本文關(guān)鍵詞：苓甘五味姜辛湯對寒飲伏肺型哮喘大鼠cAMP-PKA通路相關(guān)分子表達的影響

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【摘要】：目的:本課題采用寒冷刺激加卵蛋白腹腔注射和霧化吸入的方法建立寒飲伏肺型哮喘大鼠模型,觀察苓甘五味姜辛湯對寒飲伏肺型哮喘大鼠肺組織病理變化及cAMPPKA信號通路相關(guān)基因和蛋白的影響,從而闡明苓甘五味姜辛湯治療寒飲伏肺型哮喘的作用機理。方法:將90只大鼠稱重,用隨機數(shù)字表法分為空白組、模型組、苓甘五味姜辛湯高、中、低劑量組及西藥組,每組15只�？瞻捉M以PBS溶液代替OVA致敏和霧化吸入激發(fā),其余各組均采用寒冷刺激加卵蛋白腹腔注射和霧化吸入的方法建立寒飲伏肺型哮喘大鼠模型,待模型制備成功后,空白組和模型組灌胃NS,中藥各組灌胃相應(yīng)濃度的苓甘五味姜辛湯,西藥組灌胃地塞米松,每日灌胃1次,并連續(xù)27d。末次灌胃24 h后,給大鼠腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉后并固定小鼠后,股動脈取血離心后凍存;剖開胸腔,然后迅速結(jié)扎并取出右肺,存于-80℃冰箱冰凍保存,以便用于抽提mRNA和提取蛋白用于RT-qPCR和Western blot等技術(shù)檢測。結(jié)果:1.與空白組比較,各治療組大鼠和模型組光鏡下觀察肺組織均有不同程度的氣道損傷和炎癥細胞浸潤的炎癥改變。給予苓甘五味姜辛湯治療后與模型組比較,各治療組的大鼠肺組織病理切片評分均降低,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);2.與空白組比較,模型組大鼠血清cAMP、PKA、AQP5、CREB含量明顯降低(P0.05);經(jīng)過藥物治療后,各治療組與模型組比較,大鼠中血清cAMP、PKA、AQP5、CREB含量均升高(P0.05),且苓甘五味姜辛湯高劑量組和西藥組作用最顯著(P0.05);3.與空白組比較,模型組大鼠中cAMP、PKA、AQP5、CREBmRNA表達量明顯降低(P0.05);各治療組與模型組比較,大鼠中cAMP、PKA、AQP5、CREB mRNA表達量均升高(P0.05),且苓甘五味姜辛湯高劑量組和西藥組作用最顯著(P0.05);4.與空白組比較,模型組大鼠中cAMP、PKA、AQP5、CREB蛋白相對表達量明顯降低(P0.05);各治療組與模型組比較,大鼠中cAMP、PKA、AQP5、CREB蛋白相對表達量升高(P0.05),且苓甘五味姜辛湯高劑量組和西藥組作用最顯著(P0.05)。結(jié)論:1.本研究寒飲伏肺型哮喘大鼠模型復(fù)建成功,并且苓甘五味姜辛湯可以通過調(diào)節(jié)氣道液體分泌、減輕炎癥反應(yīng)進而起到治療寒飲伏肺型哮喘的作用;2.cAMP、PKA、AQP5、CREB基因和蛋白的表達水平與寒飲伏肺型哮喘病情的活動性和嚴(yán)重程度有一定的相關(guān)性,說明寒飲伏肺型哮喘大鼠肺組織中cAMP、PKA、AQP5、CREB的表達水平能夠反映肺組織的損傷程度,進而推斷出cAMP、PKA、AQP5、CREB的表達水平對哮喘病情的評估及治療后的效果判定可能存在潛在的指導(dǎo)意義;3.苓甘五味姜辛湯的治療作用可能與上調(diào)cAMP、PKA、AQP5、CREB基因的表達水平,增加氣道液體分泌的作用有關(guān)。提示cAMP、PKA、AQP5、CREB的基因位點可能是苓甘五味姜辛湯治療寒飲伏肺型哮喘的關(guān)鍵靶位;4.苓甘五味姜辛湯對寒飲伏肺型哮喘大鼠cAMP、PKA、AQP5、CREB蛋白的表達具有上調(diào)作用,進而可以減輕氣道炎癥反應(yīng),治療寒飲伏肺型哮喘。提示苓甘五味姜辛湯對寒飲伏肺型哮喘的治療作用與上調(diào)cAMP、PKA、AQP5、CREB蛋白表達水平有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：苓甘五味姜辛湯 寒飲伏肺型哮喘 cAMP PKA AQP5
【學(xué)位授予單位】：甘肅中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 英文縮略詞表10-11
• 前言11-13
• 第一部分 實驗研究13-46
• 1.技術(shù)路線圖13-14
• 2 實驗材料14-15
• 2.1 實驗動物14
• 2.2 藥物與試劑14-15
• 2.3 主要實驗儀器15
• 3 實驗方法15-23
• 3.1 動物分組與造模15
• 3.2 給藥15-16
• 3.3 標(biāo)本采集16-17
• 3.3.1 股動脈取血16
• 3.3.2 肺組織保存16-17
• 3.4 標(biāo)準(zhǔn)的制備與檢測17-22
• 3.4.1 病理切片的制備17
• 3.4.2 采用雙抗體夾心ELISA法測定cAMP、PKA、AQP5、CREB含量17
• 3.4.3 采用RT-qPCR法檢測大鼠肺組織中cAMP、PKA、AQP5、CREB的水平及表達17-20
• 3.4.4 采用Western bolt法檢測cAMP、PKA、AQP5、CREB蛋白相對量的表達20-22
• 3.5 統(tǒng)計方法22-23
• 4 實驗結(jié)果23-34
• 4.1 一般情況23
• 4.2 大鼠肺組織光鏡下形態(tài)學(xué)變化（見附圖）及病理評分23-25
• 4.3 各組大鼠血清cAMP、PKA、AQP5、CREB的水平25-28
• 4.4 各組大鼠肺組織cAMP、PKA、AQP5、CREB的基因表達28-31
• 4.5 各組大鼠肺組織cAMP、PKA、AQP5、CREB蛋白相對量的表達31-34
• 5 討論34-41
• 5.1 cAMP-PKA信號通路與哮喘34-36
• 5.2 寒飲伏肺型哮喘的理論探討36-37
• 5.3 苓甘五味姜辛湯的組方分析37-38
• 5.4 與小青龍湯的比較38-39
• 5.5 模型制備的方法選擇39-41
• 結(jié)語41-42
• 參考文獻42-44
• 附錄44-46
• 第二部分 文獻綜述46-61
• 1 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對哮喘的認(rèn)識46-49
• 1.1 哮喘46
• 1.2 發(fā)病機制研究46-47
• 1.3 治療情況47-48
• 1.4 哮喘急性發(fā)作期的治療48-49
• 1.5 哮喘的長期治療49
• 2 中醫(yī)學(xué)對支氣管哮喘的認(rèn)識49-52
• 2.1 概述49
• 2.2 哮喘的病因病機49-50
• 2.3 哮喘的辨證論治50-52
• 3 苓甘五味姜辛湯近5年研究概況52-57
• 3.1 概述52-53
• 3.2 實驗研究53-54
• 3.3 臨床研究54-55
• 3.4 小結(jié)55-57
• 參考文獻57-61
• 致謝61-62
• 在學(xué)期間主要研究成果62

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本文編號：944052