本文關(guān)鍵詞：抗菌肽LL-37對(duì)大鼠鮑曼不動(dòng)桿菌感染創(chuàng)面抗菌作用的初步研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景：隨著全球經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展,交通事故、社會(huì)沖突以及自然災(zāi)害的發(fā)生越來(lái)越頻繁,機(jī)體創(chuàng)傷的發(fā)生有增無(wú)減。皮膚作為人體抵御病原菌入侵的第一道屏障,一旦遭到嚴(yán)重創(chuàng)傷(燒傷、燙傷等),某些病原菌就會(huì)趁機(jī)入侵并定植,導(dǎo)致感染及并發(fā)癥的發(fā)生。臨床創(chuàng)傷常見(jiàn)病原菌有銅綠假單胞菌、表皮葡萄球菌、金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌、鮑曼不動(dòng)桿菌等。董葉麗等對(duì)自2005-2010年收治的1235例創(chuàng)傷并發(fā)創(chuàng)面感染的病原學(xué)調(diào)查中,鮑曼不動(dòng)桿菌的檢出率為7.70%,更重要的是,鮑曼不動(dòng)桿菌的耐藥率有明顯的上升趨勢(shì),尤其是對(duì)碳青霉烯類(lèi)的耐藥性日益升高。鮑曼不動(dòng)桿菌屬于非發(fā)酵革蘭陰性桿菌,是一種條件致病菌,廣泛分布于自然界,是人體皮膚、呼吸道、胃腸道的正常菌群。該菌在醫(yī)院環(huán)境中分布很廣且可長(zhǎng)期存活,對(duì)重癥監(jiān)護(hù)室病房和燒傷病房中的患者威脅很大,可導(dǎo)致各種嚴(yán)重的感染性疾病,其危險(xiǎn)因素包括重癥監(jiān)護(hù)護(hù)理、住院時(shí)間長(zhǎng)、使用機(jī)械通氣、應(yīng)用侵入性操作技術(shù)、廣譜抗菌藥物使用、長(zhǎng)時(shí)間使用免疫抑制劑及合并嚴(yán)重的基礎(chǔ)疾病等。由于鮑曼不動(dòng)桿菌具有快速獲得和傳播耐藥性的能力,且耐藥機(jī)制極為復(fù)雜,加之臨床上大量使用廣譜抗菌藥物,特別是第3,4代頭孢菌素和碳青酶烯類(lèi)在臨床上的廣泛應(yīng)用,為其耐藥性的產(chǎn)生和發(fā)展創(chuàng)造了有利的條件�？谇磅U曼不動(dòng)桿菌幾乎對(duì)所有臨床使用的抗菌藥物耐藥,可形成耐多種抗菌藥物的鮑曼不動(dòng)桿菌,包括多重耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌、泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌及全耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌。根據(jù)中國(guó)細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示,于2010-2013年間,鮑曼不動(dòng)桿菌臨床檢出率為16%左右,對(duì)亞胺培南及美羅培南的耐藥率均在60%左右。而我國(guó)西南醫(yī)院從478例燒傷患者中分離得到了2748株致病菌,分析顯示鮑曼不動(dòng)桿菌占14.37%,僅次于銅綠假單胞菌(36.24%)及金黃色葡萄球菌(18.01%),鮑曼不動(dòng)桿菌對(duì)包括碳青霉烯類(lèi)在內(nèi)的絕大部分抗生素的耐藥率在57.91%-100.00%之間,且呈逐年增加的趨勢(shì),文中結(jié)論表示鮑曼不動(dòng)桿菌可能取代銅綠假單胞菌成為導(dǎo)致燒傷感染患者死亡的主要致病細(xì)菌。正是因?yàn)榻┠陙?lái)耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌逐漸增多、耐藥性增強(qiáng),臨床上急需尋找新的抗鮑曼不動(dòng)桿菌藥物。抗菌肽(Antibacterial peptide,ABP)由生物體免疫防衛(wèi)系統(tǒng)產(chǎn)生,是抗外源性病原體致病作用的防御性多肽活性物質(zhì),是生物體固有免疫的重要組成部分,該物質(zhì)廣泛分布于各種動(dòng)植物體內(nèi)。