本文關(guān)鍵詞：糖腎合劑對糖尿病大鼠腎組織SOCS-1、TGF-β1、VEGF表達(dá)的影響

  更多相關(guān)文章： 糖尿病腎病 糖腎合劑 JAK/STAT信號通路 SOCS-1 TGF-β1 VEGF 炎癥反應(yīng)

【摘要】：背景和目的糖尿病腎病(DN)是糖尿病(DM)最常見的慢性并發(fā)癥之一,其發(fā)病率呈逐年上升趨勢。DN的發(fā)病機(jī)制涉及血流動力學(xué)異常、遺傳基因、氧化應(yīng)激、代謝紊亂、慢性炎癥狀態(tài)及細(xì)胞信號通路等多方面的因素。其中,炎癥因子引起的多條細(xì)胞信號通路的活化發(fā)揮了重要的作用,近年來研究表明,Janus激酶/信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄活化因子(JAK/STAT)信號通路的激活可引發(fā)腎組織的炎癥級聯(lián)放大反應(yīng),是調(diào)控炎癥基因表達(dá)的樞紐。在某些因素影響下,JAK/STAT通路可過度活化,導(dǎo)致轉(zhuǎn)化生長因子β1 (TGF-β1)在內(nèi)的一系列靶基因的生物學(xué)功能異�；钴S,從而引起增殖、炎癥、纖維化等一系列病理損害。細(xì)胞因子信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制蛋白-1 (SOCS-1)是JAK/STAT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的一個關(guān)鍵的負(fù)性調(diào)控因子,SOCS-1在腎臟的高表達(dá),可減輕DN的病理損害。同時血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)也參與了DN的發(fā)病機(jī)制,近年研究發(fā)現(xiàn),活化的JAK/STAT信號通路可調(diào)控VEGF的表達(dá)。糖腎合劑是由導(dǎo)師姚源璋教授根據(jù)多年臨床經(jīng)驗總結(jié)出來的中藥復(fù)方,在治療糖尿病腎病患者中取得較好的療效,組方切合糖尿病腎病中醫(yī)以氣陰兩虛為本,兼夾濕熱血瘀,毒損脈絡(luò)的病機(jī),具有益氣生津、活血通絡(luò)之功。在前期工作中,我們通過實驗證明了糖腎合劑組方中部分中藥可通過調(diào)節(jié)JAK/STAT通路保護(hù)腎臟。那么該方的整體療效與調(diào)節(jié)腎組織 SOCS-1、TGF-β1及VEGF的表達(dá)是否有關(guān)呢?本實驗通過觀察高、低兩種劑量糖腎合劑對糖尿病大鼠腎臟病變及腎組織SOCS-1、TGF-β1及VEGF表達(dá)的影響,并以血管緊張素Ⅱ (Ang Ⅱ) 1型受體拮抗劑氯沙坦鉀作陽性對照,探討糖腎合劑對糖尿病大鼠腎臟的保護(hù)作用,及其可能機(jī)制。研究方法1.糖尿病大鼠模型的建立：采用高脂飲食聯(lián)合小劑量鏈脲佐菌素(STZ)腹腔注射；成模標(biāo)準(zhǔn)：非空腹血糖16.7mmol/L。2.分組：將SD大鼠隨機(jī)分為正常對照組(N組)、糖尿病組(DM組)、糖腎合劑低劑量組(TS1組)、糖腎合劑高劑量組(TS2組)、氯沙坦鉀組(L組)。3.給藥方法：正常組、糖尿病組大鼠按15ml/Kg/d劑量給予生理鹽水,糖腎合劑高、低劑量組及氯沙坦鉀組大鼠皆按15ml/Kg/d劑量給予相應(yīng)的藥液。給藥干預(yù)共6周。4.療效評價方法：給藥結(jié)束后測定各組大鼠體重、血糖,24h尿蛋白定量；麻醉后腹主動脈采血檢測血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、血清白蛋白(ALB)；取腎,腎5.組織常規(guī)切片后行蘇木紫伊紅(HE)染色,光鏡下觀察腎組織病變；采用免疫組化法和免疫印跡(Western blotting)檢測糖尿病大鼠腎組織中SOCS-1、TGF-β1、 VEGF蛋白的表達(dá),應(yīng)用圖像分析軟件(Image-Pro Plus)進(jìn)行半定量分析,應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計分析軟件對實驗數(shù)據(jù)進(jìn)行性統(tǒng)計學(xué)處理,P0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義,P0.01為有顯著統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1.糖尿病組的24h尿蛋白定量、血肌酐、尿素氮均較正常組升高(P0.01),血清白蛋白較正常組降低(P0.01);與糖尿病組比較,糖腎合劑高、低劑量組,氯沙坦鉀組的24h尿蛋白定量均明顯減少(P0.01),血清白蛋白均明顯升高(P0.01),糖腎合劑高、低劑量組血肌酐、尿素氮也較糖尿病組下降(P0.05)；2.病理變化：光鏡可見正常組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)清晰,形態(tài)規(guī)則。糖尿病組大鼠腎小球系膜基質(zhì)中重度增生,呈彌漫性改變,球囊部分粘連,腎小管上皮細(xì)胞呈空泡變性,間質(zhì)可見炎癥細(xì)胞浸潤及纖維化。各治療組腎小球病變均較糖尿病組減輕,以糖腎合劑高劑量組及氯沙坦鉀組效果明顯。3.糖尿病組大鼠腎臟組織中SOCS-1、TGF-β1、VEGF蛋白表達(dá)均較正常組明顯增加(P0.01),與糖尿病組比較,糖腎合劑高劑量組、氯沙坦鉀組大鼠腎臟組織中SOCS-1表達(dá)進(jìn)一步增加(P0.01),糖腎合劑高、低劑量組,氯沙坦鉀組的大鼠腎臟組織中TGF-β1、VEGF表達(dá)減少(P0.01)；與糖腎合劑低劑量組比較,糖腎合劑高劑量組、氯沙坦組大鼠腎臟組織中TGF-β1、VEGF表達(dá)進(jìn)一步降低(P0.05)。結(jié)論糖腎合劑能夠有效降低糖尿病大鼠尿蛋白、血肌酐及尿素氮,升高血清白蛋白,可減輕糖尿病大鼠腎組織病理變化,這種對腎臟的保護(hù)作用可能與上調(diào)腎組織局部SOCS-1的表達(dá),負(fù)性調(diào)控JAK/STAT信號通路,抑制TGF-β1、VEGF的過表達(dá)有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病腎病 糖腎合劑 JAK/STAT信號通路 SOCS-1 TGF-β1 VEGF 炎癥反應(yīng)
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R259
【目錄】：

