本文關(guān)鍵詞：空腸彎曲菌致豚鼠不同時(shí)間段周圍神經(jīng)病理損傷的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的1通過經(jīng)消化道感染空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni,C.jejuni),構(gòu)建豚鼠周圍神經(jīng)損傷模型。2觀察豚鼠經(jīng)消化道感染空腸彎曲菌后,不同時(shí)間段內(nèi)周圍神經(jīng)的病理損傷有何差異,從而為建立空腸彎曲菌相關(guān)的周圍神經(jīng)病的動(dòng)物模型提供參考依據(jù)。方法1制備空腸彎曲菌菌懸液選取自AMAM型GBS患者糞便中分離、培養(yǎng)的空腸彎曲菌lulei株,經(jīng)中國和美國疾病預(yù)防控制中心鑒定為空腸彎曲菌。將該菌在42℃微需氧條件下(10%CO2、5%O2、85%N2)培養(yǎng)24小時(shí)后傳代至哥倫比亞血平板培養(yǎng)基上,培養(yǎng)24小時(shí),并連續(xù)傳至第3代純化菌株。并經(jīng)革蘭氏染色、馬尿酸水解實(shí)驗(yàn)以及分子生物學(xué)進(jìn)行細(xì)菌鑒定后,收取菌株制備成濃度為3×109CFU/ml的菌懸液。2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組購買SPF級(jí)4周齡Hartley豚鼠55只,飼養(yǎng)一周。按照體重、體重增長速度及毛色等條件篩選出50只健康豚鼠。將篩選出的50只健康豚鼠,隨機(jī)分為布氏肉湯組A(10只)、空白對(duì)照組B(10只)、實(shí)驗(yàn)組E(30只)。根據(jù)不同的解剖時(shí)間(末次灌喂后第1、2、3、4、5周)將布氏肉湯組和對(duì)照組再次隨機(jī)分成5個(gè)亞組(各2只),布氏肉湯組A分別標(biāo)記為A1、A2、A3、A4、A5;空白對(duì)照組B分別標(biāo)記為B1、B2、B3、B4、B5;根據(jù)不同的解剖時(shí)間(末次灌喂后第1、2、3、4、5周)將實(shí)驗(yàn)組30只豚鼠再次隨機(jī)分為5個(gè)亞組(各6只),分別標(biāo)記為E1、E2、E3、E4、E5組。若豚鼠出現(xiàn)癱瘓等明顯的臨床癥狀,因?qū)嶒?yàn)組的干預(yù)處理是統(tǒng)一的,可以將發(fā)生癱瘓的豚鼠合并為一組,標(biāo)記為實(shí)驗(yàn)組T。篩選后余下的5只豚鼠繼續(xù)飼養(yǎng),設(shè)為備用對(duì)照組,其中3只處理同布氏肉湯組,2只同空白對(duì)照組。3造模方案實(shí)驗(yàn)組(E組)豚鼠給予灌喂活菌菌懸液,每只豚鼠在每次灌喂前禁食15小時(shí)、禁水4小時(shí)。每周中連續(xù)3天進(jìn)行灌喂菌液(1次/天),共進(jìn)行三周,每周的灌喂時(shí)間相同。每只豚鼠灌喂完畢后,間隔半小時(shí)后立即給予食物及無菌水。實(shí)驗(yàn)組每只豚鼠每次灌喂3×109CFU/ml的空腸彎曲菌菌懸液1ml;A組(布氏肉湯對(duì)照組)給予滅菌的布氏肉湯1ml;B組(空白對(duì)照組)不予處理。4實(shí)驗(yàn)動(dòng)物觀察及標(biāo)本取材自灌喂當(dāng)日起每日觀察豚鼠的臨床癥狀(參考Hartley豚鼠EAN模型的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn),發(fā)病程度分為0~5級(jí)。0級(jí):正常;1級(jí):兩后腳趾稍拖拽地面;2級(jí):兩后腳趾明顯拖地;3級(jí):兩后肢顯著拖地,兩后肢偏向同一側(cè);4級(jí):兩后肢完全癱瘓;5級(jí):四肢均癱瘓,甚至呼吸抑制[1]),定期稱量豚鼠體重,觀察豚鼠的活動(dòng)能力、精神狀況以及皮毛色澤,有無腹瀉等。于末次灌喂后第1,2,3,4,5周分批解剖相應(yīng)的組別A1、B1、E1,A2、B2、E2,A3、B3、E3,A4、B4、E4,A5、B5、E5組。4%水合氯醛(10ug/g)麻醉豚鼠,灌注解剖后,分別取同側(cè)坐骨神經(jīng)近端保存于4%多聚甲醛中,擇期進(jìn)行鋨酸染色觀察周圍神經(jīng)病變。5數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析每個(gè)實(shí)驗(yàn)標(biāo)本經(jīng)鋨酸染色后,隨機(jī)挑選100根神經(jīng)單絲,于光鏡下進(jìn)行觀察,統(tǒng)計(jì)出有病變的神經(jīng)單絲個(gè)數(shù),計(jì)算出發(fā)病率(病變單絲數(shù)/100*100%),采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS13.0根據(jù)病變率進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。結(jié)果1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物觀察1.1臨床癥狀豚鼠經(jīng)空腸彎曲菌灌喂結(jié)束后,實(shí)驗(yàn)組中共有6只豚鼠發(fā)病,其中4只在灌喂結(jié)束后即刻出現(xiàn)癱瘓,2只在灌喂結(jié)束后第4周出現(xiàn)癱瘓。