本文關(guān)鍵詞：三七總皂苷對大鼠急性重癥胰腺炎胰腺細(xì)胞鈣超載的影響

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【摘要】：[研究背景]急性重癥胰腺炎(severe acute pancreatitis, SAP)是外科中常見的急腹癥。在臨床工作中我們發(fā)現(xiàn)其病情變化迅速,各種并發(fā)癥處理較為復(fù)雜,而且目前其患病死亡率較高,可高達10-20%。由于其發(fā)病機制尚不完全清楚,治療方面十分棘手。目前對SAP的研究主要集中在胰酶自身消化、白細(xì)胞過度激活、微循環(huán)障礙、高脂血癥、細(xì)菌感染這幾點。隨著研究程度深入及研究水平的提高,”鈣超載”學(xué)說愈來愈引起人們的重視。細(xì)胞中Ca2+在細(xì)胞中起到重要作用,參與并調(diào)節(jié)各項生理功能。腫瘤壞死因子-α(TNF-α)是炎癥發(fā)生過程中一個重要的細(xì)胞因子。在急性重癥胰腺炎的各項研究中發(fā)現(xiàn),其表達量與病情的危重程度呈正相關(guān)。細(xì)胞中Ca2+的大量聚集,可以引起細(xì)胞鈣超載的發(fā)生,會導(dǎo)致細(xì)胞功能障礙,甚至于死亡。當(dāng)前,細(xì)胞損傷的的眾多機制中,“鈣超載被視為共同途徑”。我們實驗觀察SAP發(fā)病過程中胰腺細(xì)胞鈣超載的程度和胰腺組織內(nèi)TNF-α的表達量。探索性研究”鈣超載學(xué)說”和”炎癥介質(zhì)學(xué)說”表達是否具有相關(guān)性,即胰腺細(xì)胞內(nèi)Ca2+的增加是否可以導(dǎo)致炎癥因子的表達升高。“三七”作為云南省特色植物,是中藥中最珍貴的藥物之一。其提取物三七總皂苷(Panax Notoginseng Saponins, PNS)在臨床多種疾病中也廣為使用。針對胰腺炎治療,PNS應(yīng)用更為頻繁,但是當(dāng)前對于其治療胰腺炎的機制方面仍然是停留在“炎性因子”、“氧自由基”、“微循環(huán)”等方面,但是對于“鈣超載”還未有所涉及。三磷酸肌醇:(Inositol Trisphosphate, IP3)作為第二信使,參與細(xì)胞內(nèi)Ca2+的調(diào)控。針對關(guān)于PNS對SAP治療機制的影響目前在“鈣超載”還未有報道,我們的課題通過檢測IP3和細(xì)胞內(nèi)Ca2+來探究PNS是否可以通過影響IP3的表達,來對細(xì)胞“鈣超載”進行調(diào)節(jié)。舊的]本課題研究SAP時,胰腺細(xì)胞“鈣超載”的程度與炎癥因子TNF-α表達量的相關(guān)性；進一步探究PNS對對急性重癥胰腺炎腺泡細(xì)胞鈣超載的影響以及胰腺的保護作用。[方法]健康成年雄性Sprague-Dawley (SD)大鼠120只,體重200-250g,隨機分成三組。①假手術(shù)組(SO組)：開腹后輕輕翻動十二指腸和胰腺,關(guān)腹；②SAP組：將5%牛磺膽酸鈉(1.0mL/kg)采用經(jīng)腸壁逆行胰膽管注射法來誘導(dǎo)SAP模型。③PNS組(三七總皂苷預(yù)干預(yù)組)：在進行胰腺炎模型建模前,腹腔注射PNS(50 mg/ml血塞通注射液(0.1ml/100g)).注射后1h,按照SAP組方法建立急性重癥胰腺炎模型。各組大鼠分別于術(shù)后4h、8h、12h、24h使用乙醚麻醉處死,收集腹水、血清、胰腺標(biāo)本,計算腹水量。生物化學(xué)方法分別測定血清淀粉酶(AMS)活性和血清Ca2+濃度。ELISA法測定胰腺組織IP3水平。HE染色胰腺,光鏡觀察胰腺病理學(xué)評分。使用流式細(xì)胞儀技術(shù)(Flow Cytometry/Financal Capacity Model, FCM)檢測細(xì)胞內(nèi)Ca2+的熒光強度(Fluorescence Intensity, FI),通過熒光強度反應(yīng)細(xì)胞內(nèi)Ca2+的濃度。免疫組化S-P法檢測胰腺組織內(nèi)TNF-a表達量。Spearman分析細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度與胰腺組織TNF-α表達量的相關(guān)性。[結(jié)果]1.血清淀粉酶(AMS)：三組大鼠AMS在各時間點之間是有有顯著差異(P0.01),SAP組和PNS組較SO組AMS均明顯升高(P0.01),而各時間點的SAP組與PNS組組間比較沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。2.血清Ca2’：SAP組及PNS組在4h、8h、12h時間點上血清Ca2+濃度低于SO組,差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01),而SAP組與PNS組進行比較,PNS組較高于SAP組,但是差異無顯著性(P0.05)。24h時,SAP組和PNS組較高于SO組,但是差異沒有統(tǒng)計學(xué)意義,三組間沒有顯著差異性(P0.05)。3.胰腺組織內(nèi)IP3：SAP組、PNS組2組在各個時間IP3含量均比同時間點SO組顯著增高(P0.05)。