本文關(guān)鍵詞：椎間盤(pán)髓核突出與交感性神經(jīng)行為異常的實(shí)驗(yàn)研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：選題的背景及目的:隨著老齡化社會(huì)的到來(lái),出現(xiàn)腰腿痛癥狀的患者逐漸增加,其中腰椎間盤(pán)突出是導(dǎo)致腰腿痛的重要原因之一。雖然目前有機(jī)械壓迫性因素、生物化學(xué)活性物質(zhì)刺激、自身免疫炎癥反應(yīng)等機(jī)制學(xué)說(shuō)用于闡明腰椎間盤(pán)突出癥(lumbar disc herniation,LDH)腰腿疼痛癥狀的發(fā)病機(jī)制,但LDH肢體疼痛癥狀的具體發(fā)生機(jī)制仍不明確。交感神經(jīng)是人體自主神經(jīng)系統(tǒng)的重要組成部分,大部分交感神經(jīng)節(jié)后纖維為腎上腺素能纖維,以去甲腎上腺素為遞質(zhì)。有研究顯示通過(guò)采用切斷某些特定部位的交感神經(jīng)纖維可以明顯緩解某些神經(jīng)病理性疼痛,采用對(duì)交感神經(jīng)阻滯的方法也能緩解因周?chē)窠?jīng)損傷而引起的神經(jīng)性疼痛癥狀。交感芽生是一種交感神經(jīng)節(jié)后纖維在周?chē)窠?jīng)損傷后向DRG內(nèi)部感覺(jué)神經(jīng)元生長(zhǎng)、包繞的現(xiàn)象。大量研究發(fā)現(xiàn)背根神經(jīng)節(jié)(Dorsal root ganglion,DRG)內(nèi)的交感神經(jīng)芽生現(xiàn)象在神經(jīng)病理性疼痛中可能發(fā)揮著重要作用。在通常情況下,DRG內(nèi)的交感神經(jīng)纖維僅分布于DRG內(nèi)穿行的血管表面,DRG內(nèi)的感覺(jué)神經(jīng)元對(duì)交感神經(jīng)的興奮刺激也不敏感。但有學(xué)者在周?chē)窠?jīng)損傷的動(dòng)物模型中發(fā)現(xiàn)交感神經(jīng)傳出纖維會(huì)向DRG內(nèi)延伸生長(zhǎng),廣泛包繞感覺(jué)神經(jīng)元,并可形成特殊的“籃狀結(jié)構(gòu)”,具有“籃狀結(jié)構(gòu)”的感覺(jué)神經(jīng)元除具有較高的自發(fā)性放電頻率外,引起神經(jīng)元放電所需的刺激閾值也出現(xiàn)降低。臨床上有部分椎間盤(pán)突出癥患者會(huì)出現(xiàn)一些交感性神經(jīng)異常相關(guān)癥狀,如出現(xiàn)肢體發(fā)涼,多汗或無(wú)汗等等,然而具體原因卻不清楚。大量研究表明DRG交感神經(jīng)芽生現(xiàn)象同神經(jīng)病理性疼痛之間有著密切關(guān)系。椎間盤(pán)突出癥患者可以出現(xiàn)嚴(yán)重的神經(jīng)痛癥狀,那么椎間盤(pán)突出癥與DRG交感神經(jīng)芽生之間是否也存在著聯(lián)系,交感神經(jīng)芽生是否也是導(dǎo)致椎間盤(pán)突出癥疼痛癥狀的因素之一呢?目前認(rèn)為椎間盤(pán)髓核所引起的免疫炎癥反應(yīng)可能是導(dǎo)致腰椎間盤(pán)突出癥神經(jīng)病理性疼痛的重要原因之一,因此本研究旨在初步探尋單純椎間盤(pán)髓核突出與DRG內(nèi)交感神經(jīng)的聯(lián)系,及其對(duì)疼痛所產(chǎn)生的作用,以期進(jìn)一步闡明椎間盤(pán)突出癥的發(fā)病機(jī)制,為椎間盤(pán)突出癥神經(jīng)病理性疼痛的臨床診治提供新的研究切入點(diǎn)。研究方法:首先,我們通過(guò)手術(shù)操作制作大鼠腰椎間盤(pán)髓核突出疼痛模型,其后觀察大鼠行為學(xué)改變,并通過(guò)檢測(cè)大鼠后足機(jī)械痛閾和熱痛閾的方法評(píng)估大鼠痛閾變化。然后,我們?nèi)〕瞿Ｐ痛笫蟮腄RG進(jìn)行切片和免疫組化(immunohistochemistry,IHC)染色,觀察DRG內(nèi)交感神經(jīng)纖維形態(tài)和分布上的變化。最后,我們通過(guò)采集DRG切片的IHC染色照片,應(yīng)用圖像分析軟件對(duì)切片內(nèi)交感神經(jīng)纖維數(shù)量進(jìn)行評(píng)估測(cè)定,并通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。一、腰椎間盤(pán)髓核突出大鼠模型的制備1.動(dòng)物分組:本課題采用SD大鼠制作動(dòng)物模型,大鼠價(jià)格低廉,純合性也相對(duì)較好,并且基因也較為接近人類,是目前國(guó)際上比較常用的椎間盤(pán)突出動(dòng)物模型。本課題共采用110只雄性SD大鼠,體重約為250-300g。