本文關(guān)鍵詞：糖尿病小鼠全層皮膚缺損創(chuàng)面愈合特征的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：第一部分兩種小鼠糖尿病創(chuàng)面愈合模型的比較目的：以糖尿病創(chuàng)面為代表的慢性創(chuàng)面是當(dāng)前創(chuàng)傷醫(yī)學(xué)的研究熱點之一,但目前尚缺乏穩(wěn)定的動物模型。本實驗在鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)的小鼠糖尿病模型和基因自發(fā)突變db/db糖尿病小鼠模型的基礎(chǔ)上復(fù)制全層皮膚缺損模型,觀察創(chuàng)面愈合時間的變化及VEGF-A、Col-Iα mRNA的表達(dá)水平,旨在比較兩種目前常用的糖尿病小鼠皮膚缺損創(chuàng)面模型的優(yōu)缺點,為后續(xù)開展糖尿病創(chuàng)面愈合的動物實驗研究提供依據(jù)。方法：1)24只4周齡ICR雄性小鼠隨機(jī)分為兩組,其中對照組(ND組)12只,高脂飼料+STZ誘導(dǎo)組(STZ組)12只,分別給予普通鼠糧或高脂飲食喂養(yǎng)4周后,STZ組給予腹腔注射8Omg/kg STZ(隔兩日后重復(fù)注射)誘導(dǎo)糖尿病。建模成功后4周復(fù)制背部全層皮膚缺損創(chuàng)面模型。2)10～11周齡C57BL/KsJ(ddb/ddb)小鼠(db/db組),SPF級C57BL/KsJ(db/+)小鼠(ddb/+組)各12只,雌雄各半。3)四組小鼠均于異氟烷吸入麻醉后進(jìn)行背部全層皮膚缺損創(chuàng)面模型的復(fù)制。術(shù)后第0、3、7、10、14、17、21、24、28天分別進(jìn)行創(chuàng)面換藥、圖像采集,并于傷后第7、14天創(chuàng)面取材取材。NIH ImageJ圖像分析軟件進(jìn)行創(chuàng)面愈合率的測定,Real time-PCR檢測創(chuàng)面組織VEGF-A、Col-Iα mRNA的表達(dá)。結(jié)果：與對照組(ND組與db/+組)相比,糖尿病小鼠(STZ組與db/db組)創(chuàng)面愈合時間延遲,尤其在傷后第7、10、14天愈合率與相應(yīng)的對照組相比有顯著差異(P0.05)。而在兩種糖尿病小鼠模型間,雖創(chuàng)面面積在傷后第3天均有不同程度的擴(kuò)大,但3天以后db/db組的創(chuàng)面愈合進(jìn)程較STZ組延遲更為明顯,愈合時間顯著延長。與對照組(ND組與db/+組)相比,糖尿病小鼠(STZ組與db/db組)新生上皮化長度減小,尤其在傷后第7天與相應(yīng)對照組相比有著統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。傷后14天兩組雖無統(tǒng)計學(xué)意義,但兩個糖尿病組小鼠新生上皮長度仍低于對照組。創(chuàng)面修復(fù)相關(guān)基因的real time-PCR結(jié)果顯示,傷后第7天,兩個糖尿病組創(chuàng)面組織VEGF-A、Col-Iα mRNA表達(dá)水平均低于對照組(P0.05),傷后第14天糖尿病組上述兩種mRNA的表達(dá)水平仍低于相應(yīng)的對照組,但無統(tǒng)計學(xué)差異。結(jié)論：兩種糖尿病小鼠全層皮膚缺損創(chuàng)面模型均表現(xiàn)出愈合延遲、創(chuàng)面修復(fù)相關(guān)mRNA表達(dá)水平下降的特點,但在創(chuàng)面愈合延遲的程度上,基因自發(fā)突變的糖尿病db/db小鼠更適合進(jìn)行糖尿病慢性創(chuàng)面的研究。第二部分糖尿病db/db小鼠全層皮膚缺損創(chuàng)面愈合特性的研究目的：在前期研究的基礎(chǔ)上,進(jìn)一步探索自發(fā)基因突變的糖尿病db/db小鼠皮膚全層缺損創(chuàng)面愈合過程中的病理生理特征,了解其愈合延遲的主要影響因素,為應(yīng)用其開展糖尿病慢性創(chuàng)面愈合機(jī)制及治療干預(yù)的后續(xù)研究提供理論基礎(chǔ)。