本文關鍵詞： 張力蛋白同源第10號染色體缺失的磷酸酶基因(PTEN) 雄激素受體 Raf1 PC3 前列腺腫瘤 細胞凋亡　出處：《昆明醫(yī)科大學》2014年博士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：前列腺癌(PCa)是多發(fā)于老年男性的惡性腫瘤,隨著其發(fā)病率的增高,特別是激素非依賴性前列腺癌(AIPC)治療效果和疾病預后的不佳,對PCa發(fā)生發(fā)展機制的研究日趨受到人們關注。本論文分為三個部分。第一部分主要就PTEN基因在PCa的表達及其與雄激素受體(AR)表達的相關性作探討和分析。PTEN基因是繼p53之后的又一抑癌基因,具有脂質磷酸酶和蛋白磷酸酶雙重活性,其表達缺失與多種惡性腫瘤的發(fā)生有關,包括PCa。PCa組織中PTEN基因表達情況的檢測對PCa發(fā)生機制的研究及其預后判斷具有重要價值。與此同時,AR在維持前列腺的生長發(fā)育、正常功能發(fā)揮以及前列腺增生癥(BPH)、PCa的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用。我們經(jīng)超聲引導下穿刺取材,對41例病理診斷PCa的病灶組織和30例病理診斷BPH的病灶組織,通過RT-PCR方法檢測穿刺取材組織的PTEN和AR表達,并經(jīng)Western blot方法驗證,分析PTEN和AR的表達與PCa臨床分期、Gleason評分(病理分級)的關系以及PTEN與AR表達的相關性,旨在研究PTEN和AR的表達與PCa病程進展的關系以及二者在PCa中表達的相關性。結果顯示,與BPH比較,各臨床分期的PCa組織中PTENmRNA和PTEN蛋白表達顯著降低(P0.01),且PTENmRNA和PTEN蛋白表達隨臨床分期的增高呈負相關(r分別為-0.997和-0.710,P0.01)；高、中分化組(Gleason評分S7)和低分化組(Gleason評分≥8)的PTENmRNA和PTEN蛋白的表達均顯著降低(P0.01),且隨Gleason評分(病理分級)的增高呈負相關(r分別為-0.672和-0.409,P0.01)。ARmRNA和AR蛋白的表達在PCa早期高于BPH (P0.01),隨腫瘤臨床分期的增高呈顯著降低(P0.01),且ARmRNA和AR蛋白的表達與PCa臨床分期呈負相關(r分別為-0.785和-0.860,P0.01)；ARmRNA和AR蛋白在高、中分化組(Gleason評分夕)PCa中的表達顯著高于低分化組(Gleason評分8)(P0.01),而在低分化組(Gleason評分8)的表達顯著降低(P0.01),ARmRNA和AR蛋白的表達與Gleason評分(病理分級)呈負相關(r分別為-0.560和-0.709,P0.01)。在PCa臨床分期增高的進程中,PTENmRNA與ARmRNA的表達、PTEN蛋白與AR蛋白的表達存在相關性(r分別為0.641和0.557,P0.01)。根據(jù)以上結果我們認為,隨著PCa臨床分期、Gleason評分(病理分級)的增高,PTEN與AR的表達呈顯著減低,二者表達具有相關性。第二部分主要內容是PTEN基因對PC3細胞Rafl磷酸化負調控作用的實驗研究。PTEN基因的抑癌作用以及AR在PCa特別是AIPC發(fā)生中的作用與多個細胞轉導信號通路有關,如PI3K/AKT、MAPK/ERK等。PTEN和AR可通過對信號通路中的信號蛋白磷酸化的促進和抑制來發(fā)揮作用,而信號通路中的各信號蛋白又經(jīng)通路內部以及信號通路間的相互作用完成調控效應,觀察PTEN對信號通路中關鍵環(huán)節(jié)的作用有助于揭示AIPC發(fā)生機制的分子生物學基礎。PTEN對PI3K/AKT信號通路中AKT的作用較為明確,而PTEN在MAPK/ERK信號通路中除Ras、MEK、ERK外是否存在其他的作用點,是我們本部分研究的重點。根據(jù)MAPK/ERK信號通路的作用特點,我們選定通路中的信號蛋白Rafl作為研究對象,在FTS (150μmol/L)抑制Ras活性、MK2206 2HC1(3μmol/L)抑制AKT活性處理的PC3細胞中觀察PTEN表達變化的狀態(tài)下磷酸化Raf1的表達變化,旨在揭示PTEN基因表達變化對Raf-1磷酸化的影響。實驗結果顯示,PTEN過表達狀態(tài)下磷酸化Rafl明顯減少(P0.01),灰度分析表明,PTEN過表達后磷酸化Raft減少61.1%(P0.01)；干擾PTEN的狀態(tài)下磷酸化Raft明顯增加(P0.01),灰度分析表明,干擾PTEN使其表達降低后磷酸化Raf-1增加75.1%(P0.01)。本研究提示,PTEN某因表達前列腺癌PC3細胞Raf1磷酸化呈負相關關系,Raf1是PTEN在MAPK/ERK信號轉導通路中除Ras、MEK、ERK以外新的作用位點。本研究有助于揭示前列腺癌的發(fā)生機制并可針對PTEN、Rafl以及MEK等信號通路中關鍵信號蛋白作為靶點進行治療干預。第三部分的主要內容是PTEN基因通過負調控Raf1磷酸化,調節(jié)凋亡蛋白進而影響PC3細胞凋亡的實驗研究。細胞凋亡是細胞重要的生理功能之一,是由基因調控的細胞主動死亡的過程。細胞凋亡不僅在維持機體細胞增殖與生存的動態(tài)平衡中具有重要作用,同時也對腫瘤的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生影響。PTEN基因能負調控MAPK/ERK信號通路中Raf1的磷酸化,進而可影響MEK1/2、ERK1/2的活性。而MAPK/ERK信號通路可經(jīng)相關的途徑作用于細胞凋亡的過程。我們在PTEN基因負調控Rafl磷酸化的基礎上,經(jīng)FTS (150pmol/L)抑制Ras活性、MK2206 2HC1(3μmol/L)抑制AKT活性,觀察PTEN基因表達變化引起Rafl磷酸化改變的同時對PC3細胞凋亡的影響。實驗結果顯示,PTEN基因過表達時,磷酸化Raft表達減低,光鏡下PC3細胞出現(xiàn)凋亡的形態(tài)改變,CCK-8檢測的細胞活力為(49.60+0.52)%,細胞活力較對照組減低(P0.01),流式細胞儀檢測PC3細胞凋亡率為(25.07+0.25)%,細胞凋亡率較對照組增加(P0.01),同時凋亡蛋白caspase-8、caspase-9、caspase-12、caspase-3和促凋亡蛋白Bax呈高表達,而抗凋亡蛋白Bcl-2則呈低表達(P0.01)；對PTEN基因進行干擾后,PTEN表達減低,磷酸化Raf1表達增加,CCK-8檢測的細胞活力為(113.45±1.16)%,細胞活力較對照組增高(P0.01),流式細胞儀檢測PC3細胞凋亡率為(0.133±0.058)%,細胞凋亡率較對照組減低(P0.01),同時檢測到凋亡蛋白caspase-8、caspase-9、caspase-12、caspase-3和促凋亡蛋白Bax的表達減低,而抗凋亡蛋白Bcl-2則呈高表達(P0.01)。本研究提示,PTEN基因可通過負調控磷酸化Raf1調節(jié)MAPK/ERK信號通路活性,進而影響PC3細胞的凋亡。針對包括Raf1在內的MAPK/ERK信號通路的關鍵信號蛋白以及細胞凋亡的核心因子,如caspase家族、Bcl-2/Bax等,可為研究PCa以及AIPC的診斷和治療新靶點提供分子生物學理論基礎。
[Abstract]:The relationship between the expression of PTEN and the expression of PTEN and the expression of PTEN was significantly decreased ( P0.01 ) , and the expression of PTEN and PTEN was negatively correlated with the development of PCa . The expression of ARmRNA and AR protein was significantly higher in PCa than in BPH ( P0.01 ) , and the expression of ARmRNA and AR protein was negatively correlated with the clinical stage of PCa ( P 0.01 ) . The expression of ARmRNA and AR protein was significantly lower in the high and middle differentiation group ( Gleason score 8 ) ( P0.01 ) . The expression of ARmRNA and AR protein was negatively correlated with Gleason score ( pathological grade ) ( r = - 0.560 and - 0.709 , P0.01 ) . The expression of PTENmRNA and ARmRNA was correlated with the expression of ARmRNA ( r = 0.641 and 0.557 , P0.01 ) . The expression of PTEN in MAPK / ERK signaling pathway was significantly decreased ( P0.01 ) . The expression of caspase - 8 , caspase - 9 , caspase - 12 , caspase - 3 and pro - apoptotic protein Bax were decreased ( P0.01 ) .

