研究背景目前,心源性猝死已成為威脅人類生命的重要疾病,心室顫動(dòng)是心源性猝死的主要原因。隨著心室顫動(dòng)持續(xù)時(shí)間的延長(zhǎng),心肺復(fù)蘇的成功率迅速下降。復(fù)蘇指南明確指出,心臟停搏后每耽擱1分鐘,生存率下降6-10%。表明心室顫動(dòng)的治療效果與其持續(xù)時(shí)間關(guān)系密切,長(zhǎng)時(shí)程室顫預(yù)后極差,復(fù)蘇時(shí)間是影響生存率的關(guān)鍵因素。研究表明：除對(duì)患者盡早進(jìn)行心肺復(fù)蘇外,根據(jù)室顫的不同階段,選擇不同的治療策略對(duì)生存率的改善有重要意義。Weisfeldt M等通過(guò)對(duì)大量臨床復(fù)蘇結(jié)果回顧分析后,提出心室顫動(dòng)的三階段理論,其三階段包括：1：電學(xué)階段：心室顫動(dòng)發(fā)生后4分鐘內(nèi); 2.循環(huán)節(jié)段：心室顫動(dòng)發(fā)生后4-10分鐘；此階段血液循環(huán)出現(xiàn)障礙,影響心肌供血3.代謝階段,心室顫動(dòng)10分鐘以后,機(jī)體出現(xiàn)代謝紊亂。并且認(rèn)為心室顫動(dòng)在不同的階段,對(duì)治療的反應(yīng)不同,即存在不同的治療窗口。在電學(xué)階段,首選直流電除顫治療；在循環(huán)階段,先行有效的心肺復(fù)蘇再行電除顫較先行電除顫后行心肺復(fù)蘇將提高復(fù)蘇率;而到代謝階段后,兩種治療措施效果都不理想。目前對(duì)室顫不同階段的病理生理機(jī)制仍未完全明了。有研究認(rèn)為,電學(xué)階段,機(jī)體處于代償狀態(tài),直接電除顫最為有效；在循環(huán)階段,先行心肺復(fù)蘇有利于提供有限的血液循環(huán),從而保證一定量的氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)供應(yīng),并帶走一部分因?yàn)槿毖a(chǎn)生的有害的代謝產(chǎn)物,有利于降低室顫的除顫閾值,提高除顫成功率。而到代謝階段時(shí),由于毒性代謝產(chǎn)物的聚集,高能磷酸鍵的消耗殆盡,血流淤滯造成凝血系統(tǒng)的激活,以及心肺復(fù)蘇所致再灌注損傷,均使得復(fù)蘇率急劇下降。提示在此階段應(yīng)注重綜合治療,可見(jiàn),對(duì)室顫所致內(nèi)環(huán)境病理機(jī)制的理解決定了治療策略的選擇和預(yù)后的改善。正確有效的心肺復(fù)蘇是心室顫動(dòng)搶救成功的關(guān)鍵。據(jù)報(bào)道,目前可有30-40%的心室顫動(dòng)患者恢復(fù)自主循環(huán),但長(zhǎng)期存活率僅有10～30%。初期心肺復(fù)蘇成功的患者往往存在復(fù)蘇后心功能不全,此常為心肺復(fù)蘇初期成功的患者仍有較高死亡率的重要原因。有關(guān)室顫復(fù)蘇后心功能不全的機(jī)制已有不少研究。心室顫動(dòng)復(fù)蘇后的病理生理變化過(guò)程與缺血再灌注損傷相似。缺血再灌注發(fā)生后,激活體內(nèi)多種生物活性物質(zhì)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑如氧自由基增加,鈣超載,炎癥因子TNF-α、IL-6等釋放,進(jìn)而促進(jìn)多種活性蛋白酶合成增加,加劇心肌損傷�；|(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)與基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子(tissue inhibitors of metalloproteinase,TIMPs)參與了多種心血管疾病的發(fā)生發(fā)展過(guò)程。除了對(duì)細(xì)胞外基質(zhì)的合成與代謝起著重要的調(diào)節(jié)作用,MMP-9還可以裂解肌球蛋白重鏈,進(jìn)而破壞心肌整體收縮裝置。近期研究表明MMPs與TIMPs也參與了急性的病理生理過(guò)程如血小板的聚集、血管張力的調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)以及缺血再灌注損傷。有研究表明心肌發(fā)生缺血再灌注10min時(shí),可發(fā)現(xiàn)心肌組織TIMP-1減少,MMP-9表達(dá)增多以及活性的增強(qiáng),同時(shí)TIMP-1的減少與MMP-9活性的增強(qiáng)與左室功能降低有一定的相關(guān)性。心肺復(fù)蘇后心肌再灌注產(chǎn)生的多種炎癥細(xì)胞因子及活性氧自由基等均可調(diào)節(jié)MMPs和TIMPs的表達(dá)。