本文關(guān)鍵詞：激光共聚焦內(nèi)鏡結(jié)合熒光標(biāo)記的脂肪酸特異檢測(cè)大腸癌，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：研究背景代謝是生物體內(nèi)發(fā)生的用于維持細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和分化等生命活動(dòng)的反應(yīng)進(jìn)程。多數(shù)腫瘤的代謝與正常細(xì)胞存在很大差異,正常細(xì)胞依賴葡萄糖有氧氧化、脂肪酸β氧化供能,而在腫瘤中,即使氧氣供給充足,腫瘤細(xì)胞很少進(jìn)行葡萄糖有氧氧化過程,反之,其對(duì)外界葡萄糖的吸收大大增加且產(chǎn)生大量乳酸,這種以糖酵解為主的代謝方式也稱為"Warburg效應(yīng)”。在腫瘤細(xì)胞中,糖酵解代謝的產(chǎn)物丙酮酸并非進(jìn)入三羧酸循環(huán)氧化,而主要參與合成代謝包括脂肪酸、核酸、蛋白質(zhì)等合成。脂肪酸是機(jī)體許多器官的重要能量來源,可由食物供給和內(nèi)源性的合成產(chǎn)生,脂肪酸合成(FASN)增加被稱為腫瘤代謝的另一重要標(biāo)志,其與糖酵解過程密切相關(guān)。腫瘤細(xì)胞的脂肪酸代謝途徑異常,正常情況下,細(xì)胞吸收外源性的脂肪酸并將其轉(zhuǎn)化為甘油三酯,以提供機(jī)體的能量?jī)?chǔ)備。然而,在腫瘤細(xì)胞中,即便外源性脂肪酸供給充足,腫瘤細(xì)胞極少利用其進(jìn)行甘油三酯的儲(chǔ)備,而主要依靠糖酵解產(chǎn)物丙酮酸進(jìn)行內(nèi)源性的脂肪酸合成,腫瘤中的酯化脂肪酸均由內(nèi)源性脂肪酸合成途徑產(chǎn)生,超過93%的甘油三酯由此途徑合成。這種正常和腫瘤細(xì)胞中脂肪酸的代謝差異揭示了兩者在外源性脂肪酸吸收及內(nèi)部脂肪酸利用的差異。結(jié)腸癌是發(fā)病率和死亡率均較高的惡性腫瘤,在全球女性癌癥相關(guān)死亡率中位居第三,男性中位居第四,2008年全球因結(jié)腸癌死亡人數(shù)為608,700,過去認(rèn)為主要由基因突變所致,近年來,隨著環(huán)境改變和人們不均衡的膳食模式等原因,其發(fā)病率不斷增長(zhǎng),已成為我國(guó)發(fā)病率升高最快的惡性腫瘤之一。腫瘤治療的關(guān)鍵在于早期發(fā)現(xiàn),如果能在腫瘤發(fā)展早期作出相應(yīng)的判斷和檢測(cè),50%以上的惡性腫瘤可以治愈,5年生存率可達(dá)80-90%。結(jié)腸癌早期因其組織的結(jié)構(gòu)和功能未出現(xiàn)明顯變化,診斷僅依賴臨床醫(yī)師的經(jīng)驗(yàn)和腫瘤宏觀形態(tài)學(xué)、血清腫瘤標(biāo)志物、影像學(xué)、病理學(xué)等手段,敏感度和特異度較低。內(nèi)鏡被認(rèn)為是結(jié)腸癌早期診斷最有效的方式。普通內(nèi)鏡對(duì)早期胃腸癌的診斷率低,新興的內(nèi)鏡如染色內(nèi)鏡、放大內(nèi)鏡、超聲內(nèi)鏡等明顯提高了早期胃腸道腫瘤的檢出率。染色內(nèi)鏡能對(duì)黏膜細(xì)微結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察,可根據(jù)黏膜及黏膜下血管紋理判斷病變的性質(zhì),對(duì)于扁平病變有較好的診斷,目前已運(yùn)用到全消化道黏膜表層的檢查。放大內(nèi)鏡通過在病變表面噴灑0.3%Lugol碘液或0.4%靛胭脂染色后對(duì)組織局部放大10-100倍,較清晰的顯示腺管開口形態(tài),可在行內(nèi)鏡檢查的同時(shí)判斷病變是否行內(nèi)鏡黏膜切除術(shù)(EMR),對(duì)早癌的診斷優(yōu)勢(shì)明顯。超聲內(nèi)鏡將內(nèi)鏡和超聲波結(jié)合于一體,行內(nèi)鏡檢查同時(shí),使用超聲對(duì)待觀察部位進(jìn)行定點(diǎn)探測(cè),可知病變侵潤(rùn)的深度、血管累及情況及與周圍臟器的關(guān)系。