發(fā)布時(shí)間：2017-08-31 01:27

  本文關(guān)鍵詞：基于微透析技術(shù)的青藤堿家兔關(guān)節(jié)腔局部藥動(dòng)學(xué)的可行性研究

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【摘要】：探索微透析探針的最佳植入部位和植入方法,建立了家兔膝關(guān)節(jié)腔中微透析探針的植入方法。考察不同影響因素對(duì)探針回收率和損失率的影響,為進(jìn)行青藤堿體內(nèi)微透析實(shí)驗(yàn)提供參考依據(jù)。探索微透析技術(shù)應(yīng)用于家兔關(guān)節(jié)局部藥動(dòng)學(xué)研究的可行性,建立了以微透析技術(shù)為核心的家兔關(guān)節(jié)腔局部藥動(dòng)學(xué)的關(guān)鍵技術(shù)和研究方法,為后續(xù)探討青藤堿外用制劑關(guān)節(jié)炎局部藥動(dòng)學(xué)及藥效學(xué)研究奠定方法學(xué)基礎(chǔ)。本課題的研究?jī)?nèi)容主要包括以下四部分：1.透析液中青藤堿定量分析方法的建立及確證建立透析液中青藤堿的UPLC測(cè)定方法。色譜柱：ACQUITY UPLC HSS C18 (2.1mm X 50 mm,1.8μm);流動(dòng)相組成：乙腈：水：乙二胺(30：70：0.25)；流速：0.3 ml·min-1;檢測(cè)波長(zhǎng)：265nm；柱溫：30℃。進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制、線性范圍考察、精密度及穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)等。在此色譜條件下,青藤堿峰形對(duì)稱,出峰保留時(shí)間為1.7min左右。課題組建立的透析液中青藤堿UPLC檢測(cè)方法可以將青藤堿與灌流液峰分離良好,并且青藤堿在檢測(cè)要求范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,色譜的專屬性、精密度等測(cè)定結(jié)果均符合實(shí)驗(yàn)要求,證明該方法可用。2.家兔關(guān)節(jié)腔徽透析探針植入方法的建立對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型家兔的各關(guān)節(jié)進(jìn)行解剖,觀察各關(guān)節(jié)的骨骼、韌帶及肌肉等生理結(jié)構(gòu),記錄各關(guān)節(jié)的解剖學(xué)特征,選擇合適的微透析探針,并確定探針的植入部位和植入點(diǎn),建立微透析探針的植入方法,并用X-射線檢查探針活性透析膜在關(guān)節(jié)腔中的位置。確定了家兔的后膝關(guān)節(jié)和膝關(guān)節(jié)外側(cè)膝眼作為微透析探針的植入部位和植入點(diǎn)。購買了瑞典CMA公司特制的CMA/20線性微透析探針,使用的是與探針配套的CMA系列的微透析裝置。在注射針頭和撕裂管的導(dǎo)引下,將微透析探針按照膝關(guān)節(jié)外側(cè)膝眼處水平方位穿刺法植入到家兔的關(guān)節(jié)腔中。通過X-射線檢查后,證明了所建立的探針的植入方法可以將探針的活性透析膜精準(zhǔn)的落在膝關(guān)節(jié)的腔隙中。該植入方法具有較好的可行性,并在對(duì)關(guān)節(jié)的局部藥動(dòng)學(xué)研究中比其他的植入方法更有優(yōu)勢(shì)。3.青藤堿微透析取樣方法的建立采用增量法(正透析法)和減量法(反透析法)測(cè)定青藤堿微透析探針的體外回收率和損失率,探討二者之間的關(guān)系,考察反透析法用于測(cè)定青藤堿微透析探針體內(nèi)回收率的可行性；考察灌流速度、濃度、溫度等不同因素對(duì)探針體外回收率的影響；考察了青藤堿微透析探針體內(nèi)、外回收率在14h內(nèi)的穩(wěn)定性以及相互之間存在的關(guān)系。建立了青藤堿體內(nèi)微透析實(shí)驗(yàn)的取樣方法,為了證明可以將微透析技術(shù)應(yīng)用在關(guān)節(jié)局部藥動(dòng)學(xué)的研究提供有力依據(jù)。在其他條件恒定不變時(shí),增量法測(cè)定的探針回收率與減量法測(cè)定的損失率近似相等,符合應(yīng)用反透析法的前提條件,證明了在進(jìn)行青藤堿體內(nèi)微透析實(shí)驗(yàn)時(shí)可以使用反透析法來校正探針的體內(nèi)回收率。在保持藥液濃度不變的條件下,探針的回收率和損失率均是隨著灌流速度的加快而呈下降的趨勢(shì)；灌流液中藥物濃度的變化對(duì)回收率幾乎無影響：探針的回收率與灌流液中乙醇的濃度百分比和溫度呈現(xiàn)一定的線性關(guān)系；探針的體外回收率和損失率在14h內(nèi)相對(duì)穩(wěn)定,高、低濃度灌流液下的探針的體內(nèi)回收率在14h內(nèi)也是相對(duì)穩(wěn)定的。確定了青滕堿體內(nèi)微透析取樣參數(shù)：灌注速度為2μL·min-1,取樣的間隔時(shí)間為1h,透析液取樣體積為120 μL。4.基于微透析技術(shù)的健康家兔關(guān)節(jié)局部藥動(dòng)學(xué)的可行性研究家兔在麻醉狀態(tài)時(shí)進(jìn)行關(guān)節(jié)微透析的預(yù)處理,將自制的青藤堿凝膠涂抹于家兔的膝關(guān)節(jié),將微透析探針按照建立的植入方法埋植到家兔的關(guān)節(jié)腔中,收集關(guān)節(jié)微透析液樣品,UPLC測(cè)定透析液中青藤堿濃度。使用反透析法測(cè)定體內(nèi)回收率,并對(duì)透析液濃度進(jìn)行校正,同時(shí)繪制青藤堿的相關(guān)藥時(shí)曲線,采用DASS2.1.1藥動(dòng)學(xué)軟件得到藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。反透析法計(jì)算出的探針體內(nèi)回收率為(15.82+2.12)%,3h內(nèi)探針回收率保持穩(wěn)定,青藤堿經(jīng)皮給藥后10h內(nèi)關(guān)節(jié)微透析液中還可檢測(cè)到青藤堿的存在,證明了所建立的微透析取樣方法可以用于青藤堿關(guān)節(jié)局部藥動(dòng)學(xué)的研究。
【關(guān)鍵詞】：微透析技術(shù) 青藤堿 超高液相色譜法 關(guān)節(jié)局部藥動(dòng)學(xué)
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5
【目錄】：

