本文關(guān)鍵詞：甘草總黃酮對(duì)非酒精性脂肪肝的干預(yù)作用及作用機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的采用高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠非酒精性脂肪肝(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)模型,結(jié)合藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)、血液生化實(shí)驗(yàn)、組織形態(tài)學(xué)實(shí)驗(yàn)等明確甘草中的活性提取部位甘草總黃酮(licorice flavonoids,LF)對(duì)非酒精性脂肪肝的干預(yù)作用;采用免疫組織化學(xué)和免疫蛋白印跡等實(shí)驗(yàn)方法,研究甘草總黃酮對(duì)非酒精性脂肪肝的干預(yù)作用與AMPK信號(hào)分子之間的關(guān)系。方法采用高脂飲食誘導(dǎo)的大鼠非酒精性脂肪肝模型。雄性SD大鼠120只,適應(yīng)性喂養(yǎng)一周后,按體重隨機(jī)分為2組:正常對(duì)照組20只,給予普通維持飼料,其中蛋白質(zhì)熱卡占20%,碳水化合物熱卡占70%,脂肪熱卡占10%;高脂飲食組100只,給予高脂飼料喂養(yǎng),其中蛋白質(zhì)熱卡占20%,碳水化合物熱卡占35%,脂肪熱卡占45%。正常對(duì)照組和高脂飲食組分別以各自飼料喂養(yǎng)13周。高脂飲食組在第13周末時(shí),按體重排序。將體重排位在后30位的大鼠歸為高脂飼料不敏感大鼠進(jìn)行剔除,將剩余70只視為對(duì)高脂飼料敏感大鼠、重新進(jìn)行隨機(jī)分組。按體重隨機(jī)分為6組:模型對(duì)照組、甘草黃酮實(shí)驗(yàn)組(50、150、400mg·kg-1)、陽性藥物對(duì)照組(二甲雙胍300mg·kg-1、非諾貝特40mg·kg-1)。第14周開始藥物干預(yù),藥物干預(yù)時(shí)間6周,干預(yù)同時(shí),除正常對(duì)照組外,其余6組均繼續(xù)喂養(yǎng)高脂飼料。造模期間及藥物干預(yù)期間,每天監(jiān)測(cè)各組實(shí)驗(yàn)大鼠體重和攝食量情況。待藥物干預(yù)結(jié)束后,行烏拉坦(1.4g/kg,i.p)麻醉大鼠,經(jīng)股動(dòng)脈取血處死,離心所得血清測(cè)定血脂四項(xiàng)、肝功能和血清抗氧化等指標(biāo)。取血后的大鼠,迅速取出腎臟及睪丸周圍的脂肪組織并稱重,計(jì)算脂肪系數(shù)。取肝臟組織并稱重后,先切取肝大葉中的一小部分置于包埋盒中于4%多聚甲醛溶液中固定,用以后期做石蠟包埋及切片,用來做免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry)實(shí)驗(yàn)。剩余肝臟部分置于錫箔紙中于液氮中保存,后轉(zhuǎn)入超低溫冰箱保存,用以免疫蛋白印跡(Western Blot)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果1.造模期間及藥物干預(yù)期間各組大鼠攝食量情況:高脂飲食建立NAFLD大鼠模型期間,正常組與高脂組的攝食量基本一致,兩組之間攝食量差異并不明顯,正常組與高脂組大鼠攝食量基本維持在28g/d;藥物干預(yù)期間,各組實(shí)驗(yàn)大鼠在藥物干預(yù)初期,由于灌胃刺激,攝食量均普遍下降,在藥物干預(yù)第四周,攝食量升高,直至第六周,攝食量呈平穩(wěn)增長,各實(shí)驗(yàn)組基本維持在25g/d。在實(shí)驗(yàn)期間各組大鼠攝食量沒有明顯差異,表明造成各組大鼠體重差異的結(jié)果是由于飼料成分的不同。2.甘草總黃酮對(duì)各組實(shí)驗(yàn)大鼠體重增長率的影響:與正常組比較,模型組體重增長率高于正常組(p0.01);與模型組比較,各藥物實(shí)驗(yàn)組體重增長率低于模型組(p0.05,p0.01),表明甘草總黃酮可以抑制高脂飲食引起的大鼠體重的增加。3.甘草總黃酮對(duì)各組實(shí)驗(yàn)大鼠脂肪系數(shù)的影響:與正常組比較,模型組脂肪系數(shù)高于正常組(p0.01);與模型組比較,各藥物實(shí)驗(yàn)組脂肪系數(shù)低于模型組(p0.01),表明甘草總黃酮對(duì)大鼠肥胖度有一定抑制作用。4.甘草總黃酮對(duì)血液生化指標(biāo)的影響:(1)甘油三酯(TG):與正常組比較,模型組血清甘油三酯升高(p0.01)。與模型組比較,各藥物實(shí)驗(yàn)組血清甘油三酯降低(p0.05,p0.01)。(2)總膽固醇(TC):與正常組比較,模型組血清總膽固醇升高(p0.05)。與模型組比較,各藥物實(shí)驗(yàn)組血清總膽固醇降低(p0.05,p0.01)。(3)低密度脂蛋白(LDL):與正常組比較,模型組血清低密度脂蛋白升高(p0.05)。與模型組比較,各藥物實(shí)驗(yàn)組血清低密度脂蛋白降低(p0.05,p0.01)。(4)高密度脂蛋白(HDL):與正常組比較,模型組血清高密度脂蛋白降低(p0.01)。與模型組比較,各藥物實(shí)驗(yàn)組血清高密度脂蛋白升高(p0.05,p0.01)。(5)谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT):與正常組比較,模型組谷丙轉(zhuǎn)氨酶值升高(p0.01);與模型組比較,除甘草黃酮50 mg·kg-1劑量組外,其余藥物實(shí)驗(yàn)組ALT值均降低(p0.05,p0.01)。