本文關(guān)鍵詞：二苯乙烯苷對糖尿病腎病的作用及初步機(jī)制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:糖尿病有多種并發(fā)癥,糖尿病腎病(Diabetiene Phro Pathy,DN)是其中最常見的一種,也是患者的重要死亡原因。由于2型糖尿病的起病比較隱匿,大多數(shù)患者往往不能及時(shí)發(fā)現(xiàn),據(jù)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì),有5%的患者在診斷糖尿病時(shí)就發(fā)現(xiàn)已經(jīng)伴有DN的腎臟損傷。而且,當(dāng)患者在臨床上表現(xiàn)出相關(guān)癥狀時(shí),其死亡率明顯增加,而且治療十分困難。因此,DN也就成為了當(dāng)今世界糖尿病領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。隨著DN的發(fā)病率不斷升高和社會人口的老齡化,這個(gè)數(shù)據(jù)還會不斷升高。另有研究表明,在這些終末期的腎臟疾病患者中,約有40%是由DN導(dǎo)致的,每年新增終末期腎病患者中由DN引發(fā)的高達(dá)50%以上。我國DN的發(fā)生率約為34.7%,已成為慢性腎功能衰竭的主要原因,其危害不容忽視。DN的病理機(jī)制是一個(gè)動(dòng)態(tài)的發(fā)展過程,整個(gè)疾病的病程長,并且有大量的研究成果表明DN是多種因素作用的結(jié)果,在臨床治療上存在一定的困難。DN的臨床表現(xiàn)變化復(fù)雜,欠期甚至沒有臨床癥狀,晚期可導(dǎo)致終末期腎病的謝紊亂。目前,治療DN的的方法大都是健康療法,并且以預(yù)防為主,對其病機(jī)不同學(xué)者觀點(diǎn)有所差異,各有側(cè)重。其中,中藥防治DN作用機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究受到廣泛關(guān)注。為了更好且有效地解決這一難題,進(jìn)一步深入研究其意義深遠(yuǎn)。所以,我們通過進(jìn)一步的深化研究中藥對DN的作用機(jī)制,為闡明DN的發(fā)病機(jī)制,篩選出有效的藥物進(jìn)行深化的研究以及提出科學(xué)的依據(jù)。DN的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明。現(xiàn)今實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明,DN與糖脂代謝紊亂,氧化應(yīng)激反應(yīng),血管活性物質(zhì),血流動(dòng)力學(xué)改變等多種因素有關(guān),從而引起慢性腎臟損傷。隨著人們對氧化應(yīng)激反應(yīng)在DN發(fā)病機(jī)制中的重要性的深入研究,氧化應(yīng)激反應(yīng)在對DN的研究越來越受到重視,而抗氧化也成了治療DN的新靶點(diǎn)和新熱點(diǎn)。二苯乙烯苷(TSG)是我國傳統(tǒng)中藥何首烏中提取的一種具有顯著藥理活性的水溶性成分。目前,大量文獻(xiàn)和研究成果表明,TSG在治療多種疾病時(shí)都參與了氧化應(yīng)激反應(yīng),且具有抗衰老、抗炎、抗菌、抗氧化、抗動(dòng)脈粥樣硬化等作用,但是否對DN具有良好的治療效果尚未見文獻(xiàn)報(bào)道。據(jù)此,我們提出假說:TSG可能通過調(diào)節(jié)動(dòng)物體內(nèi)的氧化應(yīng)激水平,提高機(jī)體的抗氧化性,從而達(dá)到治療DN的目的。為證實(shí)此假說,本課題擬采用雄性大鼠和大鼠腎小球系膜細(xì)胞模型探討TSG對鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的DN大以及高糖環(huán)境下大鼠腎小球系膜細(xì)胞的氧化應(yīng)激作用及其機(jī)制。方法:1動(dòng)物模型的制作與用藥選取體重為250g-280g的SD大鼠作為實(shí)驗(yàn)對象,所有動(dòng)物均采用普通大鼠專用飼料喂養(yǎng),隨意飲水,攝食,室溫控制在25℃左右,濕度70%,12小時(shí)交替照明。