目前對(duì)于室顫復(fù)蘇后心功能的下降與MMP-9和TIMP-1變化關(guān)系的研究未見(jiàn)報(bào)道。我們實(shí)驗(yàn)的目的在于研究犬心室顫動(dòng)的持續(xù)過(guò)程中生理生化過(guò)程的連續(xù)性變化,從病理生理機(jī)制方面尋找其內(nèi)在規(guī)律,以指導(dǎo)臨床治療；通過(guò)心室顫動(dòng)復(fù)蘇后動(dòng)物模型研究TIMP-1與MMP-9的表達(dá)變化以及對(duì)心室顫動(dòng)復(fù)蘇后心功能的影響。研究目的：1.通過(guò)對(duì)長(zhǎng)時(shí)程心室顫動(dòng)犬體內(nèi)生理和生化過(guò)程的變化進(jìn)行研究,試圖從病理生理方面揭示室顫發(fā)生發(fā)展的內(nèi)在規(guī)律；2.通過(guò)心室顫動(dòng)復(fù)蘇動(dòng)物模型研究TIMP-1與MMP-9的表達(dá)變化；3.研究TIMP-1與MMP-9的表達(dá)變化對(duì)心室顫動(dòng)復(fù)蘇后心功能的影響。研究方法：1.心室顫動(dòng)動(dòng)物模型的構(gòu)建和分組成年犬30只,(體重13.5-18.5kg),隨機(jī)分為3組,假手術(shù)組(n=10),8min室顫組(n=10)和12min室顫組(n=10)。以3%戊巴比妥納30mg/kg腹腔內(nèi)麻醉成功后,仰臥位固定,肢體去毛后粘貼三導(dǎo)聯(lián)電極,外聯(lián)多導(dǎo)電生理儀以取得體表心電圖信號(hào)。穿刺股動(dòng)、靜脈,置壓力導(dǎo)管于升主動(dòng)脈根部和右心房,外接Powerlab型八道生理記錄儀監(jiān)測(cè)壓力變化及取血樣用。穿刺心尖部皮下植入雙向致顫電極,以30V,60Hz交流電誘發(fā)心室顫動(dòng)。當(dāng)1.心電圖顯示室顫波形2.主動(dòng)脈壓力失去波動(dòng),降至30mmHg以下即為室顫模型成功建立。觀察期12min。假手術(shù)組除不致顫外,余同致顫組處理。2.各組動(dòng)物的生理生化指標(biāo)、心功能及心肌TIMP-1和MMP-9濃度的監(jiān)測(cè)2.1.血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)連續(xù)記錄室顫前、室顫發(fā)生后12分鐘內(nèi)及復(fù)蘇后犬主動(dòng)脈收縮壓(aortic systolic pressure, AOSP)、主動(dòng)脈舒張壓(aortic diastolic pressure, AODP)、主動(dòng)脈壓力(aortic pressure, AOP)和右房壓(right atrial pressure, RAP)。冠脈灌注壓(coronary perfusion pressure, CPP)為AODP與RAP的差值,室顫后復(fù)蘇前為AOP與RAP的差值。以心室顫動(dòng)后每個(gè)時(shí)間點(diǎn)后20秒內(nèi)測(cè)量壓力的平均值作為該時(shí)間點(diǎn)主動(dòng)脈壓力數(shù)值。2.2.血液生化、血?dú)夥治黾澳?抗凝系列指標(biāo)在心室顫動(dòng)前,室顫后每隔1min取動(dòng)靜脈血,動(dòng)脈血取得后立即行血?dú)夥治鰷y(cè)定,測(cè)定其動(dòng)脈血氧分壓(Arterial oxygen partial pressure, PaO2)、二氧化碳分壓(Carbon dioxide partial pressure)、動(dòng)脈血pH值、乳酸濃度等指標(biāo)；靜脈血取得后應(yīng)用血液生化儀測(cè)定肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、肌鈣蛋白、血清鉀離子、鈉離子、氯離子、鈣離子濃度等血液生化指標(biāo),凝血／抗凝系列指標(biāo)則包括纖維蛋白原(Fibrinogen, Fb)、抗凝血酶Ⅲ(antithrombin-Ⅲ, AT-Ⅲ))、和D-二聚體(D-Dimer)濃度。2.3.超聲心動(dòng)圖測(cè)量動(dòng)物致顫前和恢復(fù)自主循環(huán)1小時(shí)后行胸二維超聲分別測(cè)量致顫前,ROSC后左房?jī)?nèi)徑(left atrium dimension, LAD),左室舒張期內(nèi)徑(left ventricular diastolic dimension, LVDd)和左室射血分?jǐn)?shù)(left ventricular ejection fraction, LVEF)2.4.心肌TIMP-1和MMP-9測(cè)定室顫維持8min或12min后,進(jìn)行心肺復(fù)蘇和電除顫。