(6)谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST):與正常組比較,模型組谷草轉(zhuǎn)氨酶值升高(p0.01);與模型組比較,各藥物實(shí)驗(yàn)組谷草轉(zhuǎn)氨酶值均降低(p0.05,p0.01)。(7)丙二醛(MDA):與正常組比較,模型組血清MDA值升高(p0.01);與模型組比較,各藥物實(shí)驗(yàn)組血清MDA值均降低(p0.05,p0.01)。(8)超氧化物歧化酶(SOD):各實(shí)驗(yàn)組大鼠血清SOD值無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p0.05)。(9)游離脂肪酸(FFA):與正常組比較,模型組血清FFA值升高(p0.01);與模型組比較,各藥物實(shí)驗(yàn)組血清FFA值均降低(p0.05,p0.01)。5.組織形態(tài)學(xué)結(jié)果(1)HE染色結(jié)果各組大鼠肝臟組織中,脂滴呈大小不等的規(guī)整的圓形空泡。與正常組比較,模型組大鼠肝組織內(nèi)可以看到多灶性、大小不等的規(guī)整的圓形空泡即脂肪空泡在整個(gè)肝組織內(nèi)彌漫散在;與模型組比較,甘草黃酮低劑量組脂肪空泡較少呈多灶性、彌漫分布在肝組織胞漿區(qū)域;甘草黃酮中劑量和高劑量組脂肪空泡顯著減少,只有在極個(gè)別細(xì)胞內(nèi)可以看到散在的圓形空泡。陽性藥物二甲雙胍和非諾貝特組大鼠肝臟組織中,可看到散在的圓形空泡存在于肝細(xì)胞的胞漿中。結(jié)果提示,甘草總黃酮對(duì)高脂飲食引起的輕度脂肪肝有一定干預(yù)作用。(2)油紅O染色結(jié)果各組大鼠肝臟組織中,脂滴會(huì)被染成紅色。與正常組比較,模型組脂滴多且廣泛分布在肝臟組織胞漿中;與模型組比較,甘草黃酮低劑量組脂滴減少并不明顯,但甘草黃酮中劑量和高劑量組脂滴明顯減少;二甲雙胍和非諾貝特組脂滴較模型組也顯著減少。結(jié)果提示,甘草總黃酮對(duì)高脂飲食引起的輕度脂肪肝有一定干預(yù)作用。6.免疫組織化學(xué)結(jié)果:(1)與正常組相比,模型組大鼠肝臟胞漿中AMPK分子免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞表達(dá)弱,平均光密度值降低(p0.05);與模型組相比,各藥物實(shí)驗(yàn)組在肝臟胞漿中AMPK分子免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞表達(dá)明顯增強(qiáng),平均光密度值升高(p0.05,p0.01)。(2)與正常組相比,模型組大鼠肝臟胞漿區(qū)域p-AMPKα分子免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞表達(dá)弱,平均光密度值降低(p0.05);與模型組相比,各藥物實(shí)驗(yàn)組在大鼠肝臟胞漿中p-AMPKα分子免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞表達(dá)增強(qiáng),平均光密度值均顯著升高(p0.01)。7.Western blot結(jié)果(1)與正常組比較,模型組大鼠肝臟中AMPKα蛋白表達(dá)量降低(p0.05)。與模型組比較,甘草黃酮各劑量組和陽性藥物組大鼠肝臟中AMPKα蛋白表達(dá)明顯升高(p0.01)(2)與正常組比較,模型組大鼠肝臟中p-AMPKα蛋白表達(dá)較正常組降低(p0.05)。與模型組比較,甘草黃酮低劑量組和非諾貝特組大鼠肝臟中p-AMPKα蛋白的表達(dá)升高不明顯,而甘草黃酮中劑量與高劑量組p-AMPKα蛋白的表達(dá)明顯升高(p0.05,p0.01)。結(jié)論1.甘草總黃酮對(duì)非酒精性脂肪肝有干預(yù)作用。2.甘草總黃酮可能通過激活A(yù)MPK信號(hào)分子從而達(dá)到干預(yù)非酒精性脂肪肝的作用。
【關(guān)鍵詞】：甘草 黃酮 高脂飲食 非酒精性脂肪肝 腺苷酸活化蛋白激酶 磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R285.5
【目錄】：

• 摘要4-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-14
• 材料和方法14-33
• 結(jié)果33-47
• 討論47-50
• 結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-55
• 文獻(xiàn)綜述55-62
• 參考文獻(xiàn)59-62
• 致謝62-63
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄63-64
• 個(gè)人簡歷64

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 趙金英;楊衛(wèi)東;李紅兵;王英華;李巍;彭曉東;;栽培甘草中甘草黃酮提取物對(duì)糖尿病大鼠血糖血脂的調(diào)節(jié)作用[J];時(shí)珍國醫(yī)國藥;2012年01期

  本文關(guān)鍵詞：甘草總黃酮對(duì)非酒精性脂肪肝的干預(yù)作用及作用機(jī)制的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：335939