本課題通過實時定量PCR（qPCR）、Western blot以及染色質(zhì)免疫沉淀（Ch Ip）等實驗方法,對泛素E3連接酶Itch在骨折修復(fù)過程中的作用進行相關(guān)研究。制作小鼠脛骨骨折模型是試驗中重要的一環(huán):通過腹腔注射適量的氯胺酮和甲苯噻嗪對小鼠進行麻醉;在確認麻醉誘導(dǎo)生效后,將左膝和小腿的毛剃除干凈充分備皮;使用聚維酮碘溶液對術(shù)區(qū)進行消毒;使用無菌手術(shù)刀在小鼠脛骨前側(cè)皮膚上做長約6mm的縱行切口,同時將其膝關(guān)節(jié)盡可能彎曲到約120度;將無菌的27G針頭通過脛骨內(nèi)、外側(cè)髁之間的髕韌帶插入脛骨髓腔中,并確認針的尖端到達髓腔的末端;將針頭臨時向后稍拔出,以便于使用Dremel 7700電磨鉆橫斷脛骨;然后將針重新插入脛骨髓腔將骨折固定復(fù)位;切口用5-0縫線妥善縫合;當小鼠仍處于麻醉狀態(tài)時進行X線成像以確認針頭放置。在骨折術(shù)后第3、7、10、14和21使用TRIzol試劑從骨痂組織提取總RNA。使用i SCRIPT c DNA合成試劑盒合成c DNA。在i Cycler實時PCR儀中使用i Q SYBR Green Supermix根據(jù)制造商的說明進行實時定量RT-PCR擴增。在相同的平板上... 

【文章來源】：吉林大學(xué)吉林省211工程院校985工程院校教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：93 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

HECT連接酶

HECT域的結(jié)構(gòu)特征

圖 1.3 Nedd4 家族和其他 HECT E3 連接酶對底物的調(diào)控SMURF1 對 BMP 信號組件 SMAD1 和 SMAD5 靶向降解[40]，盡管在小鼠中


本文編號：3613307