免疫組化和Western Blot技術(shù)檢測(cè)假手術(shù)組、心室顫動(dòng)8min組、12min組復(fù)蘇成功犬心肌TIMP-1和MMP-9的水平。3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析所用數(shù)據(jù)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。數(shù)值變量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示,兩組間均數(shù)比較采用小樣本t檢驗(yàn),多組間均數(shù)比較采用One-Way ANOVA方差分析,以P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,30只犬中。26只一次誘發(fā)心室顫動(dòng)成功,4只二次誘發(fā)心室顫動(dòng)成功,均持續(xù)12min。復(fù)蘇后8min室顫組和12min室顫組分別有7只和5只動(dòng)物恢復(fù)自主循環(huán)。1各組動(dòng)物基礎(chǔ)狀態(tài)各項(xiàng)指標(biāo)比較實(shí)驗(yàn)前各組動(dòng)物的體重,心率,左心房?jī)?nèi)徑、左心室內(nèi)徑、左室射血分?jǐn)?shù)以及血流動(dòng)力學(xué)、血?dú)夥治觥⒛笜?biāo)和血生化指標(biāo)均無(wú)顯著性差異。2室顫后各項(xiàng)生理生化指標(biāo)2.1血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)在室顫發(fā)生后5分鐘內(nèi),主動(dòng)脈內(nèi)壓持續(xù)下降,與室顫前相比,下降具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05；右心房壓力在心室顫動(dòng)的第一分鐘內(nèi)升高,在以后的4分鐘內(nèi)逐漸下降,于5分鐘時(shí)逐漸穩(wěn)定；冠狀動(dòng)脈灌注壓迅速下降。于5分鐘下降至基線,之后無(wú)明顯改變。冠脈灌注壓代表了心肌供血狀態(tài)。2.2血液生化指標(biāo)與室顫前相比,血肌酸激酶、肌酸激酶同工酶、肌鈣蛋白、血清鉀離子、鈉離子、氯離子、鈣離子濃度均未取得統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.3血?dú)夥治鲋笜?biāo)心室顫動(dòng)后,動(dòng)脈血Pa02逐漸降低,心室顫動(dòng)5分鐘后,與室顫前相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。PaCO2逐漸升高,與室顫前相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。血清乳酸含量逐漸升高；心室顫動(dòng)6分鐘后,與室顫前相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。動(dòng)脈血pH值逐漸下降,心室顫動(dòng)8分鐘后,與室顫前相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。2.4凝血/抗凝系列指標(biāo)心室顫動(dòng)后,纖維蛋白原濃度持續(xù)下降,于5分鐘時(shí)與室顫前相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(2.56 mg/ml vs.2.32 mg/ml, P=0.031);抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)濃度持續(xù)下降,于室顫8分鐘后出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(105.08 ug/ml vs.89.69 ug/ml, P=0.027)。血漿D-二聚體(D-Dimer)持續(xù)上升,于12分鐘時(shí)出現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0.291 ug/ml vs.1.129 ug/ml, P=0.035)。3動(dòng)物恢復(fù)自主循環(huán)后血流動(dòng)力學(xué)和心功能情況3.1血流動(dòng)力學(xué)8min室顫組和12min室顫組分別有7只和5只動(dòng)物恢復(fù)自主循環(huán)。