【摘要】：【研究目的】 本實(shí)驗(yàn)通過檢測(cè)小鼠外周血細(xì)胞因子表達(dá)水平的變化及肝組織病理學(xué)變化等方法，旨在研究紅景天苷預(yù)處理對(duì)刀豆蛋白A誘導(dǎo)的肝損傷小鼠是否具有保護(hù)作用，并探討其在刀豆蛋白A誘導(dǎo)肝損傷模型中可能的免疫機(jī)制。 【研究方法】 1.將C57BL/6雄性小鼠隨機(jī)分為3組：生理鹽水（normal saline， NS）組：經(jīng)小鼠尾靜脈注射生理鹽水100μl，1h后再次經(jīng)尾靜脈注射生理鹽水100μl。刀豆蛋白A(concanavalineA，ConA)組：經(jīng)小鼠尾靜脈注射生理鹽水100μl，1h后經(jīng)尾靜脈注射刀豆蛋白A(20mg/kg，100μl)。紅景天苷(salidroside，SAL)組：經(jīng)小鼠尾靜脈注射紅景天苷(50mg/kg，100μl)，1h后經(jīng)尾靜脈注射刀豆蛋白A(20mg/kg，100μl)。 2.各組小鼠每組各10只，尾靜脈最后一次注射12h時(shí)，在七氟烷麻醉下，經(jīng)心臟采血，采用全自動(dòng)生化分析儀技術(shù)檢測(cè)小鼠血漿中谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanineaminotransferase, ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartate aminotransferase, AST）水平。安爾碘消毒皮膚，經(jīng)腹中線開腹，取出小鼠肝臟組織，行HE染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察小鼠肝臟損傷程度。 3.各組小鼠每組各10只，尾靜脈最后一次注射12h時(shí)，在七氟烷麻醉下，經(jīng)心臟采血，置入抗凝管冷存；取出肝組織及脾臟進(jìn)行研磨，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠外周血、肝臟及脾臟研磨液中CD4+T和CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)。 4.各組小鼠每組各10只，尾靜脈最后一次注射12h時(shí)，在七氟烷麻醉下，經(jīng)心臟采血，采用血漿酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)小鼠外周血TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10濃度；取出肝臟組織采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)肝臟組織中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10以及CXCL-10mRNA表達(dá)水平。 5.各組小鼠每組各10只，尾靜脈最后一次注射12h時(shí)，在七氟烷麻醉下，取出肝臟組織，采用Western蛋白印跡方法檢測(cè)NF-κB p65與IκBα的蛋白表達(dá)水平。 【結(jié)果】 1. Con A組外周血中ALT、AST表達(dá)水平均顯著高于NS組(P均小于0.01)；SAL組外周血中ALT、AST表達(dá)水平均顯著低于Con A組(P均小于0.01)；SAL組與NS組之間外周血中ALT、AST表達(dá)水平均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P均大于0.05）。小鼠肝臟組織病理切片在光學(xué)顯微鏡下顯示，NS組小鼠肝細(xì)胞形態(tài)無異常，肝小葉結(jié