本文關(guān)鍵詞：左、右歸丸及其拆方調(diào)節(jié)去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠成骨與成脂平衡的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:基于中醫(yī)“腎主骨,生髓”理論,探討滋陰補(bǔ)腎代表方劑左歸丸和溫腎補(bǔ)陽代表方劑右歸丸及其拆方兩方所含共同藥,左歸丸中滋陰藥,右歸丸中補(bǔ)陽藥對去卵巢骨質(zhì)疏松模型大鼠的防治作用和作用機(jī)制,并從陰陽平衡角度探討成骨分化與成骨過程中骨代謝與脂代謝平衡的相關(guān)性。材料與方法:選取90只SPF級2月齡雌性未生育SD大鼠,按體重分層,隨機(jī)分為正常組10只,假手術(shù)組10只,去卵巢模型組70只。去卵巢組采用雙側(cè)背部卵巢切除術(shù)制備骨質(zhì)疏松模型,假手術(shù)組只去除卵巢周圍部分脂肪組織,造模一周后,將術(shù)后成活的去卵巢模型組大鼠按體重分層,隨機(jī)分為模型組和各個治療組。至此,實(shí)驗(yàn)大鼠共分為9組,即正常組(Control),假手術(shù)組(Sham),模型組(OVX),補(bǔ)佳樂組(BJL),左歸丸組(ZGW),右歸丸組(YGW),共同藥組(GTY),滋陰藥組(ZYY),補(bǔ)陽藥組(BYY)。各治療組灌服對應(yīng)藥物,正常組,假手術(shù)組,模型組灌服蒸餾水。經(jīng)12周給藥治療后取材,除去因手術(shù)灌胃等原因死亡,共納入大鼠76只。取材前禁食不禁水24h,末次給藥2 h后稱重麻醉,腹主動脈取血,血清離心分裝后㧟80℃儲存,用于酶聯(lián)免疫ELISA法檢測骨代謝指標(biāo)血清堿性磷酸酶ALP,骨鈣蛋白OC,Ⅰ型前膠原羥基端前肽PICP;取大鼠3、4、5節(jié)腰椎,濕紗布包裹置于㧟80℃凍存,用于雙能X線骨密度檢測;取大鼠股骨遠(yuǎn)端1/3部分,仔細(xì)剝離附著肌肉筋膜及結(jié)締組織,液氮速凍后錫箔紙包裹,㧟80℃凍存,用于實(shí)時熒光定量PCR法檢測大鼠骨組織RUNX2、CollagenⅠ、ALP、BGP、PPARγ、C/EBPβ的基因表達(dá)情況和蛋白印記法檢測大鼠骨組織RUNX2、CollagenⅠ、ALP、BGP、PPARγ、C/EBPβ的蛋白表達(dá)情況;取大鼠脛骨近端1/3部分,固定脫鈣數(shù)周后制成石蠟切片,以備形態(tài)學(xué)HE檢測和RUNX2、CollagenⅠ、ALP、BGP、PPARγ、C/EBPβ指標(biāo)的免疫組化檢測。結(jié)果:1.左、右歸丸及其拆方對PMOP大鼠骨密度影響與正常組比較,除假手術(shù)組外,各組大鼠骨密度都有下調(diào)趨勢,模型組大鼠腰椎骨密度下降顯著,(P0.01),補(bǔ)佳樂組、左歸丸組下調(diào)不顯著,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,顯示成功復(fù)制PMOP模型;與模型組比較,各治療組骨密度均有不同程度提高,(P0.05或P0.01),其中補(bǔ)佳樂組、左歸丸組效果較好,(P0.01),基本達(dá)到假手術(shù)組水平,其他組間比較結(jié)果無明顯差異。2.左、右歸丸及其拆方對PMOP大鼠骨組織形態(tài)學(xué)影響正常組和假手術(shù)組可見骨小梁排列緊密,有規(guī)則,形態(tài)結(jié)構(gòu)完整、飽滿,骨小梁間呈網(wǎng)狀連接,骨小梁表面可見較多整齊的、呈單行排列的成骨細(xì)胞,骨髓腔相對較小;而模型組骨小梁總量明顯減少,結(jié)構(gòu)較為稀疏,連接性差,排列不規(guī)則,出現(xiàn)大量骨小梁盲端,小梁壁的厚度不一致,骨小梁表面成骨細(xì)胞數(shù)目也明顯較少,可見大量體積大、形態(tài)不規(guī)則、多核的破骨細(xì)胞,骨髓腔增大;各給藥組治療12周后,骨小梁數(shù)目有不同程度增多、骨小梁面積增大,增寬,結(jié)構(gòu)排列形態(tài)逐漸與正常組接近,小梁間連接呈網(wǎng)狀,骨髓腔縮小,其中補(bǔ)佳樂組,左歸丸組,滋陰藥組效果明顯。3.左、右歸丸及其拆方對PMOP大鼠骨代謝指標(biāo)的影響與正常組比較,模型組ALP含量顯著升高,(P0.01);與模型組比較,各治療組ALP含量均有降低,(P0.05或P0.01),左歸丸組下降顯著。與正常組比較,模型組OC含量明顯上升,(P0.05);與模型組比較,補(bǔ)佳樂組、左歸丸組、右歸丸組、滋陰藥組、補(bǔ)陽藥組OC含量均有不同程度下調(diào),(P0.05或P0.01),左歸丸療效顯著,與其他治療組比較有差異。與正常組比較,模型組PICP含量明顯提高,且差異顯著(P0.01);與模型組比較,各治療組均能使PICP數(shù)值下調(diào),且差異顯著,(P0.05或P0.01),其中左歸丸組效果較好。4.左、右歸丸及其拆方對PMOP大鼠成骨分化的影響免疫組化方法檢測結(jié)果顯示:RUNX2、CollagenⅠ、ALP、BGP主要表達(dá)于成骨細(xì)胞漿和細(xì)胞核內(nèi),正常組骨小梁結(jié)構(gòu)完整,成骨細(xì)胞正常表達(dá);模型組可見成骨細(xì)胞數(shù)量明顯的減少,少見棕黃色著色;給藥后的各治療組成骨細(xì)胞陽性染色細(xì)胞數(shù)量顯著增加,細(xì)胞膜和胞漿見棕黃色顆粒,少量成骨細(xì)胞核內(nèi)也見棕黃色。