其在胰腺癌的診斷、胰腺假性囊腫穿刺治療方面有著其他內(nèi)鏡不可比擬的優(yōu)勢(shì)。激光共聚焦內(nèi)鏡(CLE)是一種新型的內(nèi)鏡技術(shù),它是傳統(tǒng)電子內(nèi)鏡和激光共聚焦顯微鏡整合的產(chǎn)物,在內(nèi)鏡檢查同時(shí),還能進(jìn)行共聚焦顯微鏡檢查,通過放大掃描檢查的組織1000倍,對(duì)細(xì)胞和亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)進(jìn)行觀察,被稱為“光學(xué)顯微鏡”。共聚焦內(nèi)鏡成像主要依靠熒光對(duì)比劑的存在,運(yùn)用較多的為熒光素鈉和鹽酸吖啶黃,熒光素鈉是一種廉價(jià)、無致突變性的對(duì)比劑,靜脈注射熒光素鈉數(shù)十秒后,共聚焦內(nèi)鏡下即可清晰顯示細(xì)胞輪廓和排列方式,其成像范圍可從上皮表面深入至固有層,然而熒光素鈉并不富集于細(xì)胞核,不易觀察到細(xì)胞核形態(tài),對(duì)病變的良惡性判別構(gòu)成很大干擾,且其可引起不良反應(yīng)如過敏反應(yīng)、惡心、嘔吐、眩暈等。鹽酸吖啶黃是通過局部噴灑對(duì)胃腸道黏膜進(jìn)行染色,其可以穿過細(xì)胞膜與細(xì)胞核的酸性物質(zhì)結(jié)合,因此可以清晰顯示細(xì)胞核,但其成像范圍局限于粘膜表面,不能行粘膜層以下的對(duì)比檢查,且尤為重要的是鹽酸吖啶黃有輕微的致突變作用,臨床上應(yīng)謹(jǐn)慎使用�；诠簿劢箖�(nèi)鏡巨大的使用價(jià)值,國(guó)內(nèi)外研究報(bào)道了許多新型的熒光對(duì)比劑,如熒光標(biāo)記抗體(CD31、 VEGF、EGFR)、熒光標(biāo)記的縮氨酸、代謝相關(guān)的熒光探針等。熒光基團(tuán)標(biāo)記的脂肪酸BODIPY-FA(C22H31BF2N2O2)是天然脂肪酸的類似物,其分子量為404,具有親脂性,激發(fā)/發(fā)射波長(zhǎng)為500/510nm能被488nm的氬離子激光器激活,目前主要運(yùn)用在脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)的研究中,可于流式細(xì)胞儀及共聚焦顯微鏡下觀察。研究目的在共聚焦內(nèi)鏡下,于不同腸癌模型的小鼠腸道局部給予BODIPY-FA染色,分析不同病變性質(zhì)的組織對(duì)BODIPY-FA的吸收情況,比較不同染色劑對(duì)于腫瘤診斷的效能,同時(shí)探討腸癌中脂肪酸吸收減少的相關(guān)機(jī)制。研究方法1、流式細(xì)胞儀檢鋇BODIPY-FA在腸癌細(xì)胞株中的吸收曲線及其與硬脂酸的吸競(jìng)爭(zhēng)抑制作用(1)將不同的結(jié)腸癌細(xì)胞株以相同密度600,000個(gè)/孔培養(yǎng)于六孔板中,分別加入1ml的luM BODIPY-FA工作液,恒溫箱內(nèi)放置10秒,30秒,1分鐘,2分鐘,5分鐘,10分鐘6個(gè)時(shí)間點(diǎn),吸去BODIPY-FA,0度冰PBS終止反應(yīng)并清洗,經(jīng)消化、離心后,流式細(xì)胞儀檢測(cè)各時(shí)間點(diǎn)不同細(xì)胞對(duì)BODIPY-FA的熒光吸收值。(2)將不同的結(jié)腸癌細(xì)胞株以相同密度600,000個(gè)/孔培養(yǎng)于六孔板中,用luM的BODIPY-FA工作液和濃度分別為0.15uM、1.5uM的硬脂酸混合液等體積混合,分別加入1ml上述不同混合液,無硬脂酸的為對(duì)照組,恒溫箱中放置10分鐘,0度冰PBS終止反應(yīng)并清洗,經(jīng)消化、離心后,流式細(xì)胞儀檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組BODIPY-FA的熒光吸收值。