本文關(guān)鍵詞： 張力蛋白同源第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶基因(PTEN) 雄激素受體 Raf1 PC3 前列腺腫瘤 細(xì)胞凋亡　出處：《昆明醫(yī)科大學(xué)》2014年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：前列腺癌(PCa)是多發(fā)于老年男性的惡性腫瘤,隨著其發(fā)病率的增高,特別是激素非依賴性前列腺癌(AIPC)治療效果和疾病預(yù)后的不佳,對(duì)PCa發(fā)生發(fā)展機(jī)制的研究日趨受到人們關(guān)注。本論文分為三個(gè)部分。第一部分主要就PTEN基因在PCa的表達(dá)及其與雄激素受體(AR)表達(dá)的相關(guān)性作探討和分析。PTEN基因是繼p53之后的又一抑癌基因,具有脂質(zhì)磷酸酶和蛋白磷酸酶雙重活性,其表達(dá)缺失與多種惡性腫瘤的發(fā)生有關(guān),包括PCa。PCa組織中PTEN基因表達(dá)情況的檢測(cè)對(duì)PCa發(fā)生機(jī)制的研究及其預(yù)后判斷具有重要價(jià)值。與此同時(shí),AR在維持前列腺的生長(zhǎng)發(fā)育、正常功能發(fā)揮以及前列腺增生癥(BPH)、PCa的發(fā)生發(fā)展過程中具有重要作用。我們經(jīng)超聲引導(dǎo)下穿刺取材,對(duì)41例病理診斷PCa的病灶組織和30例病理診斷BPH的病灶組織,通過RT-PCR方法檢測(cè)穿刺取材組織的PTEN和AR表達(dá),并經(jīng)Western blot方法驗(yàn)證,分析PTEN和AR的表達(dá)與PCa臨床分期、Gleason評(píng)分(病理分級(jí))的關(guān)系以及PTEN與AR表達(dá)的相關(guān)性,旨在研究PTEN和AR的表達(dá)與PCa病程進(jìn)展的關(guān)系以及二者在PCa中表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果顯示,與BPH比較,各臨床分期的PCa組織中PTENmRNA和PTEN蛋白表達(dá)顯著降低(P0.01),且PTENmRNA和PTEN蛋白表達(dá)隨臨床分期的增高呈負(fù)相關(guān)(r分別為-0.997和-0.710,P0.01)；高、中分化組(Gleason評(píng)分S7)和低分化組(Gleason評(píng)分≥8)的PTENmRNA和PTEN蛋白的表達(dá)均顯著降低(P0.01),且隨Gleason評(píng)分(病理分級(jí))的增高呈負(fù)相關(guān)(r分別為-0.672和-0.409,P0.01)。ARmRNA和AR蛋白的表達(dá)在PCa早期高于BPH (P0.01),隨腫瘤臨床分期的增高呈顯著降低(P0.01),且ARmRNA和AR蛋白的表達(dá)與PCa臨床分期呈負(fù)相關(guān)(r分別為-0.785和-0.860,P0.01)；ARmRNA和AR蛋白在高、中分化組(Gleason評(píng)分夕)PCa中的表達(dá)顯著高于低分化組(Gleason評(píng)分8)(P0.01),而在低分化組(Gleason評(píng)分8)的表達(dá)顯著降低(P0.01),ARmRNA和AR蛋白的表達(dá)與Gleason評(píng)分(病理分級(jí))呈負(fù)相關(guān)(r分別為-0.560和-0.709,P0.01)。在PCa臨床分期增高的進(jìn)程中,PTENmRNA與ARmRNA的表達(dá)、PTEN蛋白與AR蛋白的表達(dá)存在相關(guān)性(r分別為0.641和0.557,P0.01)。根據(jù)以上結(jié)果我們認(rèn)為,隨著PCa臨床分期、Gleason評(píng)分(病理分級(jí))的增高,PTEN與AR的表達(dá)呈顯著減低,二者表達(dá)具有相關(guān)性。第二部分主要內(nèi)容是PTEN基因?qū)C3細(xì)胞Rafl磷酸化負(fù)調(diào)控作用的實(shí)驗(yàn)研究。PTEN基因的抑癌作用以及AR在PCa特別是AIPC發(fā)生中的作用與多個(gè)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)信號(hào)通路有關(guān),如PI3K/AKT、MAPK/ERK等。PTEN和AR可通過對(duì)信號(hào)通路中的信號(hào)蛋白磷酸化的促進(jìn)和抑制來發(fā)揮作用,而信號(hào)通路中的各信號(hào)蛋白又經(jīng)通路內(nèi)部以及信號(hào)通路間的相互作用完成調(diào)控效應(yīng),觀察PTEN對(duì)信號(hào)通路中關(guān)鍵環(huán)節(jié)的作用有助于揭示AIPC發(fā)生機(jī)制的分子生物學(xué)基礎(chǔ)。PTEN對(duì)PI3K/AKT信號(hào)通路中AKT的作用較為明確,而PTEN在MAPK/ERK信號(hào)通路中除Ras、MEK、ERK外是否存在其他的作用點(diǎn),是我們本部分研究的重點(diǎn)。根據(jù)MAPK/ERK信號(hào)通路的作用特點(diǎn),我們選定通路中的信號(hào)蛋白R(shí)afl作為研究對(duì)象,在FTS (150μmol/L)抑制Ras活性、MK2206 2HC1(3μmol/L)抑制AKT活性處理的PC3細(xì)胞中觀察PTEN表達(dá)變化的狀態(tài)下磷酸化Raf1的表達(dá)變化,旨在揭示PTEN基因表達(dá)變化對(duì)Raf-1磷酸化的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,PTEN過表達(dá)狀態(tài)下磷酸化Rafl明顯減少(P0.01),灰度分析表明,PTEN過表達(dá)后磷酸化Raft減少61.1%(P0.01)；干擾PTEN的狀態(tài)下磷酸化Raft明顯增加(P0.01),灰度分析表明,干擾PTEN使其表達(dá)降低后磷酸化Raf-1增加75.1%(P0.01)。