【摘要】：目的:1.建立生物樣品中丙泊酚及其代謝物的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜和氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法;2.建立丙泊酚及其代謝物的死后分布和死后再分布研究動物模型;3.研究丙泊酚及其代謝物在實驗動物體內(nèi)的死后分布和死后再分布規(guī)律,為涉及丙泊酚麻醉相關案件的法醫(yī)學鑒定提供實驗依據(jù)。方法:1.樣品處理:丙泊酚和4-羥基-丙泊酚利用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜進行定性、定量檢測,葡萄糖醛酸丙泊酚利用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜進行定性、定量檢測。待檢生物樣品勻漿后添加內(nèi)標百里酚,經(jīng)環(huán)己烷萃取后水浴中氮氣流下吹干,色譜甲醇復溶后使用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測丙泊酚;待檢生物樣品勻漿,經(jīng)乙腈萃取后水浴中氮氣流下吹干,殘渣中分別加入吡啶和MSTFA,嚴密封口后置于50℃水浴30min,待降至室溫后,反應液使用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測4-羥基-丙泊酚衍生化產(chǎn)物;待檢生物樣品勻漿,經(jīng)乙腈萃取后水浴中氮氣流下吹干,色譜甲醇復溶后使用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測葡萄糖醛酸丙泊酚。以上化合物均采用MRM模式掃描,利用保留時間、定性離子對比例定性,丙泊酚采用內(nèi)標工作曲線法定量,葡萄糖醛酸丙泊酚和4-羥基-丙泊酚采用外標工作曲線法定量。2.動物模型:丙泊酚及其代謝物的死后分布研究動物模型:雄性SD大鼠,分別以臨床治療極量(6.3×2mg/kg)和LD_(50)劑量(42mg/kg)經(jīng)尾靜脈注射丙泊酚,觀察記錄注射后表現(xiàn),LD_(50)劑量組大鼠待其死亡后迅速解剖,臨床治療極量組大鼠于LD_(50)劑量組大鼠平均死亡時間處死解剖,取心血、心臟、肝臟、肺臟、肺臟、腎臟、大腦、肌肉、睪丸置于-20℃保存待檢。丙泊酚及其代謝物的死后再分布研究動物模型:巴馬小型豬,以臨床治療極量經(jīng)頸靜脈插管注射丙泊酚(1.1×2mg/kg)后處死,迅速解剖取材,分別于死后不同時間(6h、12h、24h、48h、72h、96h、120h、144h、168h)取心血、周圍血、心肌、肝臟、肺臟、腎臟、大腦、肌肉置于-20℃保存待檢。3.統(tǒng)計學分析:生物樣品中目標物質(zhì)含量以均數(shù)±標準差(x?±s)表示,使用SPSS進行正態(tài)性分布和方差齊性檢驗。各組織臟器內(nèi)目標物質(zhì)含量用Graphpad prism 6.0進行分析,P0.05時,認為各組物質(zhì)含量間具有統(tǒng)計學差異。結果:1.生物樣品中丙泊酚及其代謝物的檢測方法血液和肝臟中丙泊酚的最低檢測限為2ng/m L或ng/g,最低定量限為8ng/m L或ng/g,線性范圍為0.062 5μg/m L或μg/g-10μg/m L或μg/g;4-羥基-丙泊酚的最低檢測限為1ng/mL或ng/g,最低定量限分別為4ng/m L或ng/g,線性范圍為0.0625μg/m L或μg/g-10μg/m L或μg/g;葡萄糖醛酸丙泊酚的最低檢測限為0.25ng/mL和0.5ng/g,最低定量限分別為1ng/m L和2ng/g,線性范圍為0.03125μg/mL或μg/g-5μg/mL或μg/g�；貧w方程相關系數(shù)R~2均大于0.99;日內(nèi)精密度為1.74%-9.14%,日間精密度在2.17%-9.11%,回收率為92.11%-109.4%。