發(fā)布時間：2017-10-01 17:08

  本文關(guān)鍵詞：尼古丁對下丘腦室旁內(nèi)大細胞神經(jīng)元活動的影響

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【摘要】：[目的]在大鼠急性腦片上,利用全細胞膜片鉗記錄結(jié)合生物素染色技術(shù)和神經(jīng)藥理學(xué)手段研究尼古丁對下丘腦室旁核(PVN)神經(jīng)內(nèi)大細胞神經(jīng)元的自發(fā)性放電頻率、膜電位及突觸后電流的影響機制。[材料與方法]生后14-21天(Postnatal day 14-21, P14-P21)的Wistar雄性大鼠,使用異氟烷麻醉后斷頭取腦,使用振動切片機制備厚度為250 μ m內(nèi)含PVN的下丘腦切片。在室溫下,將下丘腦切片置于沖95%02和5%C02混合氣體的人工腦脊液中孵育1小時以上。人工腦脊液由以下成分構(gòu)成(in mM):118 NaCl,3 KCl,1 MgCl2.6H2O,1 NaH2PO4.2H2O,25 NaHCO3,10 D-Glucose,2 CaCl2; pH:7.3-7.4,滲透壓為295-305 mOsM。記錄電極內(nèi)灌裝10微升電極內(nèi)液,電極阻抗為4-6 M Ω。聯(lián)合全細胞膜片鉗、生物素染色和神經(jīng)藥理學(xué)手段研究尼古丁對PVN神經(jīng)內(nèi)大神經(jīng)元自發(fā)性放電頻率、膜電位和sIPSP的影響。神經(jīng)元全細胞膜片鉗記錄是通過Axon-700B膜片鉗放大器、Digidata 1400A系列數(shù)模轉(zhuǎn)換器、Clampex10.4數(shù)據(jù)包和電腦來實現(xiàn)的,數(shù)據(jù)采集后存于移動硬盤和DVD光盤用于分析,只有記錄完整且基線穩(wěn)定的實驗數(shù)據(jù)用于數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計學(xué)分析。實驗結(jié)束后切片用4%多聚甲醛固定,用ABC試劑盒進行染色,封片,照相,分析記錄細胞的組織學(xué)特征。電生理實驗數(shù)據(jù)分析采用Clampfit 10.4軟件,采用SPSS軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計學(xué)分析,均數(shù)的比較采用配對T檢驗,P0.05時認為有統(tǒng)計學(xué)差異。[結(jié)果](1)在電流鉗記錄模式下,灌流尼古丁(1μM)可導(dǎo)致38.7%的PVN神經(jīng)內(nèi)大細胞神經(jīng)元放電頻率降出現(xiàn)可逆性降低,伴有膜電位超極化。(2)尼古丁對PVN神經(jīng)內(nèi)大細胞神經(jīng)元自發(fā)性活動的抑制作用具有劑量依存性,半數(shù)有效抑制濃度為17μM。(3)尼古丁對PVN神經(jīng)內(nèi)大細胞神經(jīng)元自發(fā)性活動的抑制作用對河豚毒素(TTX,0.5μM)敏感,同時TTX可阻斷神經(jīng)元自發(fā)性動作電位的發(fā)生以及尼古丁誘導(dǎo)的膜電位超極化。(4)尼古丁可顯著增加PVN神經(jīng)內(nèi)大細胞神經(jīng)元抑制性突觸電位(IPSP)的發(fā)生頻率,但不增力IPSP振幅。[結(jié)論]本研究表明尼古丁通過增加抑制性傳入而降低PVN神經(jīng)內(nèi)大細胞神經(jīng)元自發(fā)性放電頻率,提示尼古丁可通過突觸前行為抑制PVN神經(jīng)內(nèi)大細胞神經(jīng)元活動,并參與調(diào)節(jié)PVN神經(jīng)元內(nèi)分泌調(diào)節(jié)活動。
【關(guān)鍵詞】：尼古丁 下丘腦室旁核 大細胞神經(jīng)元 自發(fā)性放電 抑制性突觸電位
【學(xué)位授予單位】：延邊大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R741
【目錄】：

• 摘要6-7
• Abstract7-9
• 英文縮寫詞表9-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 材料與方法13-16
• 2.1 實驗材料13-14
• 2.1.1 實驗動物13
• 2.1.2 實驗儀器13
• 2.1.3 試劑與藥品13-14
• 2.2 實驗方法14-16
• 2.2.1 腦切片準備14
• 2.2.2 全細胞膜片鉗記錄14
• 2.2.3 生物素染色14-15
• 2.2.4 統(tǒng)計學(xué)分析15-16
• 第三章 結(jié)果16-23
• 3.1 尼古丁對PVN內(nèi)的神經(jīng)元自發(fā)性放電活動的影響16-17
• 3.2 河豚毒素對尼古丁誘發(fā)PVN神經(jīng)內(nèi)大細胞神經(jīng)元抑制作用的影響17
• 3.3 尼古丁對PVN神經(jīng)內(nèi)大細胞神經(jīng)元抑制性突觸后電位活動的影響17-23
• 第四章 討論23-25
• 第五章 結(jié)論25-26
• 參考文獻26-29
• 綜述29-44
• 參考文獻37-44
• 致謝44-45
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文45

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本文編號：954629