與致顫前比較,恢復(fù)ROSC后的動(dòng)物血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)降低(P0.05)3.2超聲測(cè)量心臟結(jié)構(gòu)和功能指標(biāo)的變化左心結(jié)構(gòu)的改變：致顫前各組之間LVIDs及LVIDd均無(wú)顯著性差異(P0.05)；與致顫前相比,室顫組動(dòng)物左房、左室內(nèi)徑擴(kuò)大(P均0.05)。12min室顫組左房擴(kuò)大程度明顯高于8mmin室顫組(P0.05)左室收縮功能的評(píng)價(jià)：致顫前各組動(dòng)物間LVEF的變化均無(wú)顯著差異(P0.05)。復(fù)蘇后測(cè)量,與致顫前相比,各室顫組動(dòng)物L(fēng)VEF明顯下降(P均0.05)。12min室顫組LVEF下降的程度明顯高于8min室顫組(P0.05)4心室顫動(dòng)復(fù)蘇后TIMP-1和MMP-9的表達(dá)變化隨著室顫時(shí)間的延長(zhǎng)和相應(yīng)的心肺復(fù)蘇后TIMP-1逐漸減少(P0.05),MMP-9的表達(dá)無(wú)顯著性差異(P0.05),但其表達(dá)量逐漸增加,室顫組TIMP-1與MMP-9的比值(TIMP-1/MMP-9)明顯低于假手術(shù)組(P0.05)5.MMP-9和TIMP-1與心功能的關(guān)系TIMP-1的水平與LAD負(fù)相關(guān)(r=一0.83；P0.05),與LVDd呈負(fù)相關(guān)(r=一0.96,P0.05),與LVEF呈正相關(guān)(r=0.85,P0.05),即隨著TIMB-1的逐漸減少LAD, LVDd逐漸增大,LVEF逐漸降低。研究結(jié)論：1.長(zhǎng)時(shí)程心室顫動(dòng)的病理過(guò)程呈現(xiàn)階段性變化,漸次出現(xiàn)血流動(dòng)力學(xué)障礙,酸堿平衡紊亂,凝血和繼發(fā)性纖溶亢進(jìn)；2.室顫復(fù)蘇后存在TIMP-1和MMP-9的表達(dá)失衡,此失衡可能與心功能的降低相關(guān)。研究背景：心室顫動(dòng)(ventrichular fibrillation,VF室顫)是導(dǎo)致心臟性猝死最常見(jiàn)的心律失常之一。室顫的發(fā)生機(jī)理多數(shù)是在基礎(chǔ)心臟疾患的基礎(chǔ)上,心肌組織產(chǎn)生多個(gè)折返中心,由這些折返中心形成多個(gè)不協(xié)調(diào)的沖動(dòng),向心室各個(gè)方向不均勻傳導(dǎo)所致。多折返是室顫產(chǎn)生與維持的重要機(jī)制。目前治療室顫的有效方法是非同步電除顫,而長(zhǎng)時(shí)程室顫致血流動(dòng)力學(xué)障礙,心肌缺血進(jìn)行性加重,內(nèi)環(huán)境紊亂,進(jìn)一步造成細(xì)胞間電傳導(dǎo)異常,使得室顫轉(zhuǎn)復(fù)率明顯下降,并且轉(zhuǎn)復(fù)后不易維持正常心律,除顫閾值及除顫次數(shù)均增加,高能量除顫帶來(lái)的結(jié)果并不理想。以細(xì)胞膜離子通道為作用靶點(diǎn)的傳統(tǒng)抗心律失常藥物對(duì)改善除顫效果不佳。相鄰細(xì)胞間的正常通訊通過(guò)細(xì)胞間的縫隙連接(gap junction, GJ)實(shí)現(xiàn),縫隙連接由不同類型的縫隙連接蛋白(Connexin, Cx)構(gòu)成。病理狀態(tài)下如心肌缺血、纖維化時(shí),心肌細(xì)胞間縫隙連接的大小、數(shù)量、密度及空間分布發(fā)生變化,從而使心肌細(xì)胞間電位失耦聯(lián)、傳導(dǎo)速度減慢、各向異性比率改變,細(xì)胞間的沖動(dòng)傳導(dǎo)受到阻礙,心臟電復(fù)極不一致,易于形成折返,為發(fā)生各種類型的心律失常提供了基質(zhì)。Cx43作為構(gòu)成心室肌縫隙連接的主要蛋白,在多種心血管疾病的發(fā)生、發(fā)展中的作用逐漸被重視。在心肌缺血、缺氧、酸中毒狀態(tài)下,Cx43去磷酸化增加,降解增加,并向細(xì)胞內(nèi)遷移,在細(xì)胞膜表面表達(dá)減少,引起縫隙連接功能的紊亂,電傳導(dǎo)各向異性增加,導(dǎo)致心律失常的發(fā)生。即使沒(méi)有明顯的心臟結(jié)構(gòu)損傷,Cx43表達(dá)減少或缺如,也會(huì)導(dǎo)致致命性心律失常。縫隙連接蛋白調(diào)節(jié)劑ZP123是一種新型的抗心律失常肽,可通過(guò)調(diào)節(jié)縫隙連接蛋白的表達(dá)起到抗心律失常的作用。有研究發(fā)現(xiàn),心室肌細(xì)胞經(jīng)ZP123預(yù)處理后,可防止酸中毒誘導(dǎo)的細(xì)胞間縫隙連接蛋白Cx43的失耦聯(lián),減少去磷酸化比例及細(xì)胞內(nèi)遷移,恢復(fù)正常電傳導(dǎo)。