均表現(xiàn)為活動(dòng)力減弱,雙耳及唇部紫紺,呼吸急促,身體略有顫抖,雙后肢行動(dòng)差,腹部皮毛臟。自發(fā)病后當(dāng)天進(jìn)行麻醉豚鼠,灌注解剖取材。并將癱瘓的豚鼠合并為一組,標(biāo)記為實(shí)驗(yàn)組T,根據(jù)臨床癥狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分均為4-5級(jí)。其它實(shí)驗(yàn)組豚鼠略有脫毛現(xiàn)象,肢體活動(dòng)未見明顯異常,根據(jù)臨床癥狀評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分均為0級(jí)(Fig.5)。1.2體重自灌喂細(xì)菌后,實(shí)驗(yàn)組豚鼠體重略低于對(duì)照組,但是經(jīng)重復(fù)測量單因素方差分析后,實(shí)驗(yàn)組豚鼠體重和對(duì)照組無顯著差異,P0.05,(Fig.6)。2周圍神經(jīng)病理表現(xiàn)對(duì)照組豚鼠坐骨神經(jīng)纖維也存在纖維粗細(xì)不等,皺縮等現(xiàn)象(Fig.7);各實(shí)驗(yàn)組中豚鼠坐骨神經(jīng)均有纖維粗細(xì)不等,髓鞘向內(nèi)側(cè)突起、節(jié)段性消失、皺縮、斷裂;髓鞘內(nèi)有卵圓狀物質(zhì)沉積,節(jié)旁區(qū)和郎飛結(jié)處多見;髓鞘外側(cè)成鋸齒樣,呈“長城樣”改變(Fig.8)。3神經(jīng)纖維病變率及統(tǒng)計(jì)分析:3.1神經(jīng)纖維病變率對(duì)照組豚鼠神經(jīng)單絲病理存在形態(tài)上的異常,但是實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組豚鼠周圍神經(jīng)的形態(tài)存在顯著性差異(P0.05),即實(shí)驗(yàn)組豚鼠的神經(jīng)單絲存在病變。實(shí)驗(yàn)癱瘓組豚鼠神經(jīng)病變率為42.0%,實(shí)驗(yàn)組E1、E2、E3、E4、E5組病變率分別為15.3%,18.0%,29.0%,39.0%,38.7%(Table 2)。3.2病變率統(tǒng)計(jì)分析布氏肉湯組和空白對(duì)照組豚鼠神經(jīng)纖維病變率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P0.05(Table 3),可排除布氏肉湯對(duì)神經(jīng)纖維的影響。不同時(shí)間段解剖的空白對(duì)照組及布氏肉湯組豚鼠神經(jīng)纖維病變率無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P0.05(Table 4),可認(rèn)為不同的時(shí)間段解剖豚鼠對(duì)神經(jīng)病變率無影響。不同時(shí)間段解剖的實(shí)驗(yàn)組豚鼠神經(jīng)纖維病變率有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,P0.05(Table 5)。認(rèn)為不同時(shí)間段解剖的實(shí)驗(yàn)組之間發(fā)病率不全相等,進(jìn)一步進(jìn)行組間比較,采用χ2分割法,檢驗(yàn)水準(zhǔn)取α=0.05,校正后檢驗(yàn)水準(zhǔn)α′=0.0033。通過spss13.0曲線擬合方法得出實(shí)驗(yàn)組豚鼠病變率和時(shí)間存在一定的依存關(guān)系(Table 6)。結(jié)合χ2分割組間比較,可得出豚鼠經(jīng)活菌灌喂后第4周(E4)神經(jīng)病變率和癱瘓組(T)豚鼠神經(jīng)病變率無差異,且此兩階段神經(jīng)病變率較其它時(shí)間段解剖的實(shí)驗(yàn)組高。結(jié)論1自AMAN型GBS患者糞便中分離培養(yǎng)的空腸彎曲菌經(jīng)消化道感染4周齡豚鼠能夠?qū)е码嗍笾車窠?jīng)損傷,但并不是所有的神經(jīng)單絲都有損傷,存在一定的病變率;部分豚鼠出現(xiàn)癱瘓等臨床癥狀。2在空腸彎曲菌導(dǎo)致4周齡豚鼠的周圍神經(jīng)病損傷模型中,不同時(shí)間段內(nèi)神經(jīng)損傷統(tǒng)計(jì)率不同,癱瘓組豚鼠以及灌喂結(jié)束后第4周豚鼠神經(jīng)損傷率比較嚴(yán)重。
【關(guān)鍵詞】：空腸彎曲菌 周圍神經(jīng)損傷 吉蘭-巴雷綜合征 hartely豚鼠 掕酸染色
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R745
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• 英文摘要8-12
• 英文縮寫12-13
• 前言13
• 材料與方法13-21
• 結(jié)果21-26
• 附圖26-31
• 附表31-34
• 討論34-38
• 結(jié)論38
• 參考文獻(xiàn)38-40
• 綜述40-55
• 參考文獻(xiàn)47-55
• 致謝55-56
• 個(gè)人簡歷56

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