發(fā)布時間：2017-05-30 18:06

  本文關(guān)鍵詞：雌激素受體及基質(zhì)金屬蛋白酶-9在宮腔粘連中的表達意義，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景宮腔粘連(intrauterine adhesion,IUA)是最常見的子宮內(nèi)膜病變之一,近年來宮腔粘連的發(fā)病率有逐漸升高的趨勢,1.7%的繼發(fā)性閉經(jīng)及40%的不孕癥患者均與宮腔粘連有關(guān)。宮腔粘連雖然不是惡性疾病,但是因其發(fā)病率逐漸增高,導(dǎo)致患者月經(jīng)異常、劇烈腹痛及生育功能障礙,宮腔粘連不僅改變子宮內(nèi)膜容受性,影響受精卵著床導(dǎo)致不孕,而且影響不孕癥患者接受輔助生殖技術(shù)助孕后的效果,給患者及家庭帶來身心及經(jīng)濟上的巨大損害,嚴重危害家庭及社會的穩(wěn)定。目前國內(nèi)外學(xué)者對于宮腔粘連的發(fā)病機制有多種假說,其中纖維細胞增生活躍學(xué)說及低雌激素狀態(tài)學(xué)說得到多數(shù)學(xué)者的認可。雌激素是一種類固醇類激素,能促進子宮內(nèi)膜增生,與雌激素受體相結(jié)合,就會發(fā)生變構(gòu)從而形成二聚體,然后與ER反應(yīng)元件相結(jié)合,激活基因的轉(zhuǎn)錄,翻譯并合成蛋白質(zhì),刺激靶基因轉(zhuǎn)錄,促進子宮內(nèi)膜和問質(zhì)細胞的有絲分裂,引起子宮內(nèi)膜基底層和功能層腺體、間質(zhì)和血管增生和增厚,參與子宮內(nèi)膜的增殖、修復(fù),參與調(diào)節(jié)月經(jīng)的周期性變化,并通過與多種細胞因子如MMPs、TGF、VEGF的調(diào)控來參與宮腔粘連的形成�；|(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)是一類依賴鋅離子的蛋白水解酶,是構(gòu)成細胞外基質(zhì)降解最重要的蛋白水解系統(tǒng),MMP-9屬于MMPs中的第二大類-明膠酶,分子量為92Kda,是MMPs家族中分子量最大的酶,基因定位于20q11.2-q13.1,主要來源于巨噬細胞,可分解明膠、Ⅳ、Ⅴ、Ⅶ和X型膠原彈性纖維、破壞基底膜完整性,促進腫瘤浸潤、轉(zhuǎn)移、組織纖維化、慢性炎癥和組織破壞等,是調(diào)節(jié)細胞的生長、遷移、浸潤、炎癥和血管生成的關(guān)鍵信號之一,同時在精細調(diào)控子宮內(nèi)膜的周期性脫落和修復(fù)中也發(fā)揮作用。MMP-9減少后,蛋白水解酶活性降低,破壞了纖維蛋白溶解和合成的平衡,可引起細胞外基質(zhì)在子宮內(nèi)膜中過量沉積,子宮內(nèi)膜被結(jié)締組織替代,子宮內(nèi)膜纖維化,導(dǎo)致宮腔粘連的發(fā)生。目的本研究的目的是應(yīng)用免疫組織化學(xué)二步法技術(shù)通過研究正常子宮內(nèi)膜組織、粘連組織旁子宮內(nèi)膜組織及粘連組織中的雌激素受體(ER)及基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)的表達水平,分析ER及MMP-9在各組織中的表達及相關(guān)性,試圖在分子生物學(xué)角度尋找宮腔粘連的發(fā)生機制,并為宮腔粘連的臨床治療提供理論基礎(chǔ)。方法1、標(biāo)本的收集觀察組：收集2011年6月至2014年6月在我院婦科住院行宮腔鏡手術(shù),術(shù)后診斷為中度宮腔粘連的患者30例,分別取其宮腔粘連組織及粘連組織周圍正常子宮內(nèi)膜組織。對照組選擇同期因不孕癥在我院住院行宮腔鏡手術(shù),術(shù)中宮腔鏡檢查未發(fā)現(xiàn)異常的患者30例,征得患者知情同意后取其少許正常子宮內(nèi)膜組織。