大量研究表明,LL-37是迄今為止在人類(lèi)Cathelicidins家族中發(fā)現(xiàn)的唯一成員,主要由中性粒細(xì)胞、各種上皮細(xì)胞等產(chǎn)生,具有廣譜、高效的抗微生物活性,其抗菌譜包括G+、G-菌、真菌以及部分有包膜的病毒,還有中和內(nèi)毒素、免疫調(diào)節(jié)、誘導(dǎo)血管生成、促進(jìn)損傷修復(fù)等生物學(xué)功能。目前,尚未見(jiàn)有關(guān)局部應(yīng)用抗菌肽LL-37對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌感染創(chuàng)面作用的相關(guān)報(bào)道,也尚未見(jiàn)關(guān)于制備大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面鮑曼不動(dòng)桿菌感染模型的文獻(xiàn)報(bào)道,故本研究先探索、建立大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面鮑曼不動(dòng)桿菌感染模型,另外建立大鼠皮膚切除創(chuàng)面鮑曼不動(dòng)桿菌感染模型,再分別與磺胺米隆做陽(yáng)性對(duì)照,初步評(píng)價(jià)LL-37對(duì)燒傷及創(chuàng)傷創(chuàng)面鮑曼不動(dòng)桿菌感染的抗菌作用,為進(jìn)一步研究提供有益的參考。目的：1、檢測(cè)抗菌肽LL-37對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的最小抑菌濃度(MIC)及最小殺菌濃度(MBC)；2、建立大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面鮑曼不動(dòng)桿菌感染模型；3、初步觀察局部應(yīng)用抗菌肽LL-37對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌感染大鼠燙傷創(chuàng)面的抗菌效果。4、初步觀察局部應(yīng)用抗菌肽LL-37對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌感染大鼠皮膚創(chuàng)傷創(chuàng)面的抗菌效果。方法：1、測(cè)定LL-37對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的MIC及MBC：采用微量肉湯稀釋法,操作規(guī)范參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(CLSI)標(biāo)準(zhǔn)(Clinical and Laboratory Standards Institute, CLSI)。2、建立大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面鮑曼不動(dòng)桿菌感染模型：選40只健康Wistar成年大鼠(南方醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心),實(shí)驗(yàn)前一天先用80g/L硫化鈉將大鼠背部脫毛。用2%戊巴比妥鈉(0.2ml/100g)腹腔注射麻醉后,以85℃水浴燙傷背部無(wú)毛區(qū)15s,制成深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面,面積約3cmx2cm。燙傷后10min于每只大鼠創(chuàng)面上均勻涂抹制備的鮑曼不動(dòng)桿菌菌液(含菌量為1×108 CFU/ml)0.5ml,創(chuàng)面包扎,分籠喂養(yǎng)在清潔、干燥、室溫為(24±5)℃的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。于涂布后12h、24h、48h、72h分批處死大鼠,每批隨機(jī)選擇處死10只,無(wú)菌條件下切取痂下組織,每次切取組織大小約1cmx1cm,將痂下組織剪碎后,按100mg組織加入0.9ml等滲鹽水的比例進(jìn)行勻漿,勻漿后作為10-1稀釋度,再將勻漿液進(jìn)行梯度稀釋后接種于瓊脂平板上,置于37℃溫箱中孵育24h,計(jì)算每克組織的菌落克隆形成單位,每克組織細(xì)菌含量(CFU/g)=菌落數(shù)(CFU)x稀釋倍數(shù)÷組織重量(g)。造模成功標(biāo)準(zhǔn)為痂下細(xì)菌定量達(dá)到1×105CFU/g。