方法：10-11周齡自發(fā)突變糖尿病C57BL/KsJ (db/db)小鼠和C57BL/KsJ(db/+)健康對照小鼠各12只,雌雄各半。其中db/db小鼠作為實驗組(簡稱db/db)、db/+小鼠作為對照組(簡稱db/+)。麻醉下復(fù)制1 cm ×1 cm的背部皮膚全層缺損創(chuàng)面,第0、3、7、10、14、17、21、24、28天分別進(jìn)行創(chuàng)面換藥、圖像采集,并于傷后第7、14天創(chuàng)面取材取材。NIH ImageJ圖像分析軟件進(jìn)行創(chuàng)面愈合率的測定,Real time-PCR檢測創(chuàng)面組織VEGF-A、VEGFR2、IL-6、CXCR4、 CXCL12、Col-Iα、α-SMA mRNA的表達(dá),并進(jìn)行CD31免疫組化染色觀察創(chuàng)面組織新生血管形成程度。結(jié)果：與正常對照db/+小鼠相比,糖尿病db/db小鼠創(chuàng)面愈合進(jìn)程延遲,前者傷后17天基本愈合,而后者則延遲到傷后28天。就創(chuàng)面愈合率而言,傷后第7、10、14天,糖尿病db/db小鼠創(chuàng)面愈合率顯著降低(P0.05),同時,傷后第7、14天新生上皮長度亦顯著下降(第7天,P0.05；第14天,P0.01)。實時定量PCR結(jié)果顯示,糖尿病db/db小鼠創(chuàng)面組織血管形成相關(guān)因子VEGF-A、VEGFR2 mRNA相對表達(dá)量在傷后第7、14天均顯著減少(P0.05),炎癥因子IL-6 mRNA相對表達(dá)量在傷后第7、14天亦顯著減少(P0.05),而趨化因子CXCL12及其受體CXCR4 mRNA的相對表達(dá)量雖呈下降趨勢,但與正常對照db/+小鼠相比并無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。細(xì)胞外基質(zhì)成分Col-Iα mRNA的相對表達(dá)量在傷后第7天明顯減少(P0.05),而α-SMA mRNA雖在傷后第弟7、14天均低于正常對照組db/+小鼠但并無無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。創(chuàng)面組織切片CD31染色結(jié)果提示,糖尿病db/db小鼠創(chuàng)面新生血管形成在傷后第7天顯著低于正常對照組db/+小鼠(P0.05)。結(jié)論：自發(fā)基因突變的糖尿病db/db小鼠全層皮膚缺損創(chuàng)面模型具有顯著的愈合延遲,并表現(xiàn)出與臨床患者相似的局部炎癥反應(yīng)低下、炎性細(xì)胞浸潤減少以及表皮增殖、細(xì)胞外基質(zhì)沉積及新生血管形成受抑的愈合特征,可作為糖尿病慢性創(chuàng)面愈合研究的較可靠動物模型。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病小鼠 STZ 慢性創(chuàng)面 糖尿病創(chuàng)面
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R641;R587.2
【目錄】：

• 縮略詞表4-6
• 摘要6-10
• Abstract10-14
• 第一部分 小鼠糖尿病全層皮膚缺損模型的建立14-36
• 引言14-16
• 實驗動物、試劑及主要設(shè)備16-18
• 方法18-23
• 結(jié)果23-31
• 討論31-34
• 參考文獻(xiàn)34-36
• 第二部分 糖尿病db/db小鼠全層皮膚缺損創(chuàng)面愈合特性的研究36-65
• 引言36-38
• 實驗動物,試劑及主要設(shè)備38-40
• 方法40-47
• 結(jié)果47-56
• 討論56-61
• 結(jié)論61-62
• 存在不足及改進(jìn)方法62-63
• 參考文獻(xiàn)63-65
• 綜述65-77
• 參考文獻(xiàn)74-77
• 碩士研究生期間發(fā)表文章情況77-78
• 致謝78

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本文編號：301622