[研究背景]全世界每年約有1000多萬(wàn)人遭受各種類(lèi)型和程度的創(chuàng)傷性腦損傷(traumatic brain injury,TBI)。創(chuàng)傷性腦損傷有很高的發(fā)病率、致殘率和死亡率。幸存的TBI患者也會(huì)在傷后遭受不同程度的并發(fā)癥,包括各種神經(jīng)功能缺損和運(yùn)動(dòng)功能的障礙等。最近數(shù)十年來(lái),隨著神經(jīng)外科和重癥醫(yī)學(xué)的發(fā)展,TBI患者的救治生存率得到了較大的改善。但至今為止,仍然沒(méi)有一種藥物可以降低病死率和改善TBI各種長(zhǎng)遠(yuǎn)期的并發(fā)癥。已經(jīng)有充分的證據(jù)表明,TBI所致腦損傷包括原發(fā)性損傷和繼發(fā)性損傷,包括腦水腫、神經(jīng)炎癥反應(yīng)、神經(jīng)細(xì)胞凋亡和血腦屏障的破壞等等。繼發(fā)性損傷可以從損傷發(fā)生即刻的數(shù)小時(shí)、數(shù)天,甚至數(shù)年,最終導(dǎo)致慢性的神經(jīng)元死亡或神經(jīng)退行性疾病,甚至顱腦腫瘤。目前關(guān)于TBI的研究主要集中在如何減少繼發(fā)性損傷,而探索具有神經(jīng)保護(hù)作用的藥物干預(yù)策略和治療靶點(diǎn),則是改善顱腦損傷患者預(yù)后的關(guān)鍵。右美托咪定(dexmedetomidine,DEX),作為一種新型的高效和高度選擇性的α2腎上腺素能受體激動(dòng)劑,目前廣泛應(yīng)用于臨床麻醉、術(shù)后鎮(zhèn)靜管理和重癥醫(yī)學(xué)領(lǐng)域。而此之外,目前有證據(jù)表明DEX還具有潛在的神經(jīng)保護(hù)的作用。由于TBI和其他類(lèi)型的神經(jīng)系統(tǒng)病變有不少共同的病理生理機(jī)制,因此,我們推測(cè)DEX在TBI中也可能具有同樣的治療價(jià)值。本研究采用TBI大鼠模型從神經(jīng)自噬和凋亡方面探討DEX潛在的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制。第一部分右美托咪定預(yù)處理對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷大鼠模型的神經(jīng)保護(hù)作用[目的]明確DEX預(yù)處理對(duì)TBI大鼠模型的神經(jīng)保護(hù)作用。[方法](1)確定DEX的最佳劑量:將大鼠分為5組,分別為假手術(shù)組(Sham組)、TBI組(生理鹽水腹腔注射預(yù)處理組)、TBI+DEX50組(DEX 50μg/kg腹腔注射預(yù)處理)、TBI+DEX100 組(DEX 100μg/kg 腹腔注射預(yù)處理)和 TBI+DEX200 組(DEX 200μg/kg腹腔注射預(yù)處理)。檢測(cè)TBI后24小時(shí)的腦含水量,神經(jīng)功能缺損評(píng)分和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平為依據(jù),確定DEX的最佳劑量。(2)相關(guān)指標(biāo)評(píng)估的方法:采用改良的神經(jīng)功能缺損評(píng)分進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)估;采用干濕重量法測(cè)定腦含水量;采用Western Blot檢測(cè)TBI后毀損灶周?chē)べ|(zhì)的Caspase-3、Bax和Bcl-2的蛋白表達(dá)水平。[結(jié)果](1)TBI后傷側(cè)大腦半球腦含水量、神經(jīng)功能缺損較假手術(shù)組明顯增高(P0.05)。與TBI組相比較,采用100μg/kg DEX腹腔注射預(yù)處理能顯著降低傷后24小時(shí)的神經(jīng)功能缺損評(píng)分和腦含水量(P0.05),其他兩個(gè)DEX預(yù)處理組與TBI組相比較都無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。(2)毀損灶周?chē)べ|(zhì)凋亡蛋白水平表達(dá)的Western Blot的檢測(cè)結(jié)果表明,與TBI組相比較,采用100μg/kgDEX預(yù)處理組可以顯著降低TBI后大鼠毀損灶周?chē)べ|(zhì)的Caspase-3和Bax的表達(dá)水平,提高Bcl-2的表達(dá)水平,兩組間存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。