3、觀察局部應(yīng)用抗菌肽LL-37對(duì)大鼠燙傷創(chuàng)面鮑曼不動(dòng)桿菌感染的抗菌效果：另選72只健康Wistar成年大鼠,按前述方法建立大鼠燙傷模型及創(chuàng)面感染模型。隨機(jī)分為抗菌肽組、磺胺米隆組、生理鹽水對(duì)照組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)對(duì)照組),每組24只。各組分別用含0.2g/L抗菌肽LL-37溶液、100g/L磺胺米隆溶液、生理鹽水的4層紗布濕敷,再用無(wú)菌紗布包扎,每天換藥一次。給藥后1-7d大體觀察大鼠精神、進(jìn)食及活動(dòng)情況及創(chuàng)面滲出情況；大鼠分別在給藥后1d、3d、5d、7d處死,每組每批隨機(jī)選擇處死6只,無(wú)菌條件下切取皮膚組織塊,深達(dá)肌層,大小為1cm×1cm,行病理組織切片檢查,觀察炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況。另切取痂下肌肉組織一塊,大小約1cm×1cm,然后用稀釋涂布平板法計(jì)算菌數(shù)。4、觀察局部應(yīng)用抗菌肽LL-37對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌感染大鼠皮膚創(chuàng)傷創(chuàng)面的抗菌效果：取30只健康Wistar成年大鼠,麻醉后,切除背部1.5cm×1.5cm大小的全層皮膚,將鮑曼不動(dòng)桿菌菌液(含菌量為1×10 CFU/ml) 0.1ml涂抹于創(chuàng)面制成感染模型,并隨機(jī)分為抗菌肽組、磺胺米隆組、生理鹽水對(duì)照組(以下簡(jiǎn)稱(chēng)對(duì)照組),每組10只。傷后3h各組分別用含0.2.g/L抗菌肽LL-37溶液、100g/L磺胺米隆溶液或生理鹽水的4層紗布濕敷,每天換藥1次。傷后1-3d大體觀察各組大鼠創(chuàng)面的情況；傷后3d處死大鼠,檢測(cè)痂下組織細(xì)菌定量并行HE染色觀察創(chuàng)面炎性細(xì)胞浸潤(rùn)情況。結(jié)果：1、測(cè)得LL-37對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的MIC及MBC分別為64μg/ml、128μg/ml。2、創(chuàng)面細(xì)菌鑒定結(jié)果為鮑曼不動(dòng)桿菌。大鼠深Ⅱ度燙傷后10min接種含菌量約為1×108 CFU/ml的鮑曼不動(dòng)桿菌菌液0.5ml,接種后12h、24h、48h、72h分別測(cè)得痂下細(xì)菌為0.09×105cfu/g、0.77×105 cfu/g、2.16×105 cfu/g、7.17×105 cfu/g。3、抗菌肽LL-37對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌感染大鼠燙傷創(chuàng)面的抗菌效果：所有實(shí)驗(yàn)大鼠至實(shí)驗(yàn)結(jié)束無(wú)1例死亡。用藥前(即接種細(xì)菌后48h),三組大鼠創(chuàng)面大部分呈蒼白色,局部有少許滲出,創(chuàng)緣紅腫�？咕慕M及對(duì)照組于3d時(shí)創(chuàng)面濕潤(rùn),創(chuàng)面周?chē)[；5d大部分創(chuàng)面仍濕潤(rùn),局部形成紅褐色痂皮,創(chuàng)緣紅腫明顯,痂下肉芽組織生長(zhǎng)不佳,肌肉組織晦暗；7d創(chuàng)面較干燥,部分創(chuàng)面形成棕褐色痂皮,創(chuàng)緣水腫較前減輕,痂下可見(jiàn)肉芽組織生長(zhǎng)�；前访茁〗M3d時(shí)創(chuàng)面干燥,部分創(chuàng)面可見(jiàn)棕褐色痂皮形成,5d時(shí)大部分形成棕褐色痂皮,創(chuàng)面稍縮小,痂下可見(jiàn)肉芽組織生長(zhǎng),7d時(shí)痂皮顏色加深、變硬,痂下肉芽組織生長(zhǎng)良好。細(xì)菌定量結(jié)果顯示治療后各時(shí)間點(diǎn)抗菌肽組及對(duì)照組的細(xì)菌數(shù)均多于磺胺米隆組(P0.05),抗菌肽組與對(duì)照組之間各時(shí)間點(diǎn)細(xì)菌數(shù)均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。