隨機(jī)抽取其中10只作為空白對(duì)照組,另外100只采用數(shù)字表法隨機(jī)分為髓核(nucleus pulposus,NP)處理組(手術(shù)組)和非髓核處理組(假手術(shù)組),按照術(shù)后2、5、7、14、20天五個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn),每組每個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)10只進(jìn)行分組。2.制備方法:各組大鼠均用3%濃度的戊巴比妥鈉按50mg/kg的劑量進(jìn)行腹腔內(nèi)注射麻醉。手術(shù)組將大鼠尾部近端切開(kāi),暴露尾椎間盤(pán)并刺破纖維環(huán)使髓核突出,用刮匙取出髓核后縫合創(chuàng)口。于大鼠背側(cè)做正中切口,剝離椎旁肌肉,切除左側(cè)椎板及部分椎間關(guān)節(jié)暴露L5左側(cè)背根神經(jīng)節(jié),將自體髓核放置于背根神經(jīng)節(jié)表面后縫合切口。假手術(shù)組僅切除L5左側(cè)椎板,并不取出、放置尾部椎間盤(pán)髓核。二、大鼠痛閾檢測(cè)1.大鼠機(jī)械性痛閾檢測(cè):利用Von Frey纖維絲檢測(cè)各組大鼠模型各個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)后足的機(jī)械性痛閾變化情況。2.大鼠熱痛閾檢測(cè):利用熱輻射痛覺(jué)測(cè)量?jī)x檢測(cè)各組大鼠模型各個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)后足的熱痛閾變化情況。三、大鼠DRG內(nèi)交感神經(jīng)形態(tài)和數(shù)量變化1.大鼠灌注固定及標(biāo)本取材:將正常組、手術(shù)組及假手術(shù)組大鼠在各時(shí)間節(jié)點(diǎn)痛閾測(cè)試進(jìn)行完畢后分別進(jìn)行心室灌注固定處死。用約300ml的4%多聚甲醛行左心室灌注。沿大鼠背側(cè)原縱行切口切開(kāi),暴露左側(cè)L5背根神經(jīng)節(jié)并取出。脫水后固定后將背根神經(jīng)節(jié)用冰凍切片機(jī)切片,切片厚度約30um。2.切片免疫組化染色染色及觀察:DRG切片分別在1:200稀釋的TH抗體及生物素化的二抗中孵育,并使用VECTASTAIN#174;ABC試劑孵育切片。在IHC染色過(guò)程中使用Triton-X100以保證更好地促使抗體與抗原相結(jié)合。DAB顯色,脫水風(fēng)干,中性樹(shù)膠封片后放置于光學(xué)顯微鏡下觀察。3.交感神經(jīng)纖維含量測(cè)定隨機(jī)抽取每個(gè)DRG切片中的三分之一于顯微鏡下觀察拍照,并通過(guò)圖像分析軟件Image J 1.47v對(duì)DRG中的交感神經(jīng)纖維含量進(jìn)行測(cè)量。通過(guò)將圖像分析軟件測(cè)得的交感神經(jīng)纖維長(zhǎng)度總和除以測(cè)量面積計(jì)算交感神經(jīng)密度的方法來(lái)估測(cè)DRG內(nèi)交感神經(jīng)纖維含量。四、大鼠DRG內(nèi)NGF及BDNF含量變化1.大鼠模型制備及分組:雄性健康SD大鼠30只分為手術(shù)組(NP處理組)、假手術(shù)組(非NP處理組)和正常組。采取隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分組的方法對(duì)各組大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組,每個(gè)組10只。按照前述方法建立L4及L5雙節(jié)段NP突出模型。2.DRG樣本取材:術(shù)后7天,各組大鼠處死。手術(shù)取出術(shù)側(cè)L4及L5兩個(gè)節(jié)段DRG,裝入容器內(nèi),標(biāo)記后-70℃冰箱內(nèi)保存。3.ELISA測(cè)定樣本NGF及BDNF含量:采用酶聯(lián)免疫法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)測(cè)定正常組大鼠、NP處理組大鼠及非NP處理組大鼠DRG內(nèi)NGF及BDNF含量并統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果。實(shí)驗(yàn)結(jié)果:一、大鼠模型后足機(jī)械性痛閾和熱痛閾降低1.手術(shù)組及假手術(shù)組大鼠術(shù)后1周內(nèi)有明顯行為學(xué)改變,大鼠出現(xiàn)術(shù)側(cè)后足抬高、避免著地負(fù)重及舔撫術(shù)側(cè)后足現(xiàn)象,NP處理組大鼠表現(xiàn)得更為明顯、頻繁。術(shù)后5天內(nèi),NP處理組及假手術(shù)組術(shù)側(cè)后足機(jī)械性痛閾低于正常組大鼠,NP處理組大鼠在術(shù)后7、14、20天的機(jī)械性痛閾水平低于假手術(shù)組和正常組(P0.05)。