下丘腦穹窿周區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞在吸入麻醉覺(jué)醒過(guò)程中的作用研究
【學(xué)位單位】:中國(guó)人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位年份】:2018
【中圖分類(lèi)】:R614
【部分圖文】:
圖 1.主要的麻醉藥及臨床首次運(yùn)用時(shí)間[1]星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)神經(jīng)元興奮性的調(diào)控人類(lèi)大腦由兩類(lèi)細(xì)胞組成:一類(lèi)是神經(jīng)元,另一類(lèi)是神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞。自 1846 年dolfVirchow 首次描述神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞以來(lái),科學(xué)界對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞,尤其是星形膠質(zhì)細(xì)形態(tài)結(jié)構(gòu)及功能做了廣泛的研究。近期研究發(fā)現(xiàn)星形膠質(zhì)細(xì)胞在神經(jīng)元的營(yíng)養(yǎng)、結(jié)構(gòu)支撐、神經(jīng)元興奮性及突觸傳遞的調(diào)控中均發(fā)揮著重要作用。神經(jīng)元興奮性是神經(jīng)元活動(dòng)和信號(hào)傳遞的基礎(chǔ),依賴(lài)于神經(jīng)元本身的代謝活動(dòng)觸內(nèi)外興奮性和抑制性神經(jīng)遞質(zhì)系統(tǒng)的調(diào)控。研究表明,星形膠質(zhì)細(xì)胞能夠很伸出和縮回很細(xì)的突起,接觸或脫離動(dòng)態(tài)的樹(shù)狀突起和軸突終末[13]。在許多突,星形膠質(zhì)細(xì)胞的突起將突觸前和突觸后神經(jīng)元的突觸結(jié)構(gòu)一起包裹起來(lái)形成聯(lián)突觸”結(jié)構(gòu)[14]。“三聯(lián)突觸”是星形膠質(zhì)細(xì)胞影響神經(jīng)元興奮性和突觸傳遞構(gòu)基礎(chǔ)。目前觀點(diǎn)認(rèn)為,星形膠質(zhì)細(xì)胞對(duì)神經(jīng)元興奮性和突觸傳遞的調(diào)控主要
圖2.A為鉗制神經(jīng)元示意圖,B為自帶熒光的Orexin神經(jīng)元2)細(xì)胞鉗制:將拉制好的電極內(nèi)灌入約 1/3K+內(nèi)液,電極尖端阻抗為 4-8MΩ。用玻璃注極輕微的正壓以避免尖端被溶液中的雜質(zhì)干擾,利用微操儀移動(dòng)玻璃電液中,調(diào)整電極位置于屏幕中央,然后同時(shí)下調(diào)鏡頭與電極,使電極尖端胞表面正上方,將液接電位歸零。再次以 μm/sec 級(jí)速度下調(diào)玻璃電極,面出現(xiàn)凹陷,且顯示封接電阻增加了 0.1-0.2MΩ。此時(shí)撤去正壓,并使用抽吸細(xì)胞膜給予負(fù)壓,使封接電阻達(dá) 1GΩ,再將鉗制電壓鉗制逐漸調(diào)至,等待 1min 左右至基線平穩(wěn)后使用注射器短促負(fù)壓吸引破膜,破膜后可充放電反應(yīng),形成全細(xì)胞鉗制模式。3)神經(jīng)元靜息膜電位(RMP)及自發(fā)動(dòng)作電位(AP)的記錄:細(xì)胞破膜穩(wěn)定 3-5 分鐘后,轉(zhuǎn)換至電流鉗模式,正常灌流液灌流,記錄 更換含藥物(FC)的灌流液記錄 5min,再轉(zhuǎn)換至正常灌流液記錄 10min
圖 4.FC 對(duì) Orexin 神經(jīng)元自發(fā)的興奮性突觸后電流(sEPSC)及抑制性突觸后電流(sIPSC)的影響。A)B)Orexin 神經(jīng)元鉗制到-70mV,阻斷 GABA 突觸傳遞,給予 FC 后 sEPSC 的頻率和幅值未發(fā)生明顯變化;C)D)Orexin 神經(jīng)元鉗制在+30mV,阻斷 NMDA/AMPA 突觸傳遞,給予 FC 后 sIPSC 的頻率和幅值無(wú)明顯變化;4.1.3 Orexin 神經(jīng)元的鑒定為確保統(tǒng)計(jì)分析的數(shù)據(jù)均為 Orexin 神經(jīng)元,我們記錄時(shí)在電極內(nèi)液中加入Biocytin,記錄后進(jìn)行 Orexin 神經(jīng)元、Biocytin 免疫熒光染色。如圖 5A 為 Orexin 神經(jīng)元,5B 為 Biocytin 標(biāo)記的神經(jīng)元,5C 表示兩者共定位。Scale bar=50μm
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