本文關(guān)鍵詞：缺氧條件下血府逐瘀湯對(duì)血管新生影響的研究

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【摘要】：研究目的通過比較缺氧和非缺氧條件下,不同濃度(1.25%、2.5%、5%)血府逐瘀膠囊大鼠含藥血清在不同時(shí)間點(diǎn)(24h、48h、72h)對(duì)人微血管內(nèi)皮細(xì)胞(HMEC-1)的活性、增殖、遷移、黏附能力和體外血管腔形成能力的影響,探討血府逐瘀湯在缺氧條件下對(duì)血管新生的影響作用,從細(xì)胞水平明確血府逐瘀湯對(duì)血管新生影響的作用機(jī)制,為血府逐瘀湯的臨床應(yīng)用提供科學(xué)的理論依據(jù)。研究方法1制備含藥血清：SPF級(jí)雄性SD大鼠40只,體重200±10g,隨機(jī)分為藥物組和空白對(duì)照組2個(gè)組,每組20只。藥物組以人口服劑量的12倍(0.41g/kg)灌胃,空白對(duì)照組以等體積生理鹽水灌胃。血府逐瘀膠囊按劑量溶于生理鹽水中,連續(xù)灌胃7天,2次／天,于末次灌胃結(jié)束兩小時(shí)以戊巴比妥鈉(2%濃度,0.75ml/kg)腹腔注射麻醉,腹主動(dòng)脈采血,分離獲取血清,56℃,30min水浴滅活,然后在無菌室超凈工作臺(tái)內(nèi)用0.22微米的微孔濾膜過濾除菌,分裝,置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?細(xì)胞分組及細(xì)胞各項(xiàng)功能檢測：將常規(guī)培養(yǎng)的人微血管內(nèi)皮細(xì)胞(Human Microvascular Endothelial Cell-1, HMEC-1)隨機(jī)分為缺氧條件(1%02)培養(yǎng)組和非缺氧條件培養(yǎng)組,每個(gè)組又分為三個(gè)濃度(1.25%、2.5%、5%)血府逐瘀含藥血清亞組及各濃度的空白血清對(duì)照組,誘導(dǎo)處理時(shí)間為24h、48h、72h。利用MTT法觀察細(xì)胞活性、流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞增殖能力、Transwell、室遷移實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞遷移能力、黏附實(shí)驗(yàn)測定細(xì)胞黏附能力、體外血管腔形成實(shí)驗(yàn)觀察體外血管腔形成能力,以闡明缺氧狀態(tài)及血府逐瘀膠囊含藥血清對(duì)HMEC-1細(xì)胞血管新生相關(guān)功能的影響。研究結(jié)果1、缺氧環(huán)境三個(gè)濃度(1.25%、2.5%、5%)空白血清組在24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均降低細(xì)胞活性。但1.25%濃度血府逐瘀含藥血清在24h、48h顯著增強(qiáng)缺氧環(huán)境中的細(xì)胞活性；而非缺氧環(huán)境中含藥血清對(duì)細(xì)胞活性無影響。2、缺氧72h三個(gè)濃度(1.25%、2.5%、5%)空白血清組均能提高S期細(xì)胞所占比例。而缺氧條件下1.25%、2.5%、5%三個(gè)濃度血府逐瘀含藥血清在24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)對(duì)細(xì)胞增殖能力均沒有影響；非缺氧條件下血府逐瘀含藥血清對(duì)細(xì)胞周期的影響與缺氧條件下作用一致。3、缺氧使1.25%、2.5%濃度空白血清組在24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞遷移顯著增強(qiáng)。缺氧條件下1.25%濃度血府逐瘀含藥血清24h對(duì)細(xì)胞遷移有促進(jìn)作用,2.5%濃度血府逐瘀膠囊含藥血清48h對(duì)細(xì)胞遷移呈現(xiàn)抑制作用,而在72h卻呈促進(jìn)作用,而5%濃度血府逐瘀膠囊含藥血清48h對(duì)細(xì)胞遷移起促進(jìn)作用,表現(xiàn)出雙向調(diào)節(jié)作用；非缺氧條件下血府逐瘀膠囊含藥血清對(duì)細(xì)胞遷移也表現(xiàn)為雙向調(diào)控,但抑制點(diǎn)的藥物作用條件不同,且更多作用時(shí)間點(diǎn)表現(xiàn)出抑制,2.5%濃度血府逐瘀膠囊含藥血清72h及5%濃度血府逐瘀膠囊含藥血清組在24h、48h、72h三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均抑制細(xì)胞遷移。4、缺氧使1.25%、2.5%、5%三個(gè)濃度空白血清組48h及1.25%濃度空白血清組72h細(xì)胞黏附能力減弱,而缺氧條件下2.5%濃度血府逐瘀膠囊含藥血清48h對(duì)細(xì)胞黏附呈促進(jìn)作用,5%濃度血府逐瘀膠囊含藥血清48h、72h對(duì)黏附起抑制作用；非缺氧環(huán)境中血府逐瘀膠囊含藥血清的作用也呈雙向調(diào)控,1.25%濃度血府逐瘀膠囊含藥血清72h對(duì)細(xì)胞黏附呈抑制作用,2.5%濃度血府逐瘀膠囊含藥血清在48h對(duì)細(xì)胞黏附呈抑制作用,在72h對(duì)細(xì)胞黏附呈促進(jìn)作用,5%濃度血府逐瘀膠囊含藥血清24h對(duì)細(xì)胞黏附即可出現(xiàn)抑制效果,而促進(jìn)作用要到72h才表現(xiàn)出來。