將60只大鼠隨機(jī)分為正常對照組10只、DN模型組50只。大鼠實(shí)驗(yàn)前禁食12小時(shí)(不禁水),將鏈脲佐菌素溶于p H4.4檸檬酸檸檬酸鈉緩沖液中,按50mg/kg一次性腹腔內(nèi)注射,3天后檢測動(dòng)物的血糖濃度大于16.7mmol/L,尿糖陽性,確定為糖尿病成型;動(dòng)物繼續(xù)糖尿病成模4周后,使用尿液分析儀檢測尿液生化指標(biāo),尿蛋白明顯增加,說明DN模型成功。選取造模成功大鼠按照體重區(qū)段隨機(jī)分為5組,分別為模型組(生理鹽水5m L/kg,2次/天,ip.),厄貝沙坦(厄貝沙坦片,6mg/kg,ip.),TSG低劑量組(20mg/kg,ip.),TSG中劑量組(40mg/kg,2次/天,ip.),TSG高劑量組(60mg/kg,2次/天,ip.)。2 DN大鼠血和尿生化指標(biāo)的檢測分別在給藥后第2、4、6周,用取血針從尾部取血檢測血糖;分別在給藥后第2、4、6周,大鼠麻醉,眼眶取血1.5m L,離心取上層血清;實(shí)驗(yàn)結(jié)束前,通過腹腔取血的方法收集血液并離心取上層血清。使用全自動(dòng)生化分析儀測定血清中高密度脂蛋白,低密度脂蛋白,糖化血清蛋白,血尿素氮,血肌酐等的表達(dá)水平;用比色法檢測試尿中總蛋白的含量。3大鼠腎小球系膜細(xì)胞的培養(yǎng)及周期和凋亡的檢測將凍存的細(xì)胞快速放入37℃的水浴中,輕搖凍存管,使其在一分鐘內(nèi)全部融化,將融化的細(xì)胞離心后棄上清,加入含10%FBS和雙抗的高糖培養(yǎng)基反復(fù)吹打,通過顯微鏡觀察,當(dāng)細(xì)胞均勻的懸浮在培養(yǎng)基中進(jìn)行細(xì)胞傳代,并觀察其細(xì)胞形態(tài),將生長狀態(tài)良好的細(xì)胞培養(yǎng)在96孔培養(yǎng)板中,待細(xì)胞帖壁后,向培養(yǎng)板中加入不同濃度的TSG,采用MTT進(jìn)行細(xì)胞增殖分析;采用流式細(xì)胞儀檢測在不同濃度的藥物干預(yù)下,大鼠腎小球系膜細(xì)胞的周期變化和凋亡變化。4 TSG對DN大鼠血清中氧化應(yīng)激指標(biāo)的檢測DN大鼠的血液通過離心后取血清;采用氧化應(yīng)激指標(biāo)試劑盒,通過全自動(dòng)生化儀進(jìn)行分析,測定出不同濃度的TSG對DN大鼠血清中NO、NOS、MDA、SOD等指標(biāo)的影響;在通RT-PCR及Western blot方法檢測血清中相關(guān)蛋白的表達(dá)。5 TSG對DN大鼠組織中抗氧化酶基因HO-1,γ-GCS表達(dá)蛋白表達(dá)的影響給藥8周后,取出處死大鼠的腎臟,稱重,檢測不同組大鼠的腎重系數(shù);將稱重過的組織部分進(jìn)行勻漿,通過Western blot法檢測不同給藥濃度腎臟組織中抗氧化酶基因HO-1,γ-GCS表達(dá)等蛋白的表達(dá)。結(jié)果:1 TSG能夠明顯改善DN大鼠的腎臟損傷通過DN大鼠的血清生化指標(biāo)結(jié)果顯示,模型組大鼠與正常組大鼠相比,血糖明顯升高,血清中各項(xiàng)指標(biāo)明顯異常,出現(xiàn)三多一少癥狀,死亡率升高,通過對模型組大鼠進(jìn)行TSG藥物干預(yù),發(fā)現(xiàn)TSG可以明顯降低DN大鼠血糖,改善模型組大鼠血生化指標(biāo)異常,降低死亡率;通過稱量大鼠的體重和腎臟重量,發(fā)現(xiàn)TSG可以明顯降低DN大鼠的腎重系數(shù);在細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,通過MTT結(jié)果和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果我們不難發(fā)現(xiàn),TSG可以改變高糖環(huán)境下腎小球系膜細(xì)胞的周期和凋亡,減少高糖對細(xì)胞的損傷。