2、構(gòu)建動(dòng)物模型(1) AOM/DSS化學(xué)誘導(dǎo)結(jié)腸癌模型選取年齡為6周的Balb/c雄鼠,腹腔注射AOM12.5mg/kg后,正常飲水7天,于第2周予3%DSS連續(xù)7天,然后正常飲水連續(xù)14天,此為一個(gè)循環(huán),即連續(xù)給予3%DSS 7天,而后休息14天,總共三個(gè)循環(huán)。最后一個(gè)循環(huán)結(jié)束建模完成,不再給予DSS,我們前期的實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)：癌變的腸段(多靠近直腸)可出現(xiàn)肉眼可見的腸壁增厚、僵硬,能較好的提示腫瘤所在位置并進(jìn)行染色處理。分批次提取老鼠,可直接處死小鼠進(jìn)行組織染色的觀察和切片,也可進(jìn)行后續(xù)的活體實(shí)驗(yàn)。(2) APCmin小、鼠年齡為6-7周的APC-min雄鼠購(gòu)自南京大學(xué)模式動(dòng)物中心,為自發(fā)的腸道腺瘤模型,購(gòu)買6-8周雌鼠與之交配,待繁殖數(shù)量較多的小鼠并DNA鑒定后,可直接處死小鼠進(jìn)行組織染色的觀察和切片,也可進(jìn)行后續(xù)的活體實(shí)驗(yàn)。(3)裸鼠腸道移植瘤模型選取年齡為6周的Balb/c裸鼠。取處于對(duì)數(shù)期生長(zhǎng)期的腸癌細(xì)胞株LOVO大批量傳代,經(jīng)消化、計(jì)數(shù)、離心后,棄上清收集細(xì)胞沉淀。在嚴(yán)格無菌條件下,以外科手術(shù)方式,用29g的微型注射器將細(xì)胞沉淀(每次細(xì)胞個(gè)數(shù)約106)注射入結(jié)腸漿膜層,注射成功的漿膜層可見局部圓形白色的隆起,有時(shí)可沿管壁呈縱形。關(guān)閉腹腔,表面消毒。約3-4周后移植的LOVO可突破肌層到達(dá)粘膜下層甚至粘膜層。3、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)(實(shí)驗(yàn)過程避光進(jìn)行)(1)將腸癌模型的小鼠禁食12小時(shí),以保證腸道清潔,用戊巴比妥0.01g/ml,劑量為6-7ul/g小鼠體重,腹腔注射麻醉,采用外科手術(shù)方式暴露腹腔,間斷分離2段長(zhǎng)約1cm的結(jié)腸,以手術(shù)縫線結(jié)扎腸段兩端,結(jié)扎程度松緊適宜,以熒光染料不能通過結(jié)扎口,又不影響腸管血運(yùn)為佳。用注射器吸取100u1的染色劑注射入結(jié)扎好的腸段內(nèi),小鼠分3組,染色劑分別為200uMBODIPY-FA、0.02%吖啶黃、500uM 2-NBDG。10分鐘后拆除縫線并沖洗,可將染色部分的腸管剪取行快速冰凍切片,也可運(yùn)用共聚焦內(nèi)鏡在體觀察。(2)將共聚焦內(nèi)鏡的激光能量和亮度固定,于上述小鼠熒光劑局部染色10分鐘后,將染色部位沖洗干凈,共聚焦內(nèi)鏡探頭與腸粘膜層緊密接觸,每個(gè)部位觀察時(shí)間不超過20秒。內(nèi)鏡醫(yī)師根據(jù)共聚焦成像判斷探測(cè)部位的性質(zhì),實(shí)驗(yàn)者用29g注射器(吸取印度墨汁)準(zhǔn)確標(biāo)記經(jīng)內(nèi)鏡醫(yī)師判斷過的病變部位。標(biāo)號(hào)后的組織冰凍切片,HE金標(biāo)準(zhǔn)結(jié)果和共聚焦內(nèi)鏡診斷一一對(duì)應(yīng)。4、組織化學(xué)法將小鼠活體染色后的組織包埋、速凍后,快速冰凍切片,厚度為5um,輪流貼片(一半用于HE染色,一半用于熒光染色),置于室溫避光干燥10-20分鐘。HE染色的切片經(jīng)蘇木素染色、分化、返藍(lán)、伊紅染色、梯度脫水后,中性樹膠封片。熒光染色的切片在組織上滴染核染料DAPI,8-10分鐘后室溫干燥,抗熒光淬滅封片劑封片,于熒光顯微鏡下觀察、拍片。5、熒光定量PCR提取組織的RNA并檢測(cè)濃度,用TaKaRa逆轉(zhuǎn)錄試劑盒兩步法完成cDNA合成,第一步：反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)37℃ 15min；第二步：反轉(zhuǎn)錄酶失活85℃ 5s。