還有研究表明ZP123可以使縫隙連接的傳導(dǎo)速度增加69%。可以促進(jìn)缺血心室肌細(xì)胞間的電耦聯(lián),預(yù)防折返性室性心動(dòng)過(guò)速的發(fā)生。與傳統(tǒng)抗心律失常藥物不同,ZP123不影響細(xì)胞膜離子通道,無(wú)致心律失常的副作用,因此近年來(lái)成為研究的熱點(diǎn)。我們先前對(duì)于4分鐘兔心室顫動(dòng)模型研究證實(shí),ZP123可以降低心室顫動(dòng)除顫能量,然而在長(zhǎng)時(shí)程心室顫動(dòng)過(guò)程中,ZP123對(duì)不同階段心室顫動(dòng)影響有待于研究。本研究檢測(cè)了Cx43在心室顫動(dòng)不同階段表達(dá)與分布的變化,評(píng)估經(jīng)縫隙連接蛋白調(diào)節(jié)劑ZP123預(yù)處理后,其對(duì)不同時(shí)程心室顫動(dòng)除顫能量、除顫成功率和自主循環(huán)恢復(fù)率的影響。研究目的：1.根據(jù)前述心室顫動(dòng)的臨床和生化階段,評(píng)估Cx43在心室顫動(dòng)不同階段表達(dá)與分布的變化；2.縫隙連接蛋白調(diào)節(jié)劑ZP123在室顫不同階段對(duì)縫隙連接蛋白Cx43的影響；3.觀察ZP123對(duì)不同時(shí)程室顫除顫能量及除顫成功率的影響；4.評(píng)價(jià)ZP123對(duì)不同時(shí)程室顫復(fù)蘇率的影響。研究方法：1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)選取健康成年家犬60只,雌雄不限,體重13.5-18.5kg,隨機(jī)分為五組。分組情況：藥物組8min(n=10只)：麻醉,氣管插管,ZP123 1μg/kg靜推+10μg·kg-1·h-1泵入30分鐘,致顫8分鐘,予心肺復(fù)蘇,成功后開(kāi)胸取心��；藥物組12min(n=15只)：麻醉,氣管插管,ZP123 1μg/kg靜推+10μg·kg-1·h-1泵入30分鐘,致顫12分鐘,予心肺復(fù)蘇成功后,開(kāi)胸取心肌；常規(guī)復(fù)蘇組8min(n=10只)；常規(guī)復(fù)蘇組12min(n=15只)(除藥物以生理鹽水替代外,余同藥物組處置);假手術(shù)組(n=10只)：不致顫,余同常規(guī)復(fù)蘇組。2.室顫模型的構(gòu)建3%戊巴比妥鈉(30mg/kg)耳緣靜脈靜注麻醉,氣管插管,連接呼吸機(jī),在SIMV模式下調(diào)整呼吸機(jī)參數(shù)為：潮氣量10—15m1/kg體重,呼吸頻率16—20次/分,吸入氧濃度(Fi02 50%—80%),吸氣與呼氣時(shí)間比為1：1.5-2.0,呼氣末正壓為5cmH20 (0.49Kpa)。多導(dǎo)電生理記錄儀監(jiān)測(cè)心電圖。體外除顫器監(jiān)測(cè)血氧飽和度(Sa02),分別測(cè)量基礎(chǔ)狀態(tài)及達(dá)到自主循環(huán)恢復(fù)后的心率、PR間期、OT間期,校正的QT間期(QTc)以Bazett's公式計(jì)算得出。分別穿刺股動(dòng)、靜脈,分別將壓力導(dǎo)管送入升主動(dòng)脈根部和右心房,在X線下確定導(dǎo)管位置,并連于多導(dǎo)電生理記錄儀,監(jiān)測(cè)與記錄主動(dòng)脈壓力和右房壓力。將體外電刺激器火線端與零線端的導(dǎo)電針頭分別插入心前區(qū)左上方與右下方的皮下,以80V持續(xù)刺激5S可以成功的誘發(fā)持續(xù)室顫。室顫成功的標(biāo)準(zhǔn)：(1)心電圖示室顫波形；(2)主動(dòng)脈壓力失去波動(dòng),降至30mmHg以下。根據(jù)論文一結(jié)果將研究階段定為心室顫動(dòng)后8min和12min。室顫維持8min或12min后給予心肺復(fù)蘇和電除顫。3.心肺復(fù)蘇室顫模型成功建立后,即撤除呼吸機(jī),待室顫持續(xù)8min和12min后,立即開(kāi)始胸外心臟按壓,同時(shí)接氣囊,按壓通氣比為30：2,5個(gè)復(fù)蘇周期即2分鐘后,進(jìn)行心律評(píng)估,仍為室顫的給予雙向非同步電除顫,根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果將首次除顫能量為70J,若未能終止,則將除顫能量依次遞增為100J、150J,以后的能量均為150J。每次電除顫前均給予2mmin的心肺復(fù)蘇。待5個(gè)復(fù)蘇周期后進(jìn)行血流動(dòng)力學(xué)和心律評(píng)估,如此循環(huán)。復(fù)蘇過(guò)程中視情況給予腎上腺素、阿托品等藥物。