磺胺米隆組1d至7d細(xì)菌數(shù)則呈逐漸遞減趨勢(shì),抗菌肽組及對(duì)照組細(xì)菌數(shù)從傷后1d至5d逐漸增多,但7d時(shí)細(xì)菌數(shù)開(kāi)始下降。HE染色顯示用藥后1d三組創(chuàng)面均可見(jiàn)彌漫浸潤(rùn)的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),用藥后3d、5d、7d磺胺米隆組的均較抗菌肽組及對(duì)照組輕,5d時(shí)磺胺米隆組真皮層及皮下有少許炎性細(xì)胞浸潤(rùn),而抗菌肽組及對(duì)照組仍有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。4、抗菌肽LL-37對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌感染大鼠皮膚創(chuàng)傷創(chuàng)面的抗菌效果：對(duì)照組大鼠相比其他兩組活動(dòng)減少,創(chuàng)面潮濕,分泌物較多；磺胺米隆組及抗菌肽組創(chuàng)面結(jié)痂、干燥、無(wú)明顯分泌物�？咕慕M細(xì)菌定量為(11.9±6.7)×102 CFU/g,磺胺米隆組為(15.2±11.4)×102 CFU/g,對(duì)照組為(68.1±36.4)×104 CFU/g,前兩組明顯低于對(duì)照組(P0.01),而抗菌肽組與磺胺米隆組無(wú)顯著差異(P0.05)。HE染色顯示三組大鼠創(chuàng)面均有明顯的滲出物覆蓋,對(duì)照組可見(jiàn)大量彌漫分布的中性粒細(xì)胞浸潤(rùn),而磺胺米隆組及抗菌肽組中性粒細(xì)胞較對(duì)照組少。結(jié)論：1、LL-37對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌的MIC及MBC分別為128μg/ml、128μg/ml。2、大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面接種1×108 CFU/ml的泛耐藥鮑曼不動(dòng)桿菌菌液,48h后可作為大鼠燙傷創(chuàng)面感染模型(細(xì)菌定量1×105CFU/g)。3、抗菌肽LL-37局部應(yīng)用對(duì)于鮑曼不動(dòng)桿菌痂下浸潤(rùn)感染的大鼠深Ⅱ度燙傷創(chuàng)面無(wú)明顯抗菌效果。4、抗菌肽LL-37局部應(yīng)用對(duì)鮑曼不動(dòng)桿菌感染的大鼠皮膚創(chuàng)傷創(chuàng)面有明顯的抗菌作用。
【關(guān)鍵詞】：抗菌肽 LL-37 鮑曼不動(dòng)桿菌 燒傷 創(chuàng)面感染
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R446.5
【目錄】：

• 摘要3-8
• ABSTRACT8-15
• 第一章 序言15-23
• 第二章 抗菌肽LL-37對(duì)深Ⅱ度燙傷大鼠鮑曼不動(dòng)桿菌感染創(chuàng)面的抗菌作用23-34
• 2.1 前言23
• 2.2 實(shí)驗(yàn)材料23-25
• 2.3 實(shí)驗(yàn)方法25-28
• 2.4 結(jié)果28-30
• 2.5 討論30-34
• 第三章 抗菌肽LL-37對(duì)大鼠鮑曼不動(dòng)桿菌感染創(chuàng)傷創(chuàng)面的抗菌作用34-43
• 3.1 前言34
• 3.2 實(shí)驗(yàn)材料34-35
• 3.3 實(shí)驗(yàn)方法35-36
• 3.4 結(jié)果36-38
• 3.5 討論38-43
• 全文總結(jié)43
• 研究展望43-45
• 參考文獻(xiàn)45-53
• 攻讀學(xué)位期間成果53-54
• 中英文縮略詞表54-55
• 致謝55-56

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

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  本文關(guān)鍵詞：抗菌肽LL-37對(duì)大鼠鮑曼不動(dòng)桿菌感染創(chuàng)面抗菌作用的初步研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：337989