2.大鼠術(shù)后5天內(nèi),NP處理組及假手術(shù)組術(shù)側(cè)后足的熱痛閾值低于正常組大鼠。NP處理組大鼠于術(shù)后7、14、20天熱痛閾水平明顯低于假手術(shù)組和正常組(P0.01)。二、大鼠模型DRG內(nèi)交感神經(jīng)向內(nèi)部生長(zhǎng)1.正常組大鼠背根神經(jīng)節(jié)切片經(jīng)免疫組化染色后,通過(guò)在顯微鏡下觀察,僅可見(jiàn)少量棕染的交感神經(jīng)纖維,且所見(jiàn)交感神經(jīng)纖維較為細(xì)小,并多分布于背根神經(jīng)節(jié)外周部位。2.髓核處理組大鼠背根神經(jīng)節(jié)切片經(jīng)免疫組化染色后,通過(guò)在顯微鏡下觀察,可見(jiàn)棕染的交感神經(jīng)纖維數(shù)量增粗、增多,并向背根神經(jīng)節(jié)內(nèi)部感覺(jué)神經(jīng)元之間伸入生長(zhǎng),大量感覺(jué)神經(jīng)元被交感神經(jīng)纖維所包繞。三、大鼠模型DRG內(nèi)交感神經(jīng)數(shù)量明顯增加采集的背根神經(jīng)節(jié)切片照片通過(guò)應(yīng)用Image J圖像分析軟件進(jìn)行量化分析后發(fā)現(xiàn),經(jīng)髓核(NP)移植處理的大鼠背根神經(jīng)節(jié)切片內(nèi)交感神經(jīng)纖維數(shù)量要顯著高于正常組和非NP處理組DRG內(nèi)所含交感神經(jīng)纖維數(shù)量。四、大鼠DRG內(nèi)NGF及BDNF含量變化結(jié)果顯示術(shù)后7天,手術(shù)組大鼠DRG內(nèi)NGF含量明顯高于正常組和假手術(shù)組。術(shù)后7天,手術(shù)組大鼠DRG內(nèi)BDNF含量低于正常組和假手術(shù)組。結(jié)論:一、在單純自體椎間盤(pán)髓核刺激DRG的情況下,可導(dǎo)致大鼠出現(xiàn)痛性行為異常及術(shù)側(cè)肢體痛覺(jué)過(guò)敏現(xiàn)象的發(fā)生。二、在單純自體椎間盤(pán)髓核刺激下,大鼠術(shù)側(cè)DRG內(nèi)交感神經(jīng)可出現(xiàn)廣泛性生長(zhǎng),出現(xiàn)“交感芽生”現(xiàn)象。三、NP刺激下DRG交感神經(jīng)芽生現(xiàn)象可能與NGF表達(dá)增高有關(guān),而與DRG內(nèi)BDNF關(guān)聯(lián)不大。本研究結(jié)果提示單純自體椎間盤(pán)髓核刺激可引起DRG內(nèi)交感神經(jīng)芽生,從而導(dǎo)致DRG內(nèi)感覺(jué)神經(jīng)元功能異常。髓核刺激下DRG內(nèi)NGF含量升高促進(jìn)交感神經(jīng)芽生可能是導(dǎo)致椎間盤(pán)突出癥腰腿痛的重要原因之一。
【關(guān)鍵詞】：疼痛 背根神經(jīng)節(jié) 腰椎間盤(pán)突出 交感芽生
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R681.53
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表4-5
• 英文摘要5-10
• 中文摘要10-14
• 第一章 前言14-16
• 第二章 腰椎間盤(pán)髓核突出大鼠模型的制備及機(jī)械性痛閾和熱痛閾的測(cè)定16-26
• 2.1 材料與方法17-22
• 2.2 結(jié)果22-24
• 2.3 討論24-25
• 2.4 小結(jié)25-26
• 第三章 自體髓核對(duì)DRG內(nèi)交感神經(jīng)數(shù)量、分布的影響26-34
• 3.1 材料與方法26-29
• 3.2 結(jié)果29-32
• 3.3 討論32-33
• 3.4 小結(jié)33-34
• 第四章 髓核刺激下DRG內(nèi)NGF及BDNF含量變化34-41
• 4.1 材料與方法34-37
• 4.2 結(jié)果37-39
• 4.3 討論39-40
• 4.4 小結(jié)40-41
• 全文結(jié)論41-42
• 研究創(chuàng)新點(diǎn)42-43
• 參考文獻(xiàn)43-49
• 文獻(xiàn)綜述 背根神經(jīng)節(jié)與神經(jīng)病理性疼痛49-59
• 參考文獻(xiàn)54-59
• 研究生期間發(fā)表的論文59-60
• 致謝60

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  本文關(guān)鍵詞：椎間盤(pán)髓核突出與交感性神經(jīng)行為異常的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：302463