復(fù)蘇終點(diǎn)為動(dòng)物恢復(fù)自主循環(huán)(restoration of spontaneous circulation, ROSC),定義為主動(dòng)脈收縮壓80mmHg至少持續(xù)1min,或搶救達(dá)30min未達(dá)到自主循環(huán)恢復(fù)者放棄。達(dá)到自主循環(huán)恢復(fù)的動(dòng)物立即給予高級(jí)生命支持,并觀察1小時(shí)。4.血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)及心電圖參數(shù)記錄室顫前及心肺復(fù)蘇后的各項(xiàng)血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)：主動(dòng)脈收縮壓(aortic systolic pressure, AOSP)、主動(dòng)脈舒張壓(aortic diastolic pressure, AODP)、主動(dòng)脈平均壓(aortic mean pressure, AOMP);右心房收縮壓(right atrial systolic pressure, RASP)、右心房舒張壓(right atrial diastolic pressure, RADP)、右心房平均壓(right atrial mean pressure, RAMP),冠狀動(dòng)脈灌注壓(主動(dòng)脈舒張壓減右心房舒張壓,coronary perfusion pressure, CPP)。記錄室顫前及心肺復(fù)蘇后的心電圖參數(shù)：心率,PR間期,校正的QT間期5.平均除顫能量、除顫成功率和自主循環(huán)恢復(fù)率記錄室顫心肺復(fù)蘇過(guò)程中各組動(dòng)物的平均除顫能量(各組動(dòng)物復(fù)蘇成功后總除顫能量／復(fù)蘇成功動(dòng)物只數(shù))、各除顫能量級(jí)除顫成功率(70J、100J、150J)和自主循環(huán)恢復(fù)率,并加以分析比較。6.免疫熒光及激光共聚焦顯微鏡存活時(shí)間達(dá)到一小時(shí)的動(dòng)物用10%氯化鉀處死,迅速開(kāi)胸,沿左心室長(zhǎng)軸留取0.5cm3大小的左心室游離壁心肌組織數(shù)塊,一部分用4%多聚甲醛固定用于免疫熒光分析,另一部分放入液氮中速凍然后轉(zhuǎn)存至-80℃冰箱凍存,用于Western-Blot分析。4%多聚甲醛固定心室肌組織24小時(shí)后取出,石蠟包埋后于切片機(jī)上切成4gm厚的組織切片,石蠟切片脫蠟至水,以枸櫞酸鹽緩沖液微波修復(fù)抗原15min,5%正常山羊血清封閉20分鐘后,滴入1：100稀釋的Cx43多克隆抗體4℃過(guò)夜,再滴加1：500稀釋的IgG-FITC二抗,37℃孵育30分鐘后,緩沖甘油封片。在德國(guó)Leica公司TCS SP2型激光掃描共聚焦顯微鏡下觀察,用488nm波長(zhǎng)藍(lán)光激發(fā)FITC,發(fā)生光為519nm綠光。每張切片至少取四個(gè)視野,逐層掃描以獲取清晰圖像。將獲取的圖像去除背景,留下標(biāo)準(zhǔn)的熒光染色部分以供分析。以Image-Pro Plus 6.0軟件分析熒光強(qiáng)度并計(jì)算當(dāng)前視野下Cx43面積百分比及積分光密度。7. Western-Blot分析提取蛋白,上樣,行SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳。待電泳結(jié)束后,把目的蛋白轉(zhuǎn)至PVDF膜上。后將PVDF膜放入5%脫脂奶粉(TBST)稀釋室溫封閉2小時(shí),滴加1：500稀釋的Cx43多克隆抗體4℃過(guò)夜后,再滴加二抗(1：10000)室溫孵育2小時(shí),以增強(qiáng)化學(xué)發(fā)光法顯色,X光片曝光顯影,用凝膠成像分析系統(tǒng)QuantityOne攝像分析,測(cè)定目的蛋白與內(nèi)參蛋白(β-actin)的灰度值,將二者的比值作為Cx43的表達(dá)水平進(jìn)行比較。8.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析實(shí)驗(yàn)獲得所有數(shù)據(jù)以均數(shù)x±s表示,用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,統(tǒng)計(jì)方法采用單因素方差分析(one-way ANOVA), P0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。研究結(jié)果：1.