2 TSG改善體內(nèi)及細(xì)胞的氧化應(yīng)激反應(yīng)氧化應(yīng)激試劑盒、RT-PCR和Western Blot的檢測結(jié)果證實(shí)TSG確實(shí)可以調(diào)節(jié)體內(nèi)的氧化應(yīng)激反應(yīng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,TSG可以明顯的改善動(dòng)物血清和細(xì)胞上清中氧化應(yīng)激指標(biāo)。3 TSG對DN大鼠的腎組織及腎小球系膜細(xì)胞凋亡的保護(hù)通過Western blot法檢測不同給藥濃度腎臟組織中和細(xì)胞上清中Nrf2蛋白的表達(dá),發(fā)現(xiàn)各組大鼠腎組織和細(xì)胞上清中均有表達(dá),其中DN組的蛋白表達(dá)明顯高于其他組;通過電鏡觀察,發(fā)現(xiàn)DN組大鼠的腎組織細(xì)胞中有大量的系膜細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)向邊緣靠攏,聚集成團(tuán)等細(xì)胞凋亡現(xiàn)象,而在TSG干預(yù)后,這種凋亡現(xiàn)象有明顯好轉(zhuǎn)。結(jié)論:TSG能夠有效降低DN大鼠血糖,抑制DN大鼠腎小球系膜細(xì)胞增生,改善血清中各項(xiàng)生化指標(biāo),對DN大鼠腎臟具有保護(hù)作用。Nrf2蛋白通路參與了DN腎臟組織中細(xì)胞的凋亡,TSG通過抑制Nrf2通路蛋白發(fā)揮其對DN大鼠腎組織的保護(hù)作用。TSG可以明顯的改善DN大鼠和大鼠腎小球系膜細(xì)胞內(nèi)的氧化應(yīng)激反應(yīng),從而達(dá)到對DN大鼠腎組織損傷的保護(hù)。
【關(guān)鍵詞】：糖尿病腎病 二苯乙烯苷 氧化應(yīng)激 大鼠 機(jī)制
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R285.5
【目錄】：

• 縮略語表5-6
• 中文摘要6-10
• 英文摘要10-15
• 前言15-16
• 文獻(xiàn)回顧16-25
• 1 TSG 藥理研究進(jìn)展16-19
• 2 DN 研究進(jìn)展19-22
• 3 氧化應(yīng)激反應(yīng)研究進(jìn)展22-23
• 4 DN 動(dòng)物模型23-25
• 第一部分 TSG對STZ誘導(dǎo)的DN大鼠的藥效學(xué)研究25-38
• 1 實(shí)驗(yàn)材料25-27
• 2 方法27-33
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果33-37
• 4 討論37-38
• 第二部分 TSG對DN大鼠氧化應(yīng)激反應(yīng)相關(guān)因子的影響38-50
• 1 實(shí)驗(yàn)材料38-41
• 2 實(shí)驗(yàn)方法41-45
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果45-49
• 4 討論49-50
• 第三部分 TSG對高糖培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞抑制增殖和促凋亡作用50-57
• 1 實(shí)驗(yàn)材料50-51
• 2 實(shí)驗(yàn)方法51-54
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果54-56
• 4 討論56-57
• 第四部分 TSG對高糖培養(yǎng)的腎小球系膜細(xì)胞的抗氧化應(yīng)激反應(yīng)的影響57-63
• 1 實(shí)驗(yàn)材料57-58
• 2 方法58-59
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果59-62
• 4 討論62-63
• 全文小結(jié)63-64
• 參考文獻(xiàn)64-73
• 個(gè)人簡歷和研究成果73-74
• 致謝74

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前5條

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本文編號：292579