5、缺氧使2.5%、5%濃度空白血清組在48h及1.25%、2.5%、5%三個(gè)濃度空白血清組在72h血管腔形成能力降低。而缺氧條件下1.25%濃度血府逐瘀膠囊含藥血清在24h和2.5%濃度血府逐瘀膠囊含藥血清在48h都出現(xiàn)促血管生長現(xiàn)象,但2.5%濃度血府逐瘀膠囊含藥血清在72h和5%濃度血府逐瘀膠囊含藥血清在48h則呈現(xiàn)抑制血管腔形成的作用。非缺氧環(huán)境中僅2.5%濃度血府逐瘀膠囊含藥血清在48h對(duì)血管腔形成起促進(jìn)作用,5%濃度血府逐瘀膠囊含藥血清在72h對(duì)血管腔形成起抑制作用。缺氧與非缺氧條件藥物對(duì)血管腔形成作用均為短暫地促血管生長,并出現(xiàn)抑制作用,呈雙向調(diào)控。不同的是缺氧條件下藥物對(duì)血管腔形成的促進(jìn)作用出現(xiàn)在更低的含藥血清濃度,更早的作用時(shí)間點(diǎn),且持續(xù)時(shí)間更長。結(jié)論1、缺氧條件下血府逐瘀湯通過影響HMEC-1細(xì)胞活性、增殖能力、遷移能力、黏附能力、體外血管腔形成能力各環(huán)節(jié)調(diào)節(jié)血管新生,具有顯著促進(jìn)血管新生的作用。2、缺氧與非缺氧條件下,藥物對(duì)細(xì)胞遷移、黏附和血管腔形成能力的影響均是既有促進(jìn)作用又有抑制作用,呈雙向調(diào)控。3、與非缺氧條件下作用相比,缺氧條件下血府逐瘀湯對(duì)血管腔形成的促進(jìn)作用出現(xiàn)在更低的含藥血清濃度,更早的作用時(shí)間點(diǎn),且持續(xù)時(shí)間更長,說明缺氧條件下血府逐瘀湯更容易發(fā)揮促血管新生的作用。4、單獨(dú)缺氧與缺氧條件下血府逐瘀湯對(duì)血管新生相關(guān)的細(xì)胞功能影響不同,提示缺氧的影響機(jī)制與藥物的影響機(jī)制不完全相同。
【關(guān)鍵詞】：血府逐瘀湯 血管新生 缺氧 HMEC-1 雙向調(diào)控
【學(xué)位授予單位】：中國中醫(yī)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 英文縮略詞12-13
• 文獻(xiàn)綜述13-21
• 參考文獻(xiàn)18-21
• 前言21-23
• 1 實(shí)驗(yàn)材料及設(shè)備23-25
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料23-24
• 1.1.1 藥物及細(xì)胞株23
• 1.1.2 主要實(shí)驗(yàn)耗材23
• 1.1.3 主要試劑23-24
• 1.2 實(shí)驗(yàn)儀器及設(shè)備24-25
• 2 實(shí)驗(yàn)方法25-28
• 2.1 含藥血清的制備25
• 2.2 細(xì)胞的培養(yǎng)25-27
• 2.2.1 培養(yǎng)基的配制25
• 2.2.2 細(xì)胞的常規(guī)培養(yǎng)25-26
• 2.2.3 細(xì)胞的接種26-27
• 2.2.4 細(xì)胞的同步化處理27
• 2.3 細(xì)胞的分組和給藥27-28
• 2.3.1 細(xì)胞分組27
• 2.3.2 給藥處理27-28
• 3 結(jié)果測定28-31
• 3.1 細(xì)胞活性測定(MTT法)28
• 3.2 細(xì)胞增殖檢測(流式)28
• 3.3 細(xì)胞黏附實(shí)驗(yàn)28-29
• 3.4 細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)(Transwell小室法)29-30
• 3.5 體外成血管實(shí)驗(yàn)30
• 3.6 數(shù)據(jù)處理30-31
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-39
• 1 細(xì)胞活性檢測(MTT法)結(jié)果31-32
• 2 細(xì)胞增殖檢測結(jié)果32-33
• 3 細(xì)胞遷移能力檢測結(jié)果33-34
• 4 細(xì)胞黏附能力檢測結(jié)果34-35
• 5 體外成血管能力檢測結(jié)果35-39
• 分析討論39-43
• 一、血府逐瘀湯與血管新生39
• 二、缺氧及藥物對(duì)血管新生相關(guān)細(xì)胞功能的影響39-41
• 三、缺氧條件及血府逐瘀湯影響血管新生的機(jī)制研究41-43
• 結(jié)論43-45
• 附圖45-57
• 參考文獻(xiàn)57-61
• 致謝61-62
• 在讀期間發(fā)表文章62

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

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本文編號(hào)：615187