本文關(guān)鍵詞：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對放射性主動脈損傷的修復(fù)作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景及目的放射治療是惡性腫瘤的重要治療手段,然而,在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時,腫瘤周圍的正常組織和細(xì)胞亦因受到不同劑量射線的照射而出現(xiàn)損傷。例如,胸部腫瘤接受放射治療時,主動脈及其他胸部血管均不可避免的受到射線的損傷。放療后的血管損傷出現(xiàn)的時間尚沒有一致的結(jié)論,臨床觀察發(fā)現(xiàn):在放療結(jié)束后的2年,超聲下可觀察到動脈內(nèi)膜增厚;5年后,放療患者的動脈狹窄發(fā)病率顯著增高,患者更易出現(xiàn)明顯的動脈硬化。實驗研究表明,放療首先損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞,血管通透性增加,在炎癥反應(yīng)及氧化應(yīng)激參與下,使血管內(nèi)膜增厚及纖維結(jié)締組織增生,血管彈性降低及管腔狹窄,并可誘發(fā)血栓及動脈粥樣硬化的形成,進一步加重血管狹窄甚至出現(xiàn)血管閉塞。由此可見,放射性血管損傷對放療后患者的生存時間和生存質(zhì)量有著重要影響,因此,隨著腫瘤患病率的逐年增加,有效防治放射性血管損傷迫在眉睫。然而,目前臨床上對于放射治療引起的各種副反應(yīng),包括血管損傷,主要是應(yīng)用糖皮質(zhì)激素、抗生素及抗凝藥物進行對癥治療,其只能緩解放療各種副反應(yīng)的癥狀,對放射性血管損傷及并發(fā)癥的防治治療效果并不顯著。因此,本課題嘗試尋找一種更為有效的防治放射性血管損傷的新方法。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(h BMSCs)具有強大的因子分泌能力,免疫調(diào)節(jié)功能,以及多向分化潛能,成為再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中應(yīng)用較為廣泛的種子細(xì)胞。其在血管損傷的修復(fù)中亦取得了滿意的治療效果�；诖�,本研究探討h BMSCs對放射性主動脈損傷的修復(fù)作用及機制,為今后h BMSCs防治放射性損傷的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。研究方法臨床抽取正常志愿者骨髓血標(biāo)本,采用密度梯度離心聯(lián)合單克隆篩選法分離培養(yǎng)h BMSCs。利用9周齡的雄性C57/BL小鼠建立放射性主動脈損傷模型:4%水合氯醛以10μl/g劑量腹腔注射麻醉小鼠,使用自制固定裝置將小鼠仰臥固定,用鉛皮進行肺部遮擋后,采用6MV-X射線進行單次18Gy照射。動物實驗分為四組(n=5):對照組,放射損傷組(18Gy-X射線+PBS),低劑量h BMSCs組(18Gy-X射線+1×103h BMSCs/g),高劑量h BMSCs組(18Gy-X射線+1×104h BMSCs/g)。對照組為正常C57/BL小鼠,其余三組為接受射線后24h內(nèi)尾靜脈注射PBS或高低兩組濃度h BMSCs。分別于h BMSCs注射后第3天、7天、14天、28天及84天,處死小鼠收集主動脈標(biāo)本,經(jīng)固定、包埋、切片及免疫染色和特殊染色,評價血管厚度、血管纖維化程度、血管細(xì)胞凋亡及血管中炎癥、氧化應(yīng)激及纖維化相關(guān)因子的表達。研究結(jié)果1.體外成功分離培養(yǎng)及大量擴增人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。2.建立了小鼠放射性主動脈損傷模型,證明輻射引起小鼠主動脈血管細(xì)胞凋亡,管壁膠原沉積及管壁增厚的病理變化;而尾靜脈注射低劑量和高劑量的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞均明顯減輕了射線引起的主動脈上述病理變化。且高劑量h BMSCs較低劑量h BMSCs具有更好的修復(fù)作用。3.輻射造成小鼠主動脈管壁內(nèi)炎癥因子ICAM-1、TNF-α的表達增加,而低劑量和高劑量的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞均能顯著抑制管壁中ICAM-1和TNF-α的表達,且高劑量h BMSCs的抑制作用更為明顯。4.輻射造成主動脈管壁內(nèi)纖維化因子TGF-β1和CTGF的表達增加,低劑量和高劑量的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞均有效抑制了主動脈壁中TGF-β1和CTGF的表達,且高劑量h BMSCs的作用更強。5.輻射誘導(dǎo)主動脈管壁氧化損傷(4-HNE)和氮化損傷(3-NT)的發(fā)生,且使保護性酶e NOS表達降低;低劑量和高劑量h BMSCs均能夠增加主動脈管壁內(nèi)e NOS的表達,降低射線引起的氧化應(yīng)激損傷,且高劑量h BMSCs具有更好的作用。結(jié)論1.