本文關(guān)鍵詞：自噬在局部麻醉藥神經(jīng)毒性中的作用及機制研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景和目的:流行病學(xué)資料表明,目前臨床使用的局部麻醉藥均具有潛在的神經(jīng)毒性。自噬(autophagy)是一種進化高度保守的分解代謝過程,負責(zé)降解發(fā)育過程中不再需要的、或應(yīng)激狀態(tài)下變性或有害的蛋白質(zhì)和細胞器。證據(jù)表明,因細胞種類、應(yīng)激因素的不同,自噬可以抑制細胞死亡、也可以引起細胞死亡。然而,局部麻醉藥對神經(jīng)細胞自噬過程的影響,以及自噬在局部麻醉藥神經(jīng)毒性中的作用尚不清楚。本課題將探討自噬在局部麻醉藥神經(jīng)毒性中的作用及其機制,以期為控制局部麻醉藥潛在神經(jīng)毒性提供新的思路和基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。方法:我們用酯類局麻藥(丁卡因、普魯卡因)和酰胺類局麻藥(布比卡因、利多卡因和羅哌卡因)刺激體外培養(yǎng)的人神經(jīng)細胞母細胞瘤細胞SH-SY5Y,構(gòu)建局部麻醉藥神經(jīng)毒性的體外培養(yǎng)模型,然后進行下列分析。[1]細胞存活率(MTT法檢測)。[2]細胞形態(tài)學(xué)(光學(xué)顯微鏡)。[3]自噬標志物L(fēng)C3-II產(chǎn)生、p62降解及信號通路蛋白表達量(Western Blot法檢測)。[4]自噬抑制性信號m TOR/p70S6K活性(Western Blot法檢測)。[5]抑制自噬(通過si RNA敲降Beclin-1)。[6]抑制自噬對局部麻醉藥所致細胞死亡的影響。[7]抑制自噬對局部麻醉藥所致細胞形態(tài)學(xué)損傷的影響。結(jié)果:[1]局部麻醉藥呈濃度依賴性降低細胞存活率。[2]局部麻醉藥引起嚴重的細胞形態(tài)學(xué)異常。[3]局部麻藥升高LC3-II水平,降低p62水平,提示自噬流量(autophagic flux)升高。[4]m TOR和p70S6K信號活性在局部麻醉藥刺激后下降,提示局部麻醉藥通過抑制蛋白表達水平降低m TOR/p70S6K信號而激活自噬反應(yīng)。[5]Beclin-1敲降(knockdown)后,局部麻醉藥所刺激的細胞中LC3-II水平降低,而p62增加,提示Beclin-1敲降有效地逆轉(zhuǎn)了局部麻醉所增加的自噬。[6]通過Beclin-1敲降抑制自噬后,進一步降低局部麻醉藥引起的細胞死亡。[7]通過Beclin-1敲降抑制自噬后,進一步加重局部麻醉藥引起的細胞形態(tài)學(xué)異常。結(jié)論:酯類局麻藥(丁卡因、普魯卡因)和酰胺類局麻藥(布比卡因、利多卡因和羅哌卡因)均呈濃度依賴性損傷神經(jīng)細胞,同時增加自噬流量、抑制m TOR/p70S6K信號通路。由于m TOR/p70S6K是自噬的抑制性信號,提示局部麻醉藥通過抑制m TOR/p70S6K信號而激活自噬。而通過Beclin-1敲降阻斷自噬反應(yīng)后,增加了局部麻醉藥對SH-SY5Y神經(jīng)細胞的損傷作用。這些數(shù)據(jù)提示,自噬是不同局部麻醉藥所致神經(jīng)毒性過程中所共有的一種保護性反應(yīng),增加自噬作用有望控制局部麻醉藥神經(jīng)損傷的風(fēng)險。
【關(guān)鍵詞】：局部麻醉藥 神經(jīng)毒性 自噬
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R614
【目錄】：

• 英文縮寫和略語5-6
• 中文摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 第一部分 局部麻醉藥具有神經(jīng)毒性10-19
• 1.前言10
• 2.材料與方法10-12
• 3.結(jié)果12-14
• 4.討論14-15
• 參考文獻15-19
• 第二部分 局部麻醉藥增加神經(jīng)細胞自噬流量19-32
• 1.前言19-20
• 2.材料與方法20-25
• 3.結(jié)果25-28
• 4.討論28-29
• 參考文獻29-32
• 第三部分 抑制自噬加劇局部麻醉藥的神經(jīng)毒性32-46
• 1.前言32-33
• 2.材料與方法33-35
• 3.結(jié)果35-40
• 4.討論40-41
• 總結(jié)41-42
• 參考文獻42-46
• 綜述：自噬與細胞死亡的關(guān)系研究進展46-56
• 參考文獻52-56
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表的文章56-57
• 致謝57-58

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1 宋瑞鳳;;局部麻醉藥中毒一例[J];山西醫(yī)藥雜志(下半月刊);2009年07期

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本文編號：278805