• 英漢縮略語對(duì)照表7-8
• 摘要8-10
• Abstract10-12
• 前言12-15
• 第一章 文獻(xiàn)綜述15-29
• 1. 微透析技術(shù)基本原理15
• 2. 微透析系統(tǒng)的基本組成15-16
• 3. 微透析探針的種類16
• 4. 微透析技術(shù)的特點(diǎn)16-18
• 5. 微透析技術(shù)的不足18
• 6. 微透析回收率的重要性及影響因素18-21
• 7. 微透析探針回收率的校正方法21-23
• 8. 微透析采樣的分析檢測(cè)技術(shù)23-25
• 9. 微透析技術(shù)的應(yīng)用25-29
• 第二章 透析液中青藤堿定量分析方法的建立及確證29-33
• 1. 儀器與試劑29
• 2. 方法和結(jié)果29-32
• 2.1 青藤堿對(duì)照品儲(chǔ)備液的配制29
• 2.2 青藤堿供試品溶液的制備29-30
• 2.3 色譜條件30
• 2.4 方法的專屬性30-31
• 2.5 線性關(guān)系考察31
• 2.6 精密度試驗(yàn)31-32
• 2.7 準(zhǔn)確度試驗(yàn)32
• 2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)32
• 2.9 定量限與檢測(cè)限32
• 3. 結(jié)論32
• 4. 討論32-33
• 第三章 家兔關(guān)節(jié)腔微透析探針植入方法的建立33-45
• 1 植入部位的可行性分析33-36
• 1.1 器械和試劑33
• 1.2 方法和結(jié)果33-35
• 1.2.1 肘關(guān)節(jié)的解剖學(xué)特征33-34
• 1.2.2 踝關(guān)節(jié)的解剖學(xué)特征34
• 1.2.3 膝關(guān)節(jié)的解剖學(xué)特征34-35
• 1.3 結(jié)論35
• 1.4 討論35-36
• 2 植入點(diǎn)的可行性分析36-41
• 2.1 器械和試劑36
• 2.2 方法和結(jié)果36-40
• 2.2.1 家兔膝關(guān)節(jié)的X-射線圖37
• 2.2.2 膝關(guān)節(jié)伸直時(shí)對(duì)植入點(diǎn)的研究37-38
• 2.2.3 膝關(guān)節(jié)屈膝狀態(tài)下進(jìn)針植入點(diǎn)的研究38-40
• 2.3 結(jié)論40-41
• 3 微透析探針植入方法和位置的確定41-44
• 3.1 儀器、試劑、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物41
• 3.2 方法和結(jié)果41-43
• 3.2.1 探針類型的選擇41-42
• 3.2.2 植入方法的建立42
• 3.2.3 探針植入位置的確定42-43
• 3.3 結(jié)論43
• 3.4 討論43-44
• 4 本章總結(jié)44-45
• 第四章 青藤堿微透析取樣方法建立45-64
• 1 灌流液預(yù)處理對(duì)微透析探針回收率的影響45-48
• 1.1 儀器和試劑45
• 1.2 方法和結(jié)果45-47
• 1.2.1 分析條件45-46
• 1.2.2 含青藤堿生理鹽水液的制備46
• 1.2.3 過濾對(duì)微透析探針回收率的影響46
• 1.2.4 超聲脫氣時(shí)間對(duì)微透析探針回收率的影響46
• 1.2.5 攪拌速率對(duì)微透析探針回收率的影響46
• 1.2.6 數(shù)據(jù)處理46-47
• 1.3 結(jié)論47
• 1.4 討論47-48
• 2 灌流液流速對(duì)微透析回收率的影響48-51
• 2.1 儀器和試劑48
• 2.2 方法和結(jié)果48-50
• 2.2.1 分析條件48
• 2.2.2 含青藤堿生理鹽水液的制備48
