本文關鍵詞：寧夏枸杞總黃酮對高糖誘導氧化應激損傷保護作用的研究

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【摘要】：目的體外實驗明確寧夏枸杞總黃酮(TFLB)對高糖(HG)誘導人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)氧化應激損傷模型的保護作用;體內實驗研究TFLB對鏈脲佐菌素(STZ)誘導建立糖尿病(DM)大鼠損傷模型的保護作用;為初步探討TFLB對氧化應激損傷保護作用的分子機制做一些基礎研究。方法1.體外培養(yǎng)HUVEC,采用HG誘導建立氧化應激損傷模型,實驗分為正常對照組、HG損傷模型組、枸杞黃酮保護組(100、200、400 mg·L-1)、陽性對照組(維生素C)。以MTT法測定細胞存活率、試劑盒測定細胞中乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)釋放量及活性的變化;以酶聯(lián)免疫分析測定(ELISA)法測定人血管性血友病因子(v WF)、人可溶性血栓調節(jié)蛋白(s TM)、人可溶性血管內皮細胞蛋白C受體(s EPCR),觀察TFLB對HG誘導血管內皮細胞損傷的保護作用。2.體內實驗采用STZ誘導建立DM大鼠模型的方法,將成模的DM大鼠隨機分為DM模型組和TFLB干預組。干預組大鼠TFLB灌胃4周,正常對照組及DM模型組大鼠予以等量生理鹽水灌胃,每兩周測空腹血糖一次。灌胃滿4周,尾靜脈采血測空腹血糖后,將大鼠麻醉,胸腔采血,測定血脂的變化;ELISA法測定大鼠v WF、s TM、s EPCR變化;摘取胰腺、主動脈組織進行HE染色和免疫組化,觀察TFLB對DM大鼠臟器超微結構的影響及病理生理變化的改善功效。結果1.TFLB對HG誘導建立HUVEC氧化應激損傷模型的保護作用(體外實驗)。(1)成功建立了HG誘導的HUVEC損傷模型,確定了HG的造模濃度為40mmol L-1,損傷時間為48小時。(2)TFLB干預后,與HG損傷模型組相比較,枸杞黃酮干預組MDA釋放量明顯降低、LDH釋放量及活性下降,SOD的活性明顯增高,NO、NOS生成量及活性明顯增高,具有顯著性差異(P0.05,P0.01),在一定濃度范圍內與TFLB呈劑量依賴性關系。(3)TFLB干預后,與HG損傷模型組相比較,枸杞黃酮干預組s TM含量呈現(xiàn)下降趨勢;各枸杞黃酮干預組的v WF、、s EPCR含量明顯下降,差異具有顯著性(P0.05,P0.01)。2.TFLB對STZ誘導建立糖尿病(DM)大鼠損傷模型保護作用(體內實驗)。(1)TFLB干預后可以延緩、推遲血糖升高的進程,對血脂有明顯降低趨勢。(2)TFLB干預后,與DM模型組相比較,各TFLB干預組v WF、s TM、s EPCR含量均呈下降趨勢,差異具有顯著性(P0.05,P0.01)。(3)TFLB干預后,與DM模型組相比較,隨TFLB劑量的升高,大鼠胰島數(shù)量及島內分泌細胞數(shù)有所增多,細胞排列相對均勻規(guī)整,胰島結構、形態(tài)基本趨于正常,細胞空泡變性相對較少。(4)TFLB干預后,與DM模型組相比較,低劑量TFLB干預組大鼠主動脈內膜仍見明顯增厚,且有山巒樣突起,血管形態(tài)改變,粗細不均,部分可見斑塊,外膜有輕度損傷,內皮細胞增生,排列仍不規(guī)整;高劑量TFLB干預組大鼠主動脈內膜有輕度增厚,內皮細胞輕度增生、排列尚規(guī)整,外膜未見明顯損傷。結論1.TFLB對HG誘導的HUVEC損傷模型干預后,提高了HUVEC中抗氧化酶(SOD)的活性,增加NO、NOS的釋放量及活性,降低了MDA和LDH的釋放量,下調了血管內皮功能相關因子v WF、s TM、s EPCR的含量,實現(xiàn)對血管內皮細胞的保護作用,初步作用機制可能與寧夏枸杞總黃酮抗自由基,保護內皮細胞線粒體,減輕高糖所致的脂質氧化有關。2.TFLB對STZ誘導的DM模型干預后,能明顯保護DM大鼠胰島功能,改善大鼠胰島素抵抗,延緩血糖升高速度,調節(jié)血脂代謝紊亂,進而推遲DM病程進展,減輕高血糖對心血管內皮細胞損傷,起到保護心血管系統(tǒng)作用。
【關鍵詞】：枸杞總黃酮 人臍靜脈內皮細胞 糖尿病大鼠 高糖 氧化應激
【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 符號說明10-13
• 前言13-16
• 第一部分 寧夏枸杞總黃酮對高糖誘導損傷人臍靜脈內皮細胞保護作用的研究16-28
• 材料與方法16-21
• 結果21-25
• 討論25-27
• 結論27-28
• 第二部分 寧夏枸杞總黃酮對STZ誘導的DM大鼠保護作用的研究28-48
• 材料與方法28-34
• 結果34-42
• 討論42-47
• 結論47-48
• 全文總結與展望48-49
• 參考文獻49-53
• 綜述53-62
• 參考文獻59-62
• 攻讀學位期間發(fā)表的論文62-63
• 致謝63-64
• 個人簡歷64

【參考文獻】

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本文編號：931135