使用TaKaRa SYBR Premix Ex Taq試劑盒和LC480 System熒光定量PCR擴(kuò)增儀進(jìn)行熒光定量PCR檢測(cè)。6、Western blotting提取細(xì)胞蛋白,用BCA蛋白質(zhì)定量試劑盒檢測(cè)樣品的蛋白濃度。經(jīng)電泳、蛋白質(zhì)電轉(zhuǎn)至PVDF膜,5%脫脂牛奶封閉,一抗孵育4℃過夜,一抗稀釋比例分別為CD36(1:400)、Caveolin-1(1:500)、GAPDH(1:3000),而后二抗(1：2500)孵育1小時(shí),ECL化學(xué)發(fā)光法顯影。7、免疫組織化學(xué)收集南方醫(yī)院25例結(jié)直腸癌手術(shù)患者配對(duì)標(biāo)本(正常和腫瘤共50),組織經(jīng)常規(guī)固定、包埋、切片、脫蠟、水化后,以0.01M枸櫞酸鈉緩沖液(pH6.0)95度高溫抗原修復(fù)10分鐘,使用超敏SP試劑盒阻斷、封閉,一抗稀釋濃度為Caveolin-11:100、CD36 1:100,一抗孵育4℃冰箱過夜,然后DAB顯色劑顯色,蘇木素復(fù)染、返藍(lán),常規(guī)脫水、透明及封片后,于顯微鏡下觀察。8、分析及統(tǒng)計(jì)方法熒光顯微鏡下組織的平均熒光強(qiáng)度使用Image-Pro Plus 6.0統(tǒng)計(jì)軟件,共聚焦圖片的灰度值使用Image J軟件,共聚焦圖片選取分析面積為60x60um,同一病變性質(zhì)的區(qū)域選取3個(gè)取其平均值,所有數(shù)值為平均值士標(biāo)準(zhǔn)誤。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用GraphPad Prism (v5.00)統(tǒng)計(jì)軟件,兩組間比較用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),多組組間比較用單因素方差分析。P值0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。結(jié)果1、BODIPY-FA在腸癌細(xì)胞內(nèi)的吸收及與硬脂酸競(jìng)爭(zhēng)情況不同細(xì)胞株對(duì)BODIPY-FA的吸收存在差異,SW480對(duì)BODIPY-FA的吸收量最多,而LOVO和HCT116對(duì)其吸收相對(duì)較少。在10分鐘內(nèi),SW480、 LOVO、HCT116細(xì)胞吸收BODIPY-FA呈不斷增長(zhǎng)曲線提示其在細(xì)胞內(nèi)不斷蓄積,而HT29在10分鐘可見下降趨勢(shì)。此實(shí)驗(yàn)探索了貼壁細(xì)胞對(duì)BODIPY-FA染色的最佳時(shí)間,為后續(xù)的動(dòng)物在體染色實(shí)驗(yàn)提供參照。在BODIPY-FA與硬脂酸(C18：0)的吸收競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)中,濃度為0.15uM和1.5uM的硬脂酸能不同程度的抑制細(xì)胞對(duì)BODIPY-FA的吸收,這種抑制效應(yīng)在SW480中最為顯著。實(shí)驗(yàn)證明BODIPY-FA與硬脂酸共同競(jìng)爭(zhēng)細(xì)胞膜上的脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白,其為脂肪酸的類似物,可作為游離脂肪酸的替代物進(jìn)行生物體內(nèi)代謝情況的研究。2、Caveolin-1和CD36在人結(jié)腸癌組織中表達(dá)降低熒光定量PCR檢測(cè)配對(duì)的人結(jié)腸癌患者正常和腫瘤組織中mR NA的表達(dá)。CD36mRNA在腫瘤組織中表達(dá)量顯著低于正常黏膜,(腫瘤：0.003643±0.0006902,正常：0.07623±0.01995,P0.005)。