本文關(guān)鍵詞：Necrostatin-1抑制創(chuàng)傷失血性休克大鼠肝臟炎癥因子的機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:探討程序性壞死特異性抑制劑-1(Necrostatin-1,Nec-1)抑制創(chuàng)傷失血性休克大鼠肝臟炎癥因子的影響及其分子生物學(xué)機制。內(nèi)容:本實驗分為兩個部分,第一部分:采用創(chuàng)傷失血性大鼠休克模型,將30只雄性SD大鼠利用隨機數(shù)字發(fā)生器分為假手術(shù)組、DMSO組、Nec-1組,每組10只。假手術(shù)組不行鉗夾斷肢及失血操作和液體回輸,僅進行腹腔水合氯醛麻醉、剝離左頸動脈、結(jié)扎左頸動脈。DMSO組建立創(chuàng)傷失血性休克大鼠模型,并回輸血液及液體,再灌注前5 min前股靜脈給予DMSO溶劑。Nec-1組建立創(chuàng)傷失血性休克大鼠模型,并回輸血液及液體,再灌注前5 min股靜脈給予Nec-1,1 mg/kg。再灌注后24 h各處死動物10只,取動物血清及肝臟組織。檢測血清中各時間點ALT、AST水平;HE染色觀察肝臟病理變化;Tunel法檢測24h后肝組織內(nèi)細胞凋亡情況;透射電鏡觀察再灌注后24 h后細胞器水平的細胞壞死;反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)檢測24h后肝臟組織中巨噬細胞炎性蛋白-1α(Macrophage inflammatory protein-1α,MIP-1α)m RNA、單核細胞趨化蛋白-1(Monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)m RNA含量。酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)分析24h血清中MIP-1α、MCP-1含量。第二部分:采用創(chuàng)傷失血性大鼠休克模型,將96只雄性SD大鼠利用隨機數(shù)字發(fā)生器隨機分為假手術(shù)組、DMSO組、Nec-1組,每組32只。假手術(shù)組不行鉗夾斷肢及失血操作和液體回輸,僅進行腹腔水合氯醛麻醉、剝離左頸動脈、結(jié)扎左頸動脈。DMSO組建立創(chuàng)傷失血性休克大鼠模型,并回輸血液及液體,再灌注前5 min前股靜脈給予DMSO溶劑。Nec-1組并回輸血液及液體,再灌注前5 min股靜脈給予Nec-1,1mg/kg。再灌注后分別在2h、8h、16h、24h各處死動物8只,取動物血清及肝臟組織。檢測血清中ALT、AST水平;HE染色觀察肝臟病理變化;酶聯(lián)免疫分析法(ELISA)分析血清中HMGB-1(high mobility group B1,HMGB-1)含量;蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western Blotting)分別檢測肝臟組織中胞漿和總蛋白的HMGB-1含量;蛋白免疫印跡法檢測肝臟組織中RIP3蛋白的含量。結(jié)果:第一部分:在制備模型后24h,DMSO組和Nec-1組中肝臟結(jié)構(gòu)遭到破壞,光鏡下模型組及DMSO組可見肝細胞氣球樣變,小葉結(jié)構(gòu)布局雜亂,淤血,炎性細胞浸潤明顯,Nec-1組肝組織損傷明顯減輕。透射電鏡DMSO組下可見細胞膜結(jié)構(gòu)尚可,胞質(zhì)內(nèi)線粒體數(shù)量溶解、嵴消失、減少,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)量減少,溶酶體增多,脂滴增多,染色質(zhì)出現(xiàn)粗顆粒,Nec-1組中損傷較DMSO組減輕。Tunel檢測顯示DMSO組與Nec-1組中凋亡細胞情況并無明顯差異(P0.05)。Nec-1組中24h血清ALT(248.05±67.55、127.2±20.04比73.46±23.75)、AST(823.74±89.04、416.67±100.46比236.36±67.79)及血清MIP-1α(0.249±0.149、0.182±0.099比0.063±0.026)、MCP-1(981.519±60.483、714.424±55.092比310.517±15.877)含量與模型組及DMSO組比較,有明顯下降(P0.05)。Nec-1組中肝臟組織MIP-1αm RNA(7.134±2.811、2.924±1.153比1.000±0.000)、MCP-1m RNA(7.319±0.517、5.554±0.435比1.000±0.000)與DMSO組比較,有明顯下降(P0.05)。