本研究提示,PTEN某因表達(dá)前列腺癌PC3細(xì)胞Raf1磷酸化呈負(fù)相關(guān)關(guān)系,Raf1是PTEN在MAPK/ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中除Ras、MEK、ERK以外新的作用位點(diǎn)。本研究有助于揭示前列腺癌的發(fā)生機(jī)制并可針對(duì)PTEN、Rafl以及MEK等信號(hào)通路中關(guān)鍵信號(hào)蛋白作為靶點(diǎn)進(jìn)行治療干預(yù)。第三部分的主要內(nèi)容是PTEN基因通過負(fù)調(diào)控Raf1磷酸化,調(diào)節(jié)凋亡蛋白進(jìn)而影響PC3細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究。細(xì)胞凋亡是細(xì)胞重要的生理功能之一,是由基因調(diào)控的細(xì)胞主動(dòng)死亡的過程。細(xì)胞凋亡不僅在維持機(jī)體細(xì)胞增殖與生存的動(dòng)態(tài)平衡中具有重要作用,同時(shí)也對(duì)腫瘤的發(fā)生發(fā)展產(chǎn)生影響。PTEN基因能負(fù)調(diào)控MAPK/ERK信號(hào)通路中Raf1的磷酸化,進(jìn)而可影響MEK1/2、ERK1/2的活性。而MAPK/ERK信號(hào)通路可經(jīng)相關(guān)的途徑作用于細(xì)胞凋亡的過程。我們?cè)赑TEN基因負(fù)調(diào)控Rafl磷酸化的基礎(chǔ)上,經(jīng)FTS (150pmol/L)抑制Ras活性、MK2206 2HC1(3μmol/L)抑制AKT活性,觀察PTEN基因表達(dá)變化引起Rafl磷酸化改變的同時(shí)對(duì)PC3細(xì)胞凋亡的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,PTEN基因過表達(dá)時(shí),磷酸化Raft表達(dá)減低,光鏡下PC3細(xì)胞出現(xiàn)凋亡的形態(tài)改變,CCK-8檢測(cè)的細(xì)胞活力為(49.60+0.52)%,細(xì)胞活力較對(duì)照組減低(P0.01),流式細(xì)胞儀檢測(cè)PC3細(xì)胞凋亡率為(25.07+0.25)%,細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組增加(P0.01),同時(shí)凋亡蛋白caspase-8、caspase-9、caspase-12、caspase-3和促凋亡蛋白Bax呈高表達(dá),而抗凋亡蛋白Bcl-2則呈低表達(dá)(P0.01)；對(duì)PTEN基因進(jìn)行干擾后,PTEN表達(dá)減低,磷酸化Raf1表達(dá)增加,CCK-8檢測(cè)的細(xì)胞活力為(113.45±1.16)%,細(xì)胞活力較對(duì)照組增高(P0.01),流式細(xì)胞儀檢測(cè)PC3細(xì)胞凋亡率為(0.133±0.058)%,細(xì)胞凋亡率較對(duì)照組減低(P0.01),同時(shí)檢測(cè)到凋亡蛋白caspase-8、caspase-9、caspase-12、caspase-3和促凋亡蛋白Bax的表達(dá)減低,而抗凋亡蛋白Bcl-2則呈高表達(dá)(P0.01)。本研究提示,PTEN基因可通過負(fù)調(diào)控磷酸化Raf1調(diào)節(jié)MAPK/ERK信號(hào)通路活性,進(jìn)而影響PC3細(xì)胞的凋亡。針對(duì)包括Raf1在內(nèi)的MAPK/ERK信號(hào)通路的關(guān)鍵信號(hào)蛋白以及細(xì)胞凋亡的核心因子,如caspase家族、Bcl-2/Bax等,可為研究PCa以及AIPC的診斷和治療新靶點(diǎn)提供分子生物學(xué)理論基礎(chǔ)。
[Abstract]:The relationship between the expression of PTEN and the expression of PTEN and the expression of PTEN was significantly decreased ( P0.01 ) , and the expression of PTEN and PTEN was negatively correlated with the development of PCa . The expression of ARmRNA and AR protein was significantly higher in PCa than in BPH ( P0.01 ) , and the expression of ARmRNA and AR protein was negatively correlated with the clinical stage of PCa ( P 0.01 ) . The expression of ARmRNA and AR protein was significantly lower in the high and middle differentiation group ( Gleason score 8 ) ( P0.01 ) . The expression of ARmRNA and AR protein was negatively correlated with Gleason score ( pathological grade ) ( r = - 0.560 and - 0.709 , P0.01 ) . The expression of PTENmRNA and ARmRNA was correlated with the expression of ARmRNA ( r = 0.641 and 0.557 , P0.01 ) . The expression of PTEN in MAPK / ERK signaling pathway was significantly decreased ( P0.01 ) . The expression of caspase - 8 , caspase - 9 , caspase - 12 , caspase - 3 and pro - apoptotic protein Bax were decreased ( P0.01 ) .