兩組患者的年齡及孕產(chǎn)次均無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。在本實驗中為了減少不同等級粘連組織間的差異性對試驗結(jié)果造成的影響,我們選取中度宮腔粘連組織作為研究對象,為減少不同月經(jīng)時期對實驗結(jié)果的影響,所有患者除閉經(jīng)患者外手術(shù)均選擇在月經(jīng)干凈第3-7天進行,術(shù)后病理結(jié)果回報為增殖期子宮內(nèi)膜。2、手術(shù)方法所有患者除閉經(jīng)患者外均于月經(jīng)干凈后3～7天進行手術(shù),手術(shù)日前晚及手術(shù)日清晨分別予碘伏液沖洗陰道,并予200μg米索前列醇放置陰道后穹窿軟化宮頸。采用奧林巴斯的被動式宮腔鏡,所有的內(nèi)鏡器械均經(jīng)環(huán)氧乙烷滅菌處理,予5%葡萄糖液作為膨?qū)m液。麻醉選擇靜脈全麻及腰硬聯(lián)合復(fù)合麻醉,常規(guī)手術(shù)消毒后予探針探查宮腔,宮頸擴張器逐步擴至9號半,緩慢將宮腔鏡鏡頭插入宮腔,手術(shù)醫(yī)生評估粘連程度后逐步分離粘連組織,使宮腔恢復(fù)大致形態(tài),微型鉗取出宮腔粘連組織及粘連組織周圍正常組織,正常對照組以微型鉗取少許正常子宮內(nèi)膜組織,取出標(biāo)本立即予10%福爾馬林溶液固定。3、免疫組化獲取的30例正常子宮內(nèi)膜,30例宮腔粘連組織及30例粘連組織周圍的子宮內(nèi)膜組織的石蠟標(biāo)本,連續(xù)切片。石蠟切片二甲苯脫臘,梯度酒精脫水(100%,90%,80%,70%),用PH7.4的PBS溶液沖洗后,切片浸入檸檬酸緩沖液中,加熱沸騰后進行抗原修復(fù)。加入一抗(ER為上�；蚩萍加邢薰�,MMP-9為福州邁新生物科技有限公司)兔/鼠抗人雌激素受體、鼠抗人MMPs-9單克隆抗體,室溫孵育60mmin；PBS沖洗后加入二抗(上海基因科技有限公司)室溫孵育60mmin。隨后再次PBS沖洗,DAB顯色,室溫孵育3-5min,光鏡下控制顯色,蘇木精復(fù)染1分鐘,1%酒精分化,蒸餾水沖洗返藍5分鐘,切片浸入梯度酒精(70%、80%、90%、95%、100%)脫水各2分鐘,二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各透明后用中性樹膠封片,顯微鏡下觀察染色效果。4、結(jié)果判斷(1)宮腔粘連判斷標(biāo)準(zhǔn)輕度：粘連菲薄,粘連累及宮腔小于1/4,宮底和輸卵管病變輕為輕度；中度：粘連形成,粘連累及宮腔小于3/4,宮底部分閉鎖,無宮壁粘著,輸卵管開口和宮腔上端部分閉鎖為中度；重度：宮壁粘著,粘連累及宮大于3/4,宮腔閉鎖,粘連帶肥厚,輸卵管開口和宮腔上端閉鎖為重度。(2)免疫組化結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn)在顯微鏡下每張切片隨機選擇5個高倍鏡視野,計算100個細胞/視野。結(jié)果根據(jù)陽性細胞所占比例及陽性細胞染色強度判定。結(jié)果判定：陰性(-,無染色),弱陽性(+,淺黃色細胞50%或棕黃色細胞20%),中度陽性(++,淺黃色細胞≥50%、20%≤棕黃色細胞60%或深褐色細胞30%),強陽性(+++,棕黃色細胞≥60%或深褐色細胞30%)。5、統(tǒng)計分析采用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。年齡、孕次比較用單向方差分析,組間ER及MMP-9比較用卡方檢驗,ER及MMP-9在各組織中的相關(guān)性采用Spearman等級相關(guān)檢驗。當(dāng)P0.05(雙側(cè)檢驗)表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果1、ER在所有組織中均有表達,在正常子宮內(nèi)膜組織中的表達以強陽性(+++)為主,在宮腔粘連患者粘連組織旁的子宮內(nèi)膜中的表達以中度陽性(++)為主,在粘連組織中的表達以陽性(+)為主。