SAP組與PNS組兩兩比較,在4h、8h時間點兩者無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),12h和24h的IP3含量具有統(tǒng)計學(xué)差異,PNS組均低于SAP組(P0.05)。4.腹水量：SAP組及PNS組建模后在個時間點打開腹腔均可見大量血性腹水產(chǎn)生。其中前兩組較SO組均有顯著差異(P0.05)。在4h時,SAP組和PNS組之間差異不明顯,沒有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。這兩組在8h、12h、24h比較時有顯著性差異(P0.05),PNS組較SAP組腹水量明顯減少。5.細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強度：使用熒光顯微鏡下觀察,可見胰腺腺泡細(xì)胞內(nèi)鈣離子的顯影,呈現(xiàn)綠光。通過細(xì)胞內(nèi)Ca2+的熒光強度(Fluorescence Intensity,FI)來反映細(xì)胞內(nèi)Ca2+的濃度大小。統(tǒng)計數(shù)據(jù)得出：在4h這個時間點,SAP組和PNS組均較SO組高,有統(tǒng)計學(xué)差異(F=103.399),但是SAP組和PNS組之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。在8h、12h、24h三個時間點,三組大鼠細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度之間均有統(tǒng)計學(xué)差異(F=334.101,288.060,296.392,P0.05)。SAP組較PNS組其細(xì)胞內(nèi)Ca2+熒光強度顯著升高(P0.05),具有統(tǒng)計學(xué)差異。6.胰腺組織病理學(xué)損傷：SAP組和PNS組病理學(xué)評分較SO組顯著升高(P0.05),在4h SAP組和PNS組之間沒有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。在8h、12h、24h三個時間點病理學(xué)評分分析可知：PNS組較SAP組均顯著降低(P0.05)7.TNF-α的表達量：胰腺組織通過免疫組化處理后,在細(xì)胞質(zhì)內(nèi)呈現(xiàn)黃褐色,我們通過Image pro plus軟件檢測其平均光密度(Average Optical Density,AOD)通過平均觀密度值反映胰腺組織內(nèi)TNF-α的表達量。數(shù)據(jù)提示：在各個時間點三組的TNF-α平均觀密度之間均有統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05),SAP組和PNS組的平均觀密度較SO組均顯著升高。而在4h,8h,12h這三個時間點,PNS組較SAP組均有顯著降低,兩者之間均有統(tǒng)計學(xué)差異。8.相關(guān)性研究：應(yīng)用Spearman等級相關(guān)分析和Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示：在各時間點大鼠胰腺細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度均與大鼠胰腺組織TNF-α表達量呈正相關(guān)性(P0.05),細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高與TNF-α表達量增加有相關(guān)性。[結(jié)論]急性重癥胰腺炎發(fā)病時細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度升高,發(fā)生“鈣超載”。鈣超載的程度與其炎癥介質(zhì)TNF-α的表達呈正相關(guān)�！扳}超載”在SAP發(fā)病過程中起到“觸發(fā)點”作用。三七總皂苷可以通過抑制胰腺組織IP3的表達,減輕細(xì)胞內(nèi)鈣超載的程度,對胰腺組織起到保護作用。
【關(guān)鍵詞】：PNS SAP 鈣超載 IP_3
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• ABSTRACTS10-15
• 前言15-17
• 材料與方法17-29
• 結(jié)果29-42
• 討論42-54
• 結(jié)論54-55
• 參考文獻55-61
• 綜述61-68
• 參考文獻66-68
• 碩士在讀期間發(fā)表的文章68-69
• 致謝69

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王宏志;劉俊;宋慧;李磊;侯曉華;;烏司他丁聯(lián)合三七總皂甙對急性胰腺炎大鼠氧自由基的影響[J];世界華人消化雜志;2007年17期

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本文編號：990474