caveolin-1 mRNA在腸癌組織中表達(dá)量較正常組織降低(腫瘤：0.1031±0.04203,正常：0.4381±0.1129,P0.005)。余FABPpm、FATP4mRNA在腫瘤和正常組織中表達(dá)無明顯差異。通過Western blotting檢測(cè)配對(duì)標(biāo)本中Caveolin-1和CD36的蛋白表達(dá)量。86%的腫瘤組織Caveolin-1蛋白低表達(dá),其平均表達(dá)量較正常組織減少約1.6倍。CD36在腫瘤組織中表達(dá)明顯減少,約為正常黏膜的1/2甚至1/4。免疫組化檢測(cè)人結(jié)腸癌配對(duì)標(biāo)本中Caveolin-1和CD36的蛋白表達(dá)情況,結(jié)果示：Caveolin-1主要于胞膜和胞漿中表達(dá),在血管和基質(zhì)細(xì)胞內(nèi)也可檢測(cè)到表達(dá),Caveolin-1于腫瘤中的表達(dá)較正常組織明顯降低,P=0.0024。CD36蛋白主要表達(dá)在細(xì)胞膜,在胞漿、胞核中也有少量表達(dá),相對(duì)于正常黏膜,CD36在腸癌的粘膜細(xì)胞極少觀察到染色陽(yáng)性的細(xì)胞,表達(dá)顯著減少,P0.0001。3、熒光顯微鏡下BODIPY-FA在小鼠結(jié)腸癌模型中成像運(yùn)用自體對(duì)照的方法,于小鼠腸段局部BODIPY-FA染色,組織冰凍切片后熒光顯微鏡成像顯示：在AOM/DSS誘導(dǎo)腸癌的小鼠中,87.1%的腫瘤部位顯示為熒光低信號(hào),相比正常粘膜顯著降低,(腫瘤：0.0836士0.0057,正常：0.1281士0.0106,P=0.0005)：同時(shí)BODIPY-FA在炎癥部位的熒光信號(hào)強(qiáng)于正常粘膜(炎癥：0.145士0.0212,P=0.4639),有助于判別腫瘤/炎癥/正常組織。在APC-min小鼠中,100%的腺瘤為BODIPY-FA低信號(hào),正常黏膜對(duì)其吸收明顯增加,(腫瘤：0.0648士0.018,正常：0.15士0.0178,P=0.0092)。BODIPY-FA染色后成像效果清晰,熒光顯微鏡下除能清晰顯示常規(guī)的腺體結(jié)構(gòu)、細(xì)胞排列外,也可對(duì)細(xì)微結(jié)構(gòu)進(jìn)行描述,如同另一種形式的免疫組化特異、直觀的展現(xiàn)觀察部位的病變情況。2-NBDG局部噴染不同小鼠模型的腸道,組織切片熒光顯微鏡成像示：熒光強(qiáng)度弱、細(xì)胞輪廓不清晰,正常粘膜和腫瘤部位的2-NBDG熒光信號(hào)無差異。鹽酸吖啶黃染色后,使黏膜表層粘膜上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、炎癥細(xì)胞等胞核均著色,少量能進(jìn)入細(xì)胞質(zhì),腫瘤和正常部位的熒光值無差異。4、激光共聚焦內(nèi)鏡下BODIPY-FA在小鼠結(jié)腸癌模型中成像腫瘤組織在共聚焦內(nèi)鏡下的成像顯示為相對(duì)性“暗區(qū)”,在AOM/DSS化學(xué)誘導(dǎo)腸癌的小鼠中,85%的腫瘤部位熒光信號(hào)低于正常黏膜,平均灰度值明顯降低,(腫瘤：66.27±3.387,正常：121.8±8.281,P0.0001),同時(shí)炎癥組織對(duì)BODIPY-FA吸收較正常黏膜增多(炎癥：133.4±11.13,P=0.4077)。在APC-min中,100%的腺瘤對(duì)BODIPY-FA吸收減少,平均灰度值顯著低于正常部位,(腫瘤：56.23±4.03,正常：148.8±10.85,P0.0001)。同時(shí)因共聚焦內(nèi)鏡本身設(shè)備的優(yōu)勢(shì),BODIPY-FA染色后可清晰顯示細(xì)胞的排列、輪廓、核/質(zhì)比例及反襯下的胞核形態(tài)。將共聚焦內(nèi)鏡與BODIPY-FA染色結(jié)合,通過腫瘤呈現(xiàn)的特異性低信號(hào)及細(xì)胞、亞細(xì)胞水平的成像便于對(duì)組織性質(zhì)的判定。