MMP-9在正常子宮內(nèi)膜組織中的表達陽性率最高,其中以中度陽性(+)及強陽性(++)為主,在宮腔粘連患者粘連組織旁的子宮內(nèi)膜中的表達以中度陽性(+)為主,在粘連組織中的表達以陰性(一)及陽性(+)為主。ER及MMP-9在各組間的表達差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。2、ER的表達(1) ER在正常子宮內(nèi)膜組織中的表達高于粘連組織旁子宮內(nèi)膜組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2) ER在粘連組織旁子宮內(nèi)膜組織中的表達高于粘連組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。3、MMP-9的表達(1) MMP-9在正常子宮內(nèi)膜組織中的表達高于粘連組織旁子宮內(nèi)膜組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。(2) MMP-9在粘連組織旁子宮內(nèi)膜組織中的表達高于粘連組織,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。4、ER與MMP-9的關(guān)系(1) ER在正常子宮內(nèi)膜和粘連組織周圍子宮內(nèi)膜組織中具有直線相關(guān)性,且呈正相關(guān)(r=0.436；p=0.0160.05=)。(2) MMP-9在正常子宮內(nèi)膜和粘連組織周圍子宮內(nèi)膜組織中具有直線相關(guān)性,且呈正相關(guān)(r=0.498；p＝0.0050.05)。(3)粘連組織中ER及MMP-9不具有直線相關(guān)性(p0.05)。結(jié)論1、ER在粘連組織旁子宮內(nèi)膜組織及粘連組織中均呈低表達,且在粘連組織中的表達較粘連組織旁子宮內(nèi)膜中表達更低,提示ER的低表達可能促進宮腔粘連的形成和發(fā)展。2、MMP-9在粘連組織旁子宮內(nèi)膜組織及粘連組織中均呈低表達,且在粘連組織中的表達較粘連組織旁子宮內(nèi)膜中表達更低,提示MMP-9的低表達可能促進宮腔粘連的形成和發(fā)展。3、ER與MMP-9在宮腔粘連發(fā)病機制中可能存在相關(guān)性,以此為基礎(chǔ),進一步探討宮腔粘連的病因?qū)W,為治療及預(yù)防宮腔粘連提供更加有效的方法。
【關(guān)鍵詞】：宮腔粘連 雌激素受體 基質(zhì)金屬蛋白酶-9
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R711.74
【目錄】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-15
• 1 前言15-17
• 2 材料與方法17-22
• 3 結(jié)果22-24
• 4 討論24-29
• 5 結(jié)論29-30
• 6 附圖30-34
• 參考文獻34-39
• 綜述39-52
• 參考文獻47-52
• 中英文縮略圖52-53
• 攻讀學(xué)位期間成果53-54
• 致謝54-55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 宮鳳艷;苑春莉;劉淑芹;許為;;透明質(zhì)酸鈉膜貼預(yù)防宮腔鏡電切術(shù)后宮腔粘連的療效觀察[J];中國全科醫(yī)學(xué);2010年30期

  本文關(guān)鍵詞：雌激素受體及基質(zhì)金屬蛋白酶-9在宮腔粘連中的表達意義，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：407652