• 2.2.3 增量法測(cè)定流速對(duì)相對(duì)回收率RR的影響48-49
• 2.2.4 減量法測(cè)定流速對(duì)相對(duì)損失率RL的影響49
• 2.2.5 數(shù)據(jù)處理49-50
• 2.3 結(jié)論50-51
• 2.4 討論51
• 3 濃度對(duì)探針回收率的影響51-56
• 3.1 儀器和試劑51
• 3.2 方法和結(jié)果51-55
• 3.2.1 分析條件51
• 3.2.2 含青藤堿生理鹽水液的制備51
• 3.2.3 增量法測(cè)定濃度對(duì)相對(duì)回收率RR的影響51-52
• 3.2.4 減量法測(cè)定濃度對(duì)相對(duì)損失率RL的影響52-53
• 3.2.5 增量法中透析液濃度與介質(zhì)濃度的關(guān)系53-54
• 3.2.6 減量法中灌流液與透析液濃度之差與灌流液濃度的關(guān)系54-55
• 3.3 結(jié)論55-56
• 4 溫度及乙醇濃度對(duì)探針回收率的影響56-59
• 4.1 儀器和試劑56
• 4.2 方法和結(jié)果56-58
• 4.2.1 分析條件56
• 4.2.2 含青藤堿生理鹽水液的制備56
• 4.2.3 溫度對(duì)探針回收率的影響56-57
• 4.2.4 乙醇濃度對(duì)探針回收率的影響57-58
• 4.3 結(jié)論58
• 4.4 討論58-59
• 5 探針回收率的穩(wěn)定性考察59-61
• 5.1 儀器和試劑59
• 5.2 方法和結(jié)果59-61
• 5.2.1 分析條件59
• 5.2.2 含青藤堿生理鹽水液的制備59
• 5.2.3 體外相對(duì)回收率的穩(wěn)定性考察59-60
• 5.2.4 體外相對(duì)損失率的穩(wěn)定性考察60
• 5.2.5 高、低濃度下的體內(nèi)相對(duì)損失率的穩(wěn)定性考察60
• 5.2.6 數(shù)據(jù)處理60-61
• 5.3 結(jié)論61
• 6 體外回收率與體內(nèi)回收率的關(guān)系61-64
• 6.1 儀器和試劑61
• 6.2 方法和結(jié)果61-63
• 6.2.1 分析條件61
• 6.2.2 含青藤堿生理鹽水液的制備61-62
• 6.2.3 采用增量法測(cè)定體外相對(duì)回收率RR62
• 6.2.4 采用減量法法測(cè)定體外相對(duì)損失率RL62
• 6.2.5 采用減量法測(cè)定家兔體內(nèi)相對(duì)損失率RL62-63
• 6.2.6 數(shù)據(jù)處理63
• 6.3 結(jié)論63-64
• 第五章 微透析技術(shù)應(yīng)用于青藤堿關(guān)節(jié)局部藥動(dòng)學(xué)采樣的可行性研究64-69
• 1. 儀器和試劑64-65
• 2. 方法和結(jié)果65-67
• 2.1 色譜條件65
• 2.2 關(guān)節(jié)局部的藥動(dòng)學(xué)研究65-66
• 2.2.1 探針的前處理65
• 2.2.2 家兔關(guān)節(jié)微透析手術(shù)方法65
• 2.2.3 探針植入后的操作65-66
• 2.2.4 關(guān)節(jié)局部的藥動(dòng)學(xué)實(shí)驗(yàn)66
• 2.2.5 微透析探針體內(nèi)回收率校正66
• 2.2.6 探針的后處理66
• 2.3 數(shù)據(jù)處理66-67
• 3. 結(jié)論67
• 4. 討論67-69
• 全文結(jié)論69-70
• 致謝70-71
• 參考文獻(xiàn)71-80
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷80

【參考文獻(xiàn)】

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