同時(shí)BODIPY-FA的吸收為主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)過程,僅具有生物學(xué)活性的組織才能較好的顯示其分布,死亡小鼠或斷離時(shí)間較長(zhǎng)的組織成像效果差。共聚焦內(nèi)鏡結(jié)合2-NBDG局部染色顯像模糊,熒光信號(hào)弱,短時(shí)間內(nèi)極少進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),不能對(duì)觀察部位的病變類型作出判斷。使用鹽酸吖啶黃染色的部位,所有組織的胞核均能顯示,不同病變類型無差異。結(jié)論通過上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果,我們得出以下結(jié)論：1、BODIPY-FA為脂肪酸的類似物,在短時(shí)間內(nèi)可于細(xì)胞內(nèi)不斷蓄積。2、相比其他對(duì)比劑,BODIPY-FA通過相對(duì)“暗區(qū)”特異地顯示腫瘤位置,具有高特異性。3、BODIPY-FA染色后能夠?qū)λ∽冞M(jìn)行細(xì)胞、亞細(xì)胞水平的描述,成像清晰,辨析度高。4、在活體共聚焦使用中僅需局部染色,無毒性反應(yīng),方法快速、安全、便捷。5、人結(jié)腸癌組織中Caveolin-1和CD36的mRNA和蛋白表達(dá)顯著降低,腫瘤對(duì)BODIPY-FA的吸收減少可能基于此原因。我們通過構(gòu)建小鼠腸癌模型并在體實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),腫瘤組織對(duì)于BODIPY-FA的吸收明顯減少,其分子機(jī)制可能與Caveolin-1和CD36低表達(dá)相關(guān),同時(shí)BODIPY-FA與共聚焦內(nèi)鏡的結(jié)合實(shí)現(xiàn)了腫瘤特異示蹤及細(xì)胞內(nèi)成像,有助于病變的實(shí)時(shí)定位、定性。本研究為臨床實(shí)踐及科研工作提供了發(fā)現(xiàn)早期腫瘤的新思路,具有重要的價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：結(jié)腸癌 激光共聚焦內(nèi)鏡 脂肪酸代謝 BODIPY-FA
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R735.34
【目錄】：

• 摘要3-12
• ABSTRACT12-24
• 第一章 前言24-30
• 第二章 材料和方法30-44
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料和試劑30-33
• 2. 實(shí)驗(yàn)儀器33
• 3. 實(shí)驗(yàn)方法33-44
• 第三章 結(jié)果44-57
• 1. BODIPY-FA在腸癌細(xì)胞株的吸收曲線及其生物學(xué)性狀44-45
• 2. Caveolin-1和CD36在人結(jié)腸癌組織中表達(dá)降低45-47
• 3. 熒光顯微鏡下BODIPY-FA在小鼠結(jié)腸癌模型中成像47-52
• 4. 激光共聚焦內(nèi)鏡下BODIPY-FA在小鼠結(jié)腸癌模型中成像52-57
• 第四章 討論57-63
• 參考文獻(xiàn)63-70
• 中英文縮略詞對(duì)照表70-71
• 攻讀學(xué)位期間成果71-72
• 致謝72-74

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 ;Dysregulated lipid metabolism in cancer[J];World Journal of Biological Chemistry;2012年08期

  本文關(guān)鍵詞：激光共聚焦內(nèi)鏡結(jié)合熒光標(biāo)記的脂肪酸特異檢測(cè)大腸癌，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：276103