【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R737.25

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 延敏博;孫華賓;劉燕;徐白生;;PTEN甲基化及其異常表達(dá)與膀胱移行細(xì)胞癌的關(guān)系[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2012年12期

2 樓慧玲;杜洪;丘惠嫦;朱國輝;;雄激素受體表達(dá)在前列腺癌中的意義[J];廣東醫(yī)學(xué);2009年03期

3 張子彥;雄激素受體的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊(cè));2002年02期

4 吳剛,那彥群,孔祥田,宓培,夏同禮,薛兆英,郭應(yīng)祿;BPH組織中雄激素受體與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子βI型受體表達(dá)的相關(guān)性研究[J];海南醫(yī)學(xué);2005年11期

5 王林;何朝宏;;前列腺系統(tǒng)10點(diǎn)穿刺活檢術(shù)的臨床價(jià)值[J];河南外科學(xué)雜志;2009年01期

6 甘道舉;江軍;陳善勤;賴建平;王學(xué)華;孫廣運(yùn);牟江洪;;雄激素受體在雄激素非依賴性前列腺癌的表達(dá)[J];臨床泌尿外科雜志;2006年04期

7 袁雪鋒;劉軍;孫宏斌;;絲裂原活化蛋白激酶信號(hào)通路與激素非依賴性前列腺癌的關(guān)系及治療進(jìn)展[J];現(xiàn)代泌尿外科雜志;2011年02期

8 丁濤;車文駿;陳同玨;;前列腺癌組織中性激素受體表達(dá)的分析[J];中華男科學(xué)雜志;2006年01期

9 楊俠;楊軍嶺;王玨;王磊;付強(qiáng);;PTEN蛋白表達(dá)與前列腺癌病理分期的關(guān)系[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年22期

10 蔣宏毅;趙曉昆;鐘朝暉;姚干;王蔭槐;張磊;歐陽時(shí)鋒;謝續(xù)標(biāo);彭龍開;易東生;張選志;揚(yáng)羅艷;劉任;黃循;;PTEN/MMAC1/TEP1、TGF-β1在前列腺癌及前列腺增生中的表達(dá)及其意義[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2008年09期

，

本文編號(hào)：1548815