[結(jié)論]右美托咪定100μg/kg預(yù)處理可以降低創(chuàng)傷性腦損傷的神經(jīng)功能缺損評(píng)分,減少創(chuàng)傷性腦損傷引起的腦水腫和TBI后神經(jīng)元的凋亡。第二部分右美托咪定對(duì)創(chuàng)傷性腦損傷大鼠模型神經(jīng)自噬和凋亡的影響[目的]探討自噬和凋亡通路在DEX對(duì)TBI發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用的潛在機(jī)制。[方法](1)根據(jù)第一部分的實(shí)驗(yàn)結(jié)果,將大鼠分為Sham組(假手術(shù)組)、TBI組(生理鹽水腹腔注射預(yù)處理組)和TBI+DEX(DEX 10Oμg/kg腹腔注射預(yù)處理組)。結(jié)合文獻(xiàn)資料,我們選擇TBI后24小時(shí)、72小時(shí)和7天進(jìn)行神經(jīng)功能缺損評(píng)分;評(píng)價(jià)TBI后24小時(shí)的腦含水量;并且在TBI后14天腦毀損體積的測(cè)定。(2)在TBI后24小時(shí)評(píng)估毀損皮質(zhì)周?chē)窠?jīng)細(xì)胞自噬流和凋亡水平。(3)相關(guān)指標(biāo)評(píng)估的方法:采用改良的神經(jīng)功能缺損評(píng)分進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)估;采用干濕重量法測(cè)定腦含水量;Western Blot檢測(cè)LC3-Ⅱ和p62來(lái)評(píng)估自噬流水平,檢測(cè)Caspase-3,Bax和Bcl-2來(lái)評(píng)估凋亡程度。采用連續(xù)切片蘇木精染色,用Image J軟件計(jì)算腦損傷體積。[結(jié)果](1)TBI后神經(jīng)功能缺損評(píng)分表明,與生理鹽水預(yù)處理組相比,DEX預(yù)處理能降低大鼠TBI后24小時(shí)和72小時(shí)的神經(jīng)功能缺損評(píng)分,兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。而在腦損傷后7天,兩組大鼠的神經(jīng)功能缺失評(píng)分無(wú)顯著差異(P0.05)。(2)TBI后凋亡相關(guān)蛋白Caspas-3和B和x升高,Bc,-2下降;與生理鹽水預(yù)處理組相比較,DEX可降低TBI后24小時(shí)腦毀損周?chē)べ|(zhì)的Caspase-3和Bax表達(dá),并增加Bcl-2表達(dá)(P0.05)。(3)TBI后自噬相關(guān)蛋白檢測(cè):與假手術(shù)組相比較,生理鹽水預(yù)處理組的LC3Ⅱ和p62水平增加,提示存在自噬流受阻;與生理鹽水預(yù)處理組比較,DEX預(yù)處理組可以降低LC3II和p62表達(dá)水平(P0.05)。(4)TBI后14天的腦毀損體積檢測(cè)結(jié)果表明,與生理鹽水預(yù)處理組相比較,DEX預(yù)處理可減少了 TBI后14天腦毀損的體積(P0.05)。[結(jié)論](1)右美托咪定預(yù)處理可以通過(guò)減少TBI后腦含水量、神經(jīng)功能損傷評(píng)分、腦毀損體積發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。(2)本研究中,我們認(rèn)為右美托咪定可能是通過(guò)改善和恢復(fù)受阻的自噬流水平以及抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡以發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。
【學(xué)位單位】：昆明醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2017
【中圖分類(lèi)】：R651.15
【部分圖文】：

評(píng)分（Ｐ＜０．０５）。逡逑５０）ｉｇ＾；ｇ和２００）＿ｉｇ／ｋｇ右美托咪定預(yù)處理組的大鼠神經(jīng)功能缺損評(píng)分與對(duì)逡逑ＴＢＩ組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（Ｐ＞０．０５），見(jiàn)圖１。逡逑｜邋１0１邋＃邋＃邋＃邋＃逡逑＾邋８－邐■■■邋＊邐？？逡逑▲贏▲▲邐？邋？邋？逡逑Ｓ邋６－邐■邐▲▲▲邋%

本文編號(hào)：2823295