本文關(guān)鍵詞：MicroRNA-126在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)以及對(duì)細(xì)胞株786-O生物學(xué)行為的影響

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【摘要】：目的:研究人腎透明細(xì)胞癌與癌旁正常腎組織中mi RNA-126的表達(dá)情況,分析mi RNA-126的表達(dá)與腎癌病理分級(jí)、臨床分期之間存在的相關(guān)性。研究mi RNA-126影響腎癌細(xì)胞生物學(xué)行為的機(jī)制。方法:1.通過real-time q PCR的方法檢測30例cc RCC及癌旁正常腎組織中mi RNA-126的表達(dá)情況,研究mi RNA-126表達(dá)與cc RCC患者的病理分級(jí)和臨床分期的關(guān)系。2.運(yùn)用real-time q PCR的方法檢測腎癌細(xì)胞株786-O和人腎小管上皮細(xì)胞株HK-2中mi RNA-126的表達(dá);應(yīng)用Lipofectamine RNAi MAX轉(zhuǎn)染has-mir-126-5p于腎癌細(xì)胞株786-O,上調(diào)其表達(dá),實(shí)時(shí)定量PCR方法檢測其表達(dá)情況,并通過MTT、Transwell侵襲實(shí)驗(yàn)、Annexin V/PI雙染法分別觀察轉(zhuǎn)染后細(xì)胞在增殖、侵襲力和凋亡方面的變化。結(jié)果:1.30例cc RCC組織和癌旁組織中,cc RCC組織中mi RNA-126的相對(duì)表達(dá)量明顯低于癌旁組織中的相對(duì)表達(dá)量,癌旁為癌組織表達(dá)倍數(shù)最大為15.49,最小為0.37,存在顯著差異(P0.05)。30例cc RCC標(biāo)本根據(jù)病理分級(jí)進(jìn)行分組,mi RNA-126在高分化組中表達(dá)的相對(duì)含量為36.63±5.38,中、低分化組為19.96±7.28,沒有顯著差異(P0.05)。在不同臨床分期的樣本中,Ⅰ期mi RNA-126表達(dá)的相對(duì)含量為37.05±6.38,Ⅱ-Ⅲ期mi RNA-126表達(dá)的相對(duì)含量24.03±6.15,不同分期之間沒有顯著差異(P0.05)。2.與腎癌細(xì)胞株786-O中mi RNA-126的表達(dá)量相比,HK-2細(xì)胞株的表達(dá)量明顯較高。轉(zhuǎn)染786-O細(xì)胞株成功后,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞mi RNA-126的相對(duì)表達(dá)量為42.86±7.01,顯著高于陰性對(duì)照組的相對(duì)表達(dá)量27.46±8.43(P0.05)。MTT法檢測人腎癌細(xì)胞株轉(zhuǎn)染后48小時(shí)增殖情況,實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞相對(duì)存活率為80.82±0.47,陰性對(duì)照組98.87±0.27,存在顯著差異(P0.01)。Transwell侵襲試驗(yàn)顯示,實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的數(shù)目平均為33.89±2.80,陰性對(duì)照組為53.67±2.23。與陰性對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組明顯降低,存在顯著差異(P0.05)。Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡,結(jié)果顯示實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞凋亡率為22.56±1.13,陰性對(duì)照組的細(xì)胞凋亡率為7.20±0.26。與陰性對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組的細(xì)胞凋亡率明顯增高,存在顯著差異(P0.05)。結(jié)論:1.mi RNA-126-5p在cc RCC中的表達(dá)量明顯低于癌旁正常腎組織中的表達(dá),其表達(dá)與腎透明細(xì)胞癌的腫瘤分級(jí)和臨床分期無明顯相關(guān)性。mi RNA-126-5p在人腎癌細(xì)胞株786-O中的表達(dá)明顯低于人腎小管上皮細(xì)胞株HK-2中的表達(dá)。2.has-mi RNA-126-5p可以成功轉(zhuǎn)染人腎癌細(xì)胞株786-O;轉(zhuǎn)染后,mi RNA-126-5p在786-O中的表達(dá)明顯上調(diào)。mi RNA-126-5p在人腎癌細(xì)胞株786-O的高表達(dá),能夠使786-O細(xì)胞增殖受到抑制,侵襲力降低,凋亡率增加。
【關(guān)鍵詞】：腎透明細(xì)胞癌 mi RNA-126 實(shí)時(shí)定量PCR 腎癌細(xì)胞株786-O 細(xì)胞增殖 細(xì)胞侵襲力 細(xì)胞凋亡
【學(xué)位授予單位】：蘭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R737.11
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 英文縮略詞9-10
• 前言10-12
• 1 實(shí)驗(yàn)材料12-15
• 1.1 PCR材料組織來源12
• 1.2 細(xì)胞來源12
• 1.3 主要試劑12-14
• 1.3.1 RT-q PCR實(shí)驗(yàn)試劑12-13
• 1.3.2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)主要試劑13-14
• 1.4 實(shí)驗(yàn)儀器14-15
• 1.4.1 組織PCR實(shí)驗(yàn)主要儀器14
• 1.4.2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)主要儀器14-15
• 2 實(shí)驗(yàn)方法15-23
• 2.1 RT-q PCR實(shí)驗(yàn)方法15-18
• 2.1.1 提取組織總RNA15
• 2.1.2 Total RNA濃度及純度測定15
• 2.1.3 Poly(A)加尾反應(yīng)和轉(zhuǎn)錄15-17
• 2.1.4 mi RNA實(shí)時(shí)定量PCR檢測17
• 2.1.5 實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析17-18
• 2.2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法18-22
• 2.2.1 冷凍細(xì)胞復(fù)蘇18
• 2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)18
• 2.2.3 RT-q PCR檢測細(xì)胞株中mi RNA1265p的表達(dá)18-19
• 2.2.3.1 提取細(xì)胞總RNA(含mi RNA)19
• 2.2.3.2 檢測細(xì)胞株中mi RNA-126 的表達(dá)19
• 2.2.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染19-20
• 2.2.4.1 轉(zhuǎn)染步驟20
• 2.2.4.2 轉(zhuǎn)染效率20
• 2.2.5 轉(zhuǎn)染后腎癌細(xì)胞株 786-O中mi RNA1265p的表達(dá)測定20
• 2.2.6 MTT實(shí)驗(yàn)步驟20-21
• 2.2.7 細(xì)胞侵襲力實(shí)驗(yàn)21
• 2.2.8 Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡21-22
• 2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析22-23
• 3 結(jié)果23-33
• 3.1 mi RNA1265p在30例標(biāo)本腎癌組織與癌旁組織表達(dá)情況23-24
• 3.2 mi RNA1265p表達(dá)與腎癌組織的病理分級(jí)和臨床分期的關(guān)系24-26
• 3.3 miRNA1265p在人腎癌細(xì)胞株 786-O與人正常腎小管上皮細(xì)胞株HK-2中的表達(dá)情況26-27
• 3.4 細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率27
• 3.5 mi RNA1265p在人腎癌細(xì)胞轉(zhuǎn) 786-O轉(zhuǎn)染后的表達(dá)情況27-28
• 3.6 MTT法檢測轉(zhuǎn)染后人腎癌細(xì)胞株細(xì)胞增殖的情況28-29
• 3.7 Transwell侵襲試驗(yàn)29-31
• 3.8 Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡31-33
• 4 討論33-37
• 5 結(jié)論37-38
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 綜述40-49
• 參考文獻(xiàn)46-49
• 在學(xué)期間的研究成果49-50
• 致謝50

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本文編號(hào)：1105205