本文關(guān)鍵詞：中縫背核5-HT神經(jīng)元在orexin促麻醉覺醒中的作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景:全身麻醉至今已經(jīng)有170年的歷史,但是其作用機制還不完全清楚,目前越來越多的學(xué)者傾向于用網(wǎng)絡(luò)調(diào)控機制解釋麻醉藥物的作用,認(rèn)為腦內(nèi)多種神經(jīng)遞質(zhì)、調(diào)質(zhì)及其投射系統(tǒng)與全身麻醉的產(chǎn)生和調(diào)控相關(guān)。本實驗小組前期系列研究已經(jīng)證明神經(jīng)肽orexin在全麻覺醒中發(fā)揮重要作用,發(fā)現(xiàn)orexin可以激活結(jié)節(jié)乳頭核的組胺能神經(jīng)元和多巴胺、腎上腺素能神經(jīng)元發(fā)揮其促麻醉覺醒的作用。有研究表明oreixn亦可以作用于激活腦干中縫背核(dorsal raphe nucleus,DRN)的5-羥色胺能(5-hydroxytryptamine,5-HT)神經(jīng)元,調(diào)控如睡眠等生理功能。5-HT是一種在生物體內(nèi)廣泛存在的單胺類物質(zhì),參與痛覺、體溫、情緒、睡眠-覺醒的調(diào)控,已有證據(jù)表明5-HT在麻醉中也有作用。本文旨在探討異氟烷麻醉中DRN的5-HT能神經(jīng)元是否參與介導(dǎo)orexin神經(jīng)元麻醉促覺醒作用。目的:了解腦干的DRN區(qū)的5-HT能神經(jīng)元在orexin異氟烷促麻醉覺醒效應(yīng)中的作用和機制。實驗一:DRN區(qū)微注射orexin及其受體配體對異氟烷麻醉的誘導(dǎo)和覺醒時間的影響方法:成年雄性SD大鼠(體重230-300g),月齡3-4m,實驗前動物先在10%水合氯醛麻醉下(1ml/kg,i.p.)。(1)在DRN埋置核團微注射外套管,5-7天后進行實驗。大鼠在氧流量為1.5L/min、異氟烷濃度為1MAC(1.4%)條件下進行麻醉。麻醉第15分鐘時DRN區(qū)微注射orexin-A(30pmol/0.3ul,100pmol/0.3ul)或orexin-B(30pmol/0.3ul,100pmol/0.3ul),對照組注射saline(0.3ul),另外兩組微注射orexinⅠ型受體拮抗劑SB334867(5ug/0.3ul,20ug/0.3ul)或Ⅱ型受體拮抗劑TCS-OX2-29(5ug/0.3ul,20ug/0.3ul),對照組給予DMSO(0.3ul)。給藥15分鐘后停止麻醉劑吸入,給藥終止至大鼠翻正反射恢復(fù)時間為覺醒時間(emergence time)。觀察記錄SD雄性大鼠異氟烷麻醉的覺醒時間。(2)慢誘導(dǎo)法觀察麻醉誘導(dǎo)時間:動物分組同上。上述各種試劑于給藥后15分鐘進行麻醉。將大鼠置入麻醉箱,氧流量設(shè)為1.5L/min,異氟烷揮發(fā)罐濃度為2%。從麻醉劑開始吸入至大鼠翻正反射消失時間為麻醉誘導(dǎo)時間(nduction time),記錄慢誘導(dǎo)的誘導(dǎo)時間。結(jié)果:(1)與saline對照組比較(13.91±0.90min),DRN區(qū)微注射100pmol(10.05±0.36min)和30pmol(11.6±0.36min)orexin-A后大鼠的覺醒時間均顯著縮短(p0.05)。DRN區(qū)微注射100pmol orexin-B也有促麻醉覺醒作用(10.59±0.40 min),與對照組相比覺醒時間縮短(p0.05),但30pmol組的覺醒時間(11.78±0.56 min)與對照組相比無明顯差別(p0.05)。微注射orexinⅠ型受體拮抗劑SB334867 20ug后覺醒時間(13.81±0.18 min)比DMSO對照組(11.33±0.35 min)延長(p0.05),但5ug組無此作用(11.84±0.46 min,p0.05 vs對照組)。給予orexinⅡ型受體拮抗劑TCS-OX2-29后(18.07±0.67 min)也對覺醒時間無影響(p0.05)。(2)在慢誘導(dǎo),orexin-A(30pmol/0.3ul,100pmol/0.3ul)、orexin-B(30pmol/0.3ul,100pmol/0.3ul)、orexinⅠ型受體拮抗劑SB334867(5ug/0.3ul,20ug/0.3ul)和Ⅱ型受體拮抗劑TCS-OX2-29(5ug/0.3ul,20ug/0.3ul)的DRN核團微注射都對誘導(dǎo)時間都無影響(p0.05)。實驗二:DRN區(qū)微注射orexin及其受體配體對異氟烷麻醉誘導(dǎo)的腦電變化的影響方法:成年雄性SD大鼠(體重230-300g),月齡3-4m,實驗前動物先在10%水合氯醛麻醉下(1ml/kg,i.p.)