本文關(guān)鍵詞：頭部淺低溫對(duì)全腦缺血再灌注損傷大鼠海馬細(xì)胞線粒體膜電位及細(xì)胞凋亡的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:阻斷大鼠雙側(cè)椎動(dòng)脈和雙側(cè)頸總動(dòng)脈造成全腦缺血,開(kāi)放血管后造成再灌注損傷,經(jīng)鼻咽腔實(shí)施冷鹽水灌注來(lái)降低大腦深部溫度,實(shí)現(xiàn)頭部的淺低溫,通過(guò)檢測(cè)缺血再灌損傷后大鼠海馬細(xì)胞線粒體膜電位的變化,以及觀察海馬CA1區(qū)Bcl-2,Bax蛋白,細(xì)胞色素C(Cytochrome C,Cyt C)蛋白和Pro-Caspase-3蛋白的表達(dá),來(lái)探究線粒體膜電位變化與細(xì)胞凋亡的關(guān)系,以及頭部淺低溫減少缺血再灌注損傷的理論基礎(chǔ)。方法:1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組36只清結(jié)級(jí)成年Wistart大鼠,均為雄性,體重250~280g。隨機(jī)分成3組,每組12只,標(biāo)記為假手術(shù)組即S組,缺血再灌注組即I/R組,頭部淺低溫缺血再灌注組即HI/R組。2實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕⒁约邦^部淺低溫的實(shí)施基于大鼠全腦四血管供血的解剖學(xué)基礎(chǔ)[1,3],永久性閉塞雙側(cè)椎動(dòng)脈后,夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈造成全腦缺血,開(kāi)放動(dòng)脈夾復(fù)灌制造缺血再灌注損傷模型,經(jīng)鼻咽降溫實(shí)現(xiàn)頭部淺低溫。大鼠禁食大于8小時(shí),記錄體重,腹腔注射水合氯醛麻醉,待其對(duì)針尖刺激無(wú)反應(yīng)后俯臥固定,在顱骨下觸及第一頸椎,沿中線切開(kāi)分離組織直至脊椎骨,暴露椎旁兩側(cè)翼小孔,用電燒尖燒閉雙側(cè)椎動(dòng)脈,檢驗(yàn)無(wú)出血后逐層縫合。觀察24h再次麻醉大鼠,仰臥固定,插入氣管導(dǎo)管,持續(xù)吸入七氟醚,經(jīng)鼠頸分離雙側(cè)粗大頸總動(dòng)脈,準(zhǔn)備動(dòng)脈夾。S組大鼠僅分離出雙側(cè)翼小孔和頸總動(dòng)脈,不予其它處理。I/R組,HI/R組均燒灼翼小孔閉塞椎動(dòng)脈,夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈15min,開(kāi)放灌注24小時(shí)。其中HI/R組在氣管插管后于鼻腔置入管路,灌注4℃晶體液降低腦溫,待海馬區(qū)溫度達(dá)33℃時(shí)進(jìn)行雙側(cè)頸總動(dòng)脈夾閉,開(kāi)放動(dòng)脈復(fù)灌1小時(shí)后停止降溫,自然復(fù)溫。3.實(shí)驗(yàn)樣本提取及檢測(cè)方法3.1 JC-1 熒光法顯微鏡下觀察大鼠海馬細(xì)胞線粒體膜電位變化每組取大鼠4只,腹腔注射10%水合氯醛麻醉后迅速斷頭,取出大腦放于冰盤(pán)上分離海馬組織,標(biāo)本參照線粒體提取試劑盒使用方法提取線粒體,操作過(guò)程于低溫環(huán)境下進(jìn)行,標(biāo)本用于線粒體膜電位的觀察。3.2 Western Blot法測(cè)定Caspase-3酶原每組取再灌注24小時(shí)大鼠4只,10%水合氯醛進(jìn)行麻醉,于鼠頸根部斷頭,低溫下分取鼠腦海馬組織,置于冷凍管密封,在液氮罐中快速超低溫冰凍標(biāo)本,再轉(zhuǎn)移到-80℃冰箱長(zhǎng)時(shí)間保存。標(biāo)本用Western Blot方法測(cè)定Caspase-3酶原表達(dá)。3.3免疫組化法觀察海馬CA1區(qū)Cyt C蛋白,Bcl-2及Bax蛋白表達(dá)每組取大鼠4只麻醉,剪開(kāi)胸廓于心尖處插入細(xì)針,以0.9%氯化鈉灌注清洗血管,再以4%多聚甲醛溶液灌流固定,待大鼠全身僵直后即刻斷頭取腦分離海馬組織,標(biāo)本放入4%多聚甲醛溶液中繼續(xù)固定,4℃保存,用免疫組化法觀察Cyt C蛋白,Bcl-2蛋白及Bax蛋白。結(jié)果:1大鼠海馬CA1區(qū)Caspase-3酶原表達(dá)相比于S組,I/R組Caspase-3酶原蛋白量減少,HI/R組Caspase-3酶原蛋白量減少,差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);相比于I/R組,HI/R組Caspase-3酶原蛋白量增加,差異顯著,有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。