犬的一般狀況各組動(dòng)物基礎(chǔ)狀態(tài)無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；8min藥物組有8只動(dòng)物達(dá)自主循環(huán)恢復(fù)并存活1小時(shí),8min常規(guī)復(fù)蘇組有6只動(dòng)物達(dá)自主循環(huán)恢復(fù)并存活1小時(shí)。12min藥物組有5只動(dòng)物達(dá)自主循環(huán)恢復(fù)并存活1小時(shí),12min常規(guī)復(fù)蘇組有4只動(dòng)物達(dá)自主循環(huán)恢復(fù)并存活1小時(shí)。2.各組動(dòng)物達(dá)到ROSC后血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)以及心電圖參數(shù)比較室顫模型建立成功后,于8min和12min后進(jìn)行心肺復(fù)蘇和非同步電除顫,記錄分析各組動(dòng)物達(dá)到ROSC后血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)以及心電圖參數(shù),結(jié)果顯示：各組動(dòng)物達(dá)到ROSC后的血流動(dòng)力學(xué)參數(shù)總體之間無(wú)差異(P0.05)。心電圖參數(shù)總體之間無(wú)差異(P0.05)3.各組動(dòng)物平均除顫能量、除顫成功率和自主循環(huán)恢復(fù)率8min組：藥物組平均除顫能量明顯低于常規(guī)復(fù)蘇組(427.2±126.4J vs.560.7±128.9J,P=0.045),各能量級(jí)除顫成功率均明顯高于常規(guī)復(fù)蘇組(70J:60% vs.40%,P0.05；100J:75% vs55%,P0.05；150J:85% vs.70%,P0.05).自主循環(huán)恢復(fù)率與8min常規(guī)復(fù)蘇組有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(80% vs.66%,P0.05)。12min組：藥物組動(dòng)物的除顫能量明顯低于12min常規(guī)復(fù)蘇組,(538.5±130 Jvs.695.5±149 J,P0.05),各能量級(jí)除顫成功率明顯高于常規(guī)復(fù)蘇組(70J:40% vs. 20%,P0.05； 100J:60% vs.30%,P0.05；150J:75% vs.45%,P0.05).自主循環(huán)恢復(fù)率與常規(guī)復(fù)蘇組無(wú)顯著差異(33% vs.25%,P0.05)。4.免疫熒光結(jié)果假手術(shù)組Cx43熒光信號(hào)強(qiáng),形態(tài)清晰,分布均勻,排列有序；常規(guī)復(fù)蘇組Cx43熒光信號(hào)弱,形態(tài)模糊,排列紊亂,呈現(xiàn)不均一分布;藥物組Cx43的熒光信號(hào)較強(qiáng),形態(tài)相對(duì)清晰,不均一分布的程度較常規(guī)復(fù)蘇組減輕。圖象定量分析顯示8min常規(guī)復(fù)蘇組Cx43熒光信號(hào)的面積百分比以及積分光密度值明顯低于假手術(shù)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.31±0.07 vs.1.86±0.06； 14800±1772 vs.19600±2160,P0.05):8min常規(guī)復(fù)蘇組的Cx43熒光信號(hào)的面積百分比以及積分光密度值明顯低于8min藥物組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.31±0.07 vs.1.72±0.05；14800±1772 vs.17200±1903,P0.05)。12min常規(guī)復(fù)蘇組Cx43熒光信號(hào)的面積百分比以及積分光密度值明顯低于假手術(shù)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.02±0.06 vs.1.86±0.06；7100±1352 vs.19600±2160,P0.05)；12min常規(guī)復(fù)蘇組的Cx43熒光信號(hào)的面積百分比以及積分光密度值明顯低于12min藥物組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.02±0.06vs.1.41±0.06；7100±1352 vs.11200±1650,P0.05)。