2.丙泊酚及其代謝物在大鼠體內(nèi)的死后分布規(guī)律LD_(50)劑量丙泊酚經(jīng)尾靜脈注射染毒致死大鼠體內(nèi)丙泊酚含量由高到低為:血液心臟大腦腎臟肝臟肺臟肌肉睪丸脾臟;4-羥基-丙泊酚含量由高到低為:肺臟腎臟肝臟心臟血液脾臟睪丸肌肉大腦;葡萄糖醛酸丙泊酚含量由高到低為:肝臟腎臟血液睪丸肺臟脾臟心臟肌肉大腦。臨床治療極量丙泊酚經(jīng)尾靜脈注射染毒大鼠體內(nèi)丙泊酚含量由高到低為:肝臟腎臟大腦心臟睪丸肺臟肌肉血液脾臟;4-羥基-丙泊酚含量由高到低為:腎臟肺臟血液肌肉睪丸肝臟心臟脾臟大腦;葡萄糖醛酸丙泊酚含量由高到低為:肝臟肺臟腎臟睪丸血液脾臟心臟肌肉大腦。不同劑量給藥后丙泊酚在大鼠體內(nèi)的死后分布規(guī)律存在劑量依賴性,代謝物的死后分布規(guī)律無劑量依賴性。3.丙泊酚及其代謝物在巴馬小型豬體內(nèi)的死后再分布規(guī)律在常溫、4℃和-20℃保存條件下,臨床治療極量注射丙泊酚后,丙泊酚及其代謝物在巴馬小型豬尸體內(nèi)均會發(fā)生死后再分布現(xiàn)象。在不同保存條件下,死后再分布的規(guī)律不完全相同:常溫保存條件下,心血中丙泊酚濃度在死亡6h有明顯下降,之后濃度隨死亡時間保持穩(wěn)定,變化不顯著;肌肉和大腦中4-羥基-丙泊酚濃度隨死亡時間變化不顯著;心臟和肌肉中葡萄糖醛酸丙泊酚濃度隨死亡時間變化不顯著;4℃保存條件下,心血中丙泊酚濃度隨死亡時間保持穩(wěn)定,變化不顯著;肌肉和大腦中4-羥基-丙泊酚濃度隨死亡時間變化不顯著;心臟和肌肉中葡萄糖醛酸丙泊酚濃度隨死亡時間變化不顯著。-20℃保存條件下,心血中丙泊酚濃度隨死亡時間相對穩(wěn)定,變化不顯著;心血中4-羥基-丙泊酚濃度隨死亡時間變化不顯著;心臟和肌肉中葡萄糖醛酸丙泊酚濃度隨死亡時間變化不顯著。結論:1.本研究建立了生物樣品中丙泊酚及其代謝物的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜及氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法,可應用于涉及丙泊酚麻醉相關案件的法醫(yī)學鑒定和法醫(yī)毒物動力學研究。2.本研究建立了丙泊酚及其代謝物的死后分布和死后再分布研究動物模型,可應用于涉及丙泊酚麻醉相關案件的法醫(yī)學鑒定和法醫(yī)毒物動力學研究。3.LD_(50)劑量和臨床治療極量丙泊酚經(jīng)大鼠尾靜脈注射后,大鼠體內(nèi)各組織中均檢出丙泊酚、4-羥基-丙泊酚和葡萄糖醛酸丙泊酚,丙泊酚及其代謝物在體內(nèi)分布不均勻,丙泊酚的死后分布規(guī)律存在劑量差異,代謝物的死后分布規(guī)律無劑量差異。4.在常溫、4℃和-20℃保存條件下,臨床治療極量注射丙泊酚巴馬小型豬尸體內(nèi)均會發(fā)生死后再分布現(xiàn)象。在判定死因時應充分考慮到死亡時間對丙泊酚及其代謝物濃度的影響,在采集檢材時優(yōu)先采取心血、心臟、肌肉和大腦進行定性、定量分析,同時應考慮死后再分布現(xiàn)象對毒物分析結果的影響,作出科學客觀的法醫(yī)學鑒定結論。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：D919

【參考文獻】

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