m RNA檢測結(jié)果顯示:與正常組比較,模型組RUNX2、CollagenⅠ、ALP、BGP基因表達(dá)均有降低,有顯著性差異,(P0.05);與模型組比較,各治療組RUNX2、CollagenⅠ、ALP、BGP基因表達(dá)均有不同程度升高,其中補(bǔ)佳樂組、左歸丸組RUNX2、CollagenⅠ、ALP、BGP含量升高顯著,(P0.01),達(dá)到或高于正常組水平,左歸丸優(yōu)于右歸丸,并且優(yōu)于各拆方組。蛋白表達(dá)檢測結(jié)果顯示:與正常組比較,模型組RUNX2、CollagenⅠ、ALP、BGP蛋白表達(dá)均有降低,有顯著性差異,(P0.05);與模型組比較,各治療組RUNX2、CollagenⅠ、ALP、BGP蛋白表達(dá)均有不同程度升高,其中補(bǔ)佳樂組、左歸丸組RUNX2、CollagenⅠ、ALP、BGP含量升高顯著,(P0.01)。5.左、右歸丸及其拆方對PMOP大鼠成脂分化影響:免疫組化方法檢測結(jié)果顯示:PPARγ、C/EBPβ主要表達(dá)于細(xì)胞胞漿,正常組、假手術(shù)組僅見少量細(xì)胞PPARγ、C/EBPβ表達(dá);模型組骨小梁斷裂,成骨細(xì)胞數(shù)量少,可見成骨細(xì)胞內(nèi)以及其他細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞膜和胞漿明顯的棕黃色著色;給藥后的各治療組成骨細(xì)胞數(shù)量增多,但陽性染色細(xì)胞數(shù)量減少,少見棕黃色著色。m RNA檢測結(jié)果顯示:與正常組比較,模型組PPARγ、C/EBPβ基因表達(dá)均有上調(diào),有顯著性差異,(P0.05);與模型組比較,各治療組PPARγ、C/EBPβ基因表達(dá)均有不同程度下調(diào),其中補(bǔ)佳樂組、左歸丸組PPARγ、C/EBPβ含量升高顯著,(P0.01),基本達(dá)到正常組水平,左歸丸優(yōu)于右歸丸,并且優(yōu)于各拆方組。蛋白表達(dá)檢測結(jié)果顯示:與正常組比較,模型組PPARγ、C/EBPβ蛋白表達(dá)上升顯著,(P0.05);與模型組比較,各治療組PPARγ、C/EBPβ蛋白表達(dá)均有不同程度下降,其中補(bǔ)佳樂組、左歸丸組PPARγ、C/EBPβ蛋白含量下降顯著,(P0.01)。結(jié)論:1.大鼠去除雙側(cè)卵巢后,骨量丟失,呈高轉(zhuǎn)換型骨代謝狀態(tài),成功復(fù)制絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松模型。2.左、右歸丸及其拆方即共同藥、滋陰藥,補(bǔ)陽藥,均能有效防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥。上述給藥組在一定程度上均可促進(jìn)成骨細(xì)胞分化、促進(jìn)骨形成和骨重建。通過比較研究表明,左歸丸優(yōu)于右歸丸、共同藥、滋陰藥、補(bǔ)陽藥。3.大鼠去卵巢骨質(zhì)疏松癥與成骨、成脂失衡有一定的相關(guān)性。左、右歸丸及其拆方,即共同藥,滋陰藥,補(bǔ)陽藥皆可促進(jìn)成骨、抑制脂肪細(xì)胞分化,發(fā)揮防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的作用,其中以左歸丸組作用突出。4.寓意“陰陽互濟(jì)”之意的左、右歸丸,均可通過調(diào)控成骨與成脂的平衡而有效防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥;而尤以“陽中求陰”之法立意的左歸丸為突出。
【關(guān)鍵詞】：絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥 左歸丸 右歸丸 骨代謝 脂代謝
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 中文論著摘要5-9
• 英文論著摘要9-14
• 英文縮略語14-16
• 論文一 左、右歸丸及其拆方對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨重建的影響16-36
• 前言16-18
• 材料與方法18-23
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果（附論文圖片）23-30
• 討論30-35
• 小結(jié)35-36
• 論文二 左、右歸丸及其拆方對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨組織成骨分化的影響36-65
• 前言36-37
• 材料與方法37-45
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果（附論文圖片）45-62
• 討論62-64
• 小結(jié)64-65
• 論文三 左、右歸丸及其拆方對去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠骨組織成脂分化的影響65-78
• 前言65-66
• 材料與方法66-67
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果（附論文圖片）67-75
• 討論75-77
• 小結(jié)77-78
• 結(jié)論78-79
• 本研究創(chuàng)新性的自我評價79-80
• 參考文獻(xiàn)80-85
• 附錄85-99
• 綜述85-92
• 參考文獻(xiàn)90-92
• 在學(xué)期間科研成績92-93
• 致謝93-95
• 個人簡介95-96
• 附圖96-99

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本文編號：318298