2大鼠海馬CA1區(qū)Cyt C蛋白表達(dá)相比于S組,I/R組,HI/R組Cyt C蛋白表達(dá)均明顯增加,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);相比于I/R組,HI/R組Cyt C蛋白表達(dá)明顯減少,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。3大鼠海馬CA1區(qū)Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)相比于S組,I/R組,HI/R組Bcl-2蛋白,Bax蛋白表達(dá)均明顯增加,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);相比于I/R組,HI/R組Bcl-2蛋白表達(dá)明顯增加,Bax蛋白表達(dá)明顯減少,兩者均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。4大鼠海馬CA1區(qū)細(xì)胞線粒體膜電位的觀察S組在JC-1熒光濾片上觀察為高紅高綠(綠++紅++),染料聚集明顯,是膜電位正常時(shí)的熒光圖像;與S組比較,I/R組明顯表現(xiàn)為低紅高綠(綠++紅),紅色熒光下僅有極少量染料聚集呈現(xiàn)亮紅色,反映膜電位明顯下降;與S組比較,HI/R組表現(xiàn)為中紅高綠(綠++紅+),紅色熒光下看到較3實(shí)驗(yàn)樣本提取及檢測(cè)方法3.1 JC-1熒光法顯微鏡下觀察大鼠海馬細(xì)胞線粒體膜電位變化多染料聚集,反映膜電位下降。與I/R組比較,HI/R組紅綠熒光圖像差異不明顯,反映膜電位下降少于I/R組。結(jié)論:1頭部淺低溫可影響大鼠全腦缺血再灌注損傷后海馬細(xì)胞線粒體膜電位以及細(xì)胞凋亡;線粒體膜電位的變化與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。2頭部淺低溫可降低大鼠全腦缺血再灌注損傷,具有神經(jīng)保護(hù)作用。
【關(guān)鍵詞】：淺低溫 缺血再灌注損傷 線粒體膜電位 細(xì)胞凋亡 神經(jīng)保護(hù)
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R651.1
【目錄】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-11
• 前言11
• 材料與方法11-19
• 結(jié)果19-21
• 附圖21-29
• 附表29-31
• 討論31-37
• 結(jié)論37
• 參考文獻(xiàn)37-40
• 綜述 缺血再灌注的損傷機(jī)制與線粒體跨膜電位40-47
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 致謝47-48
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷48

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 龐鶴;朱陵群;王碩仁;牛福玲;崔巍;;清開(kāi)靈注射液對(duì)神經(jīng)細(xì)胞凋亡和線粒體膜電位的影響[J];北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào);2006年02期

2 張杰;劉禎;景鵬;李國(guó)君;;細(xì)胞線粒體膜電位的測(cè)量方法[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2006年01期

3 沈斌;Xu Haoliang;;線栓法制備SD大鼠局灶性腦缺血/再灌注模型的改良研究[J];首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2007年06期

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  本文關(guān)鍵詞：頭部淺低溫對(duì)全腦缺血再灌注損傷大鼠海馬細(xì)胞線粒體膜電位及細(xì)胞凋亡的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：321381