡素組優(yōu)于LBP治療組。結(jié)論：LBP可下調(diào)炎癥相關(guān)因子的表達(dá),抑制單核巨噬細(xì)胞等炎癥細(xì)胞向腎小球遷移、黏附,減輕腎臟組織炎癥反應(yīng),從而延緩DN的發(fā)生發(fā)展。 第四部分枸杞多糖對(duì)糖尿病腎病兔腎皮質(zhì)中氧化應(yīng)激及NF-κB信號(hào)通路表達(dá)的影響 目的：觀察LBP對(duì)DN兔腎皮質(zhì)中氧化應(yīng)激及NF-κB信號(hào)通路表達(dá)的影響。方法：動(dòng)物分組及處理同第一部分。于第12w末處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,測(cè)定腎皮質(zhì)中SOD、 GSH-Px、CAT活力,MDA、GSH含量;采用ELISA法檢測(cè)腎皮質(zhì)中8-OHdG含量；采用RT-PCR和Western blot法檢測(cè)腎皮質(zhì)中NF-κB mRNA和蛋白的表達(dá)。結(jié)果：DN組大耳白兔腎皮質(zhì)中SOD、GSH-Px和CAT活力明顯降低(P0.01),8-OHdG、MDA和GSH含量明顯增加(P0.01),NF-κB mRNA和蛋白表達(dá)明顯上調(diào)(P0.01)。LBP預(yù)防組、美卡素組和LBP治療組大耳白兔腎皮質(zhì)中SOD、GSH-Px和CAT活力明顯增加(P0.01),8-OHdG、MDA和GSH含量明顯降低(P0.01),NF-κB mRNA和蛋白表達(dá)明顯下調(diào)(P0.01),其中以LBP預(yù)防組效果最佳,美卡素組優(yōu)于LBP治療組。結(jié)論：LBP通過(guò)增強(qiáng)腎臟組織抗氧化能力,從而抑制NF-κB信號(hào)通路活化,下調(diào)炎癥因子的表達(dá),緩解腎小球的損傷,從而延緩DN的發(fā)生發(fā)展。
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【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R587.2;R692

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1555021