• 摘要7-9
• Abstract9-12
• 主要英文縮略詞簡表12-13
• 前言13-15
• 第一章 理論研究15-20
• 1. 中醫(yī)藥對糖尿病腎病機(jī)制的認(rèn)識及研究現(xiàn)狀15-17
• 1.1 糖尿病腎病的病因病機(jī)15-16
• 1.2 糖尿病腎病治法方藥的研究16-17
• 2. 現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對糖尿病腎病機(jī)制的認(rèn)識17-20
• 2.1 炎癥反應(yīng)與DN的關(guān)系17
• 2.2 JAK/STAT信號通路的概述17-18
• 2.3 SOCS-1在DN中的作用18
• 2.4 VEGF在DN中的致炎作用18-20
• 第二章 實驗研究20-36
• 1. 實驗材料20-21
• 1.1 實驗動物20
• 1.2 實驗藥物20
• 1.3 實驗試劑20
• 1.4 實驗儀器20-21
• 1.5 實驗常用液體配制21
• 2. 實驗方法21-26
• 2.1 動物模型的制備21-22
• 2.2 分組方法22
• 2.3 給藥方法22
• 2.4 標(biāo)本收集與測定22
• 2.5 腎組織病理學(xué)檢查(HE染色)22-23
• 2.6 免疫組化法檢測SOCS-1、TGF-β1、VEGF的表達(dá)23-24
• 2.7 免疫印跡法(Western blotting)檢測SOCS-1、VEGF蛋白的表達(dá)24-26
• 3. 統(tǒng)計學(xué)處理26
• 4. 實驗結(jié)果26-36
• 4.1 糖尿病大鼠成模率和死亡率26
• 4.2 體重變化26-27
• 4.3 生化指標(biāo)變化27-29
• 4.4 24小時尿蛋白定量比較29
• 4.5 腎臟病理改變29-30
• 4.6 免疫組化法分析腎臟SOCS-1、TGF-β1、VEGF的表達(dá)30-34
• 4.7 Western blotting法分析腎臟SOCS-1、VEGF的表達(dá)34-36
• 第三章 討論36-39
• 1 糖尿病大鼠模型的評價36
• 2 對本實驗最終糖尿病腎病模型成立的分析36-37
• 3 選擇氯沙坦鉀作為糖腎合劑陽性對照的原因37
• 4 對實驗結(jié)果的分析37
• 5 總結(jié)實驗設(shè)計的不足37-38
• 6 選擇糖腎合劑做為研究對象的理由38-39
• 結(jié)語39-40
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 攻讀碩士研究學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果44-45
• 致謝45

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本文編號：791831