。(1)實驗前于DRN核團區(qū)進行微注射外套管和腦電監(jiān)測電極的埋置。5-7天后在氧流量為1.5L/min,異氟烷濃度為1MAC(1.4%)條件下對大鼠進行麻醉。在麻醉第30分鐘時DRN區(qū)微注射orexin-A(100pmol/0.3ul)、orexin-B(100pmol/0.3ul),對照組給予saline(0.3ul)。觀察從麻醉前清醒狀態(tài)到異氟烷麻醉后的腦電變化以及給藥的影響,計算爆發(fā)性抑制率的變化(Burst Surpression Ratio,BSR),并和對照組進行比較。(2)DRN核團微注射套管與腦電監(jiān)測電極埋置術(shù),5-7天后在氧流量為1.5L/min,異氟烷濃度為0.75MAC(1%)條件下對大鼠進行麻醉,在麻醉第30分鐘,DRN核團微注射orexin-A(30pmol/0.3ul,100pmol/0.3ul),對照組給予saline(0.3ul)觀察和分析腦電頻譜變化。結(jié)果:(1)與對照組相比(18.72±2.69%),DRN核團微注射orexin-A后腦電的爆發(fā)性抑制率(BSR,9.55±1.54%)降低(p0.05),腦電波向類覺醒波轉(zhuǎn)變。(2)與對照組相比,DRN區(qū)微注射100pmol orexin-A后EEGδ波明顯減少,而30pmol orexin-A注射組δ波僅輕微減少。實驗三:orexin對麻醉過程中DRN區(qū)5-HT神經(jīng)元活性的影響方法:成年雄性SD大鼠(體重230-300g),月齡3-4m,實驗前動物先在10%水合氯醛麻醉下(1ml/kg,i.p.)。側(cè)腦室微注射外套管埋置術(shù),5-7天后在氧流量為1.5L/min,異氟烷濃度為1MAC(1.4%)情況下對大鼠進行麻醉,麻醉第15分鐘側(cè)腦室微注射orexin-A(100pmol/0.3ul)或saline(0.3ul)麻醉第30分鐘處死,對照組大鼠清醒狀況下心臟注射10%氯化鉀處死,處死后灌注取材免疫熒光法標(biāo)記5-HT神經(jīng)元的活動狀態(tài),采用5-HT與c-Fos共標(biāo)記確定5-HT神經(jīng)元的活動狀態(tài),觀察5-HT神經(jīng)元活化情況。結(jié)果:用c-Fos表達細(xì)胞數(shù)量百分比表示5-HT神經(jīng)元活化率,側(cè)腦室微注射orexin-A組(12.54±1.45%)高于微注射saline組(7.20±0.78%p0.05),與未給予麻醉處死組(13.24±1.64%)相比無統(tǒng)計學(xué)差異,。結(jié)論:本實驗結(jié)果表明,orexin可以通過促進中縫背核的5-HT能神經(jīng)元的活動,從而使麻醉中腦電波從爆發(fā)性抑制波向類覺醒波轉(zhuǎn)化,EEGδ波減少,加快麻醉后動物的覺醒。
【關(guān)鍵詞】：5-HT orexin 腦電分析 行為學(xué) 全身麻醉
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R614.1
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 中文摘要6-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-16
• 文獻回顧16-26
• 實驗一 DRN區(qū)微注射OREXIN及其受體配體對異氟烷麻醉的誘導(dǎo)和覺醒時間的影響26-34
• 實驗背景和目的26
• 1 材料26-27
• 2 方法27-29
• 3 結(jié)果29-34
• 實驗二 DRN區(qū)微注射OREXIN及其受體配體對異氟烷麻醉誘導(dǎo)的腦電變化的影響34-43
• 實驗背景和目的34
• 1 材料34-36
• 2 方法36-38
• 3 結(jié)果38-43
• 實驗三 OREXIN對麻醉過程中DRN區(qū) 5-HT神經(jīng)元活性的影響43-48
• 實驗背景和目的43
• 1 材料43-44
• 2 方法44-45
• 3 結(jié)果45-48
• 討論48-51
• 小結(jié)51-52
• 參考文獻52-60
• 個人簡歷和研究成果60-62
• 致謝62

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  本文關(guān)鍵詞：中縫背核5-HT神經(jīng)元在orexin促麻醉覺醒中的作用，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：315586