【學位授予單位】：昆明醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R737.25

【參考文獻】

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1 延敏博;孫華賓;劉燕;徐白生;;PTEN甲基化及其異常表達與膀胱移行細胞癌的關系[J];第三軍醫(yī)大學學報;2012年12期

2 樓慧玲;杜洪;丘惠嫦;朱國輝;;雄激素受體表達在前列腺癌中的意義[J];廣東醫(yī)學;2009年03期

3 張子彥;雄激素受體的研究進展[J];國外醫(yī)學(分子生物學分冊);2002年02期

4 吳剛,那彥群,孔祥田,宓培,夏同禮,薛兆英,郭應祿;BPH組織中雄激素受體與轉化生長因子βI型受體表達的相關性研究[J];海南醫(yī)學;2005年11期

5 王林;何朝宏;;前列腺系統(tǒng)10點穿刺活檢術的臨床價值[J];河南外科學雜志;2009年01期

6 甘道舉;江軍;陳善勤;賴建平;王學華;孫廣運;牟江洪;;雄激素受體在雄激素非依賴性前列腺癌的表達[J];臨床泌尿外科雜志;2006年04期

7 袁雪鋒;劉軍;孫宏斌;;絲裂原活化蛋白激酶信號通路與激素非依賴性前列腺癌的關系及治療進展[J];現(xiàn)代泌尿外科雜志;2011年02期

8 丁濤;車文駿;陳同玨;;前列腺癌組織中性激素受體表達的分析[J];中華男科學雜志;2006年01期

9 楊俠;楊軍嶺;王玨;王磊;付強;;PTEN蛋白表達與前列腺癌病理分期的關系[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2011年22期

10 蔣宏毅;趙曉昆;鐘朝暉;姚干;王蔭槐;張磊;歐陽時鋒;謝續(xù)標;彭龍開;易東生;張選志;揚羅艷;劉任;黃循;;PTEN/MMAC1/TEP1、TGF-β1在前列腺癌及前列腺增生中的表達及其意義[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學雜志;2008年09期

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本文編號：1548815