輻射引起放射性主動脈損傷,表現(xiàn)在主動脈細(xì)胞凋亡增加、管壁膠原沉積及管壁增厚。低劑量或高劑量的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞均具有修復(fù)上述主動脈損傷的作用,且高劑量骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞具有更好的修復(fù)效果。2.骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可能通過抑制主動脈管壁中炎癥因子ICAM、TNF-α和纖維化因子TGF-β1、CTGF的表達,保持保護性酶e NOS的活性,來降低血管炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激損傷及管壁纖維化,從而發(fā)揮其修復(fù)放射性主動脈損傷的作用。
【關(guān)鍵詞】：放射性主動脈損傷 放射治療 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 炎癥 氧化應(yīng)激
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R730.55
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-15
• 第1章 文獻綜述15-23
• 1.1 放射性血管損傷概述15
• 1.2 放射性血管損傷表現(xiàn)與分類15-16
• 1.3.放射性血管損傷的原因16-20
• 1.3.1 炎癥反應(yīng)17-18
• 1.3.2 氧化應(yīng)激18-20
• 1.4 放射性血管損傷的治療20
• 1.5 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（MSCs）概述20-21
• 1.6.MSCs對血管損傷的修復(fù)作用21-23
• 第2章實驗材料23-27
• 2.1 實驗材料23-27
• 2.1.1 骨髓標(biāo)本來源23
• 2.1.2 實驗動物23
• 2.1.3 主要試劑23-24
• 2.1.4 主要儀器設(shè)備24
• 2.1.5 溶液配置24-27
• 第3章實驗方法27-34
• 3.1 人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（hBMSCs）的培養(yǎng)及鑒定27-30
• 3.1.1 hBMSCs的分離培養(yǎng)27
• 3.1.2 hBMSCs凍存及復(fù)蘇27-28
• 3.1.3 流式細(xì)胞術(shù)檢測h BMSCs的表面標(biāo)記28
• 3.1.4 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期28
• 3.1.5 細(xì)胞爬片及表面標(biāo)記的免疫熒光染色28-29
• 3.1.6 hBMSCs的成脂、成骨及成軟骨分化29-30
• 3.2 C57/BL鼠放射性主動脈損傷模型的建立30
• 3.3 HE（蘇木精-伊紅）染色30-31
• 3.4 天狼猩紅染色31
• 3.5 免疫組織化學(xué)染色31-32
• 3.6 TUNEL凋亡的檢測32-33
• 3.7 統(tǒng)計學(xué)分析33-34
• 第4章 實驗結(jié)果34-53
• 4.1 體外原代分離培養(yǎng)hBMSCs及鑒定34-37
• 4.1.1 hBMSCs的分離培養(yǎng)34
• 4.1.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測h BMSCs的表面標(biāo)志34-35
• 4.1.3 免疫熒光染色檢測h BMSCs的表面標(biāo)志35-36
• 4.1.4 hBMSCs細(xì)胞周期的分析36
• 4.1.5 hBMSCs的成脂、成骨及成軟骨分化36-37
• 4.2 射線引起的主動脈損傷情況及h BMSCs的修復(fù)作用37-42
• 4.2.1 小鼠主動脈厚度的變化37-39
• 4.2.2 小鼠主動脈細(xì)胞凋亡情況39-40
• 4.2.3 小鼠主動脈的膠原沉積40-42
• 4.3 hBMSCs抑制放射性主動脈損傷的機制探討42-53
• 4.3.1 hBMSCs抑制放射性主動脈損傷中纖維化因子的表達42-45
• 4.3.2 hBMSCs抑制放射性主動脈損傷中炎癥因子的表達45-47
• 4.3.3 hBMSCs抑制射線引起的主動脈氧化應(yīng)激損傷47-53
• 第5章討論53-59
• 5.1 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定53-54
• 5.2 hBMSCs對放射性主動脈損傷的修復(fù)作用54-55
• 5.3 hBMSCs修復(fù)放射性主動脈損傷的可能機制55-59
• 第6章結(jié)論59-60
• 參考文獻60-70
• 作者簡介及在學(xué)期間所獲得的科研成果70-71
• 致謝71

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 黃永輝,沈鐵城,袁盛茂;

本文編號：344532