第二部分:Nec-1組與DMSO組比較,血清8h、16h、24h中ALT、AST及HMGB-1含量有顯著差異(P0.05);光鏡下DMSO組及Nec-1組可見肝臟結(jié)構(gòu)遭到破壞,光鏡下模型組及DMSO組可見肝細胞氣球樣變,小葉結(jié)構(gòu)布局雜亂,淤血,炎性細胞浸潤明顯,Nec-1組肝組織損傷明顯減輕;與DMSO組相比,Nec-1組肝細胞中胞漿蛋白HMGB-1在8h(0.025±0.003、0.184±0.007比0.124±0.013)、16h(0.022±0.004、0.400±0.019比0.318±0.030)、24h(0.022±0.003、0.341±0.051比0.245±0.014)有明顯下降(P0.05),Nec-1組總蛋白HMGB-1在8h(1.010±0.042、1.348±0.046比1.298±0.073)、24h(1.053±0.048、1.438±0.634比1.374±0.060)有明顯下降(P0.05)。Nec-1組中RIP3蛋白含量在8h(0.169±0.023、0.673±0.042比0.543±0.126)、16h(0.178±0.022、1.044±0.115比0.836±0.090)、24h(0.186±0.023、1.446±0.141比1.266±0.128)有明顯下降。結(jié)論:1.Nec-1可以有效降低創(chuàng)傷失血性休克對肝臟的損傷,減少MIP-1α、MCP-1蛋白的表達,減少免疫細胞對組織的浸潤及破壞。2.Nec-1可以有效降低創(chuàng)傷失血性休克對肝臟的損傷,減少HMGB-1的釋放,減少RIP3蛋白的產(chǎn)生,有效保護肝細胞。
【關(guān)鍵詞】：程序性壞死 創(chuàng)傷失血性休克 程序性壞死特異性抑制劑-1 巨噬細胞炎性蛋白-1α 高遷移率族蛋白B1
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R605.971
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-13
• 前言13-17
• 研究現(xiàn)狀、成果13-15
• 研究目的、方法15-17
• 一、創(chuàng)傷失血性休克大鼠肝細胞程序性壞死程度的評估及Necrostatin-1 對MIP-1α、MCP-1 的影響17-30
• 1.1 對象和方法17-23
• 1.1.1 主要試劑17
• 1.1.2 實驗儀器17-18
• 1.1.3 實驗動物18
• 1.1.4 分組方法18
• 1.1.5 創(chuàng)傷失血性休克大鼠模型的制備18-19
• 1.1.6 標本的收集及處理19
• 1.1.7 觀察指標及檢測方法19-23
• 1.2 結(jié)果23-27
• 1.2.1 死亡率23-24
• 1.2.2 肝功能指標24
• 1.2.3 肝臟再灌注 24 h后HE切片結(jié)果24
• 1.2.4 肝臟再灌注 24 h后透射電鏡掃描結(jié)果24-25
• 1.2.5 肝組織內(nèi)細胞凋亡情況的檢測結(jié)果25-26
• 1.2.6 肝臟再灌注 24 h后血清MIP-1α 及MCP-1 的檢測結(jié)果26
• 1.2.7 肝臟組織再灌注 24h后趨化因子MIP-1α 及MCP-1 的檢測結(jié)果26-27
• 1.3 討論27-29
• 1.4 小結(jié)29-30
• 二、Necrostatin-1 對創(chuàng)傷失血性休克大鼠肝臟高遷移率族蛋白B1表達的影響30-43
• 2.1 對象和方法30-33
• 2.1.1 主要試劑30
• 2.1.2 實驗儀器30-31
• 2.1.3 實驗動物31
• 2.1.4 分組說明及藥物干預(yù)31
• 2.1.5 創(chuàng)傷失血性休克大鼠模型的制備31
• 2.1.6 標本收集31
• 2.1.7 觀察指標及檢測方法：31-33
• 2.2 結(jié)果33-38
• 2.2.1 肝功能指標33-34
• 2.2.2 肝臟HE切片結(jié)果34-35
• 2.2.3 血清中HMGB-1 蛋白檢測結(jié)果35-36
• 2.2.4 各個時間點肝臟組織RIP3的測定結(jié)果：36
• 2.2.5 肝臟組織胞漿HMGB-1 和總HMGB-1 的測定結(jié)果36-38
• 2.3 討論38-41
• 2.4 小結(jié)41-43
• 結(jié)論43-44
• 參考文獻44-50
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明50-51
• 綜述 程序性壞死的分子信號通路與疾病研究進展51-64
• 綜述參考文獻59-64
• 致謝64-65
• 個人簡歷65

  本文關(guān)鍵詞：Necrostatin-1抑制創(chuàng)傷失血性休克大鼠肝臟炎癥因子的機制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：440623