本文關(guān)鍵詞：甘露糖敏感性綠膿桿菌制劑抑制肝癌上皮—間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用

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【摘要】：目的：原發(fā)性肝癌(肝癌)是一種惡性程度高、早期浸潤和轉(zhuǎn)移性強(qiáng)的腫瘤,我國發(fā)病人數(shù)約占全球的55%;在腫瘤相關(guān)死亡中僅次于肺癌,位居第二。其病因和發(fā)病機(jī)制尚未確定。隨著原發(fā)性肝癌早期診斷、早期治療,總體療效已有明顯提高。但肝癌術(shù)后的高復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移仍是制約進(jìn)一步提高肝癌遠(yuǎn)期療效的瓶頸。研究表明上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial mesenchymal transitions, EMT)是肝癌發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移的重要原因,但其發(fā)生的機(jī)制不明。腫瘤細(xì)胞高表達(dá)甘露糖是其細(xì)胞惡變常見的特點之一,因此腫瘤細(xì)胞表面甘露糖被認(rèn)為是腫瘤治療的一個重要靶點。甘露糖敏感性綠膿桿菌制劑(Pseudomonasaeruginosa mannose sensitive hamemagglutination vaccine, PA-MSHA)是基因工程合成的表達(dá)甘露糖敏感性I型菌毛的滅活綠膿桿菌制劑,被證實能夠通過其菌毛識別結(jié)合表達(dá)甘露糖的腫瘤細(xì)胞而發(fā)揮普通滅活綠膿桿菌制劑不具有細(xì)胞毒作用,是一種新型廣譜免疫調(diào)節(jié)劑。我們前期研究發(fā)現(xiàn)PA-MSHA能夠通過抑制肝癌EMT的發(fā)生而抑制其轉(zhuǎn)移,但是其相關(guān)信號通路及作用機(jī)制目前尚不明確。本研究欲在前期研究的基礎(chǔ)上進(jìn)一步探索PA-MSHA抑制肝癌EMT發(fā)生的分子機(jī)制。方法：(1)培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞株MHCC97L及HepG2,按照需要分為對照組；低劑量PA-MSHA組(1×108/ml)：高劑量PA-MSHA組(2 × 108/ml);高劑量PA-MSHA(2 ×108/ml)+甘露糖(100mM)組。顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,免疫熒光技術(shù)及Western Blot檢測PA-MSHA作用前后肝癌細(xì)胞EMT相關(guān)基因及轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)情況。(2)將5×106/ml肝癌細(xì)胞注射于4-6周齡BALB/cnu/nu雄性裸鼠皮下,4周后無菌條件下取出皮下腫瘤,切成2mm大小植入戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉的裸鼠肝臟。于接種后第3天開始用藥,分生理鹽水腹腔注射組(0.2ml/d)及PA-MSHA腹腔注射組(0.2ml/d),每組12只。治療持續(xù)40d,于種植后第6周末處死動物。免疫組化及RT-PCR技術(shù)檢測PA-MSHA治療前后裸鼠模型肝癌組織E-cadherin及轉(zhuǎn)錄因子snail和Pslug表達(dá)情況。結(jié)果：(1)Western Blot結(jié)果顯示與對照組相比PA-MSHA治療組肝癌細(xì)胞E-cadherin表達(dá)顯著增強(qiáng),而vimentin、fibronecin、NF-κB以及轉(zhuǎn)錄因子snail和slug的表達(dá)顯著降低,其效應(yīng)呈現(xiàn)劑量依賴性,而外源性甘露糖顯著抑制PA-MSHA對上述蛋白的調(diào)控作用。免疫熒光也顯示PA-MSHA上調(diào)肝癌細(xì)胞E-cadherin表達(dá)而抑制vimentin的表達(dá),顯微鏡下細(xì)胞形態(tài)也由不規(guī)則的梭形轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄬σ?guī)則的卵圓形。(2)免疫組化顯示荷瘤裸鼠經(jīng)PA-MSHA治療后肝癌組織E-cadherin的表達(dá)顯著增強(qiáng),而snail mRNA及slug mRNA的轉(zhuǎn)錄則受到顯著抑制(P0.05)。結(jié)論：PA-MSHA可以通過識別結(jié)合肝細(xì)胞癌細(xì)胞表面的甘露糖顯著抑制肝癌EMT的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：肝細(xì)胞癌 綠膿桿菌 甘露糖 上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R735.7
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 符號說明10-12
• 前言12-14
• 材料與方法14-31
• 實驗結(jié)果31-32
• 討論32-37
• 結(jié)論37-38
• 附錄一表格38-39
• 附錄二圖片39-41
• 參考文獻(xiàn)41-45
• 致謝45-46
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文46-47
• 學(xué)位論文評閱及答辯情況表47

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 林濤;宋純;王輝;;晚期結(jié)直腸癌術(shù)中使用銅綠假單胞桿菌制劑的生存期觀察[J];中國肺癌雜志;2009年06期

2 宋愛琳;曹農(nóng);;銅綠假單胞菌注射液防治乳腺癌術(shù)后皮下積液的臨床研究[J];遼寧醫(yī)學(xué)雜志;2012年02期

3 朱江;張國利;魏斌;;銅綠假單胞菌注射液在老年晚期胃癌手術(shù)中的臨床應(yīng)用[J];遼寧醫(yī)學(xué)雜志;2012年03期

4 王浦華;沈通一;葛海燕;;銅綠假單胞菌制劑在惡性腫瘤中的輔助治療作用[J];世界華人消化雜志;2010年30期

5 鄭朝旭;馮強(qiáng);徐泉;謝玉權(quán);梁建明;袁興華;;胃癌患者銅綠假單胞菌制劑術(shù)中腹腔置藥對免疫功能的影響[J];中國腫瘤;2012年05期

6 王浩;羅以;唐利立;;銅綠假單胞菌注射液治療乳腺癌癌性潰瘍的臨床研究[J];中南藥學(xué);2010年01期

7 王浩;唐利立;;銅綠假單胞菌注射液對人乳腺癌細(xì)胞的體外殺傷及促凋亡作用研究[J];中南藥學(xué);2010年04期

8 沈娣;王騰;杭曉聲;徐聞歡;;銅綠假單胞菌注射液聯(lián)合化療治療晚期胃癌的臨床觀察[J];中南藥學(xué);2011年07期

9 劉義冰;胡大利;周雨朦;黃綺玲;潘詩云;;銅綠假單胞菌注射液對多種人惡性腫瘤細(xì)胞株的增殖抑制作用[J];中國腫瘤臨床;2013年12期

10 林濤;宋純;王輝;;晚期結(jié)直腸癌術(shù)中使用銅綠假單胞菌注射液的長期療效探討[J];中國腫瘤臨床;2014年08期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

1 王浩;銅綠假單胞菌注射液（PA-MSHA）對乳腺癌治療作用及其機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2010年

2 劉哲斌;綠膿桿菌制劑對乳腺癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響及機(jī)制研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

3 徐聞歡;自噬抑制綠膿桿菌制劑PA-MSHA抗乳腺癌細(xì)胞增殖作用的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

4 趙欣e，

本文編號：868626