12min藥物組Cx43熒光信號(hào)的面積百分比以及積分光密度值明顯低于假手術(shù)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.41±0.06 vs.1.86±0.06；11200±1650Vs.19600±2160,P0.05)5.Western-Blot結(jié)果：圖像定量分析顯示,8min常規(guī)復(fù)蘇組Cx43表達(dá)水平(0.75±0.07)較假手術(shù)組(1.07±0.04)及8min藥物組Cx43表達(dá)水平(0.95±0.06)明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；12min常規(guī)復(fù)蘇組Cx43表達(dá)水平(0.58±0.05)較假手術(shù)組(1.07±0.04)及12min藥物組Cx43表達(dá)水平(0.75±0.06)明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。12min藥物組Cx43表達(dá)水平(0.75±0.06)低于假手術(shù)組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。研究結(jié)論：1.長(zhǎng)時(shí)程心室顫動(dòng)犬心室肌縫隙連接蛋白Cx43數(shù)量隨心室顫動(dòng)的維持進(jìn)行性減少；2.ZP123可防止長(zhǎng)時(shí)程心室顫動(dòng)犬心室肌Cx43數(shù)量的減少,不受室顫時(shí)程的影響；3.ZP123可以降低不同時(shí)程室顫的除顫能量,提高除顫成功率；4.ZP123可以改善8min犬心室顫動(dòng)復(fù)蘇率,可能與降低室顫除顫能量提高除顫成功率有關(guān)。
【學(xué)位單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2015
【中圖分類】：R541.7
【部分圖文】：

在室顫發(fā)生后５分鐘內(nèi)，主動(dòng)脈席（ＡＰ）持續(xù)ｒ降，４寶顫起始時(shí)相比，ｈ＇降具有統(tǒng)計(jì)學(xué)逡逑意文，伴＜０．０５；右屯、房尿力（ＲＡＰ）在也寶顫動(dòng)的第１分鐘內(nèi)升高，在Ｗ后的４分鐘內(nèi)逐逡逑漸下降，干５分鐘時(shí)逐漸穩(wěn)定；Ｍ狀動(dòng)豚灌注拓（ＣＰ巧迅速ｒ降。于５分鐘ｒ降至基線。與逡逑基礎(chǔ)值相比，下降具巧統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。巧＜０．０５逡逑

表示ZP123是AAP10的反轉(zhuǎn)類似

在室顫發(fā)生后５分鐘內(nèi)，主動(dòng)脈席（ＡＰ）持續(xù)ｒ降，４寶顫起始時(shí)相比，ｈ＇降具有統(tǒng)計(jì)學(xué)逡逑意文，伴＜０．０５；右屯、房尿力（ＲＡＰ）在也寶顫動(dòng)的第１分鐘內(nèi)升高，在Ｗ后的４分鐘內(nèi)逐逡逑漸下降，干５分鐘時(shí)逐漸穩(wěn)定；Ｍ狀動(dòng)豚灌注拓（ＣＰ巧迅速ｒ降。于５分鐘ｒ降至基線。與逡逑基礎(chǔ)值相比，下降具巧統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。巧＜０．０５逡逑

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 宋湖平;陳紅偉;洪濤;;蛋白質(zhì)組學(xué)在縫隙連接中的研究進(jìn)展[J];重慶醫(yī)學(xué);2009年22期

2 李巍巍;任麗娜;張麗麗;;縫隙連接蛋白43在子癇前期患者胎盤組織中的表達(dá)及意義[J];大連醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年05期

3 王倩;楊奕清;;縫隙連接蛋白40與心房顫動(dòng)的關(guān)系[J];國(guó)際心血管病雜志;2013年04期

4 于影;馬奎影;侯春霞;柳文清;趙明;;黃芪總黃酮對(duì)柯薩奇B3病毒所致病毒性心肌炎小鼠急性期心肌組織連接蛋白43mRNA表達(dá)的影響[J];成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年05期

5 馬赫;李若凡;張釗;姚天明;;硫酸鋅預(yù)處理對(duì)大鼠缺血再灌注心肌Cx43及再灌注室性心律失常影響[J];創(chuàng)傷與急危重病醫(yī)學(xué);2014年02期

6 朱傳龍;李毓雯;李文庭;李宜;高人燾;;慢性乙型肝炎患者肝組織基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制物-1表達(dá)及其意義[J];實(shí)用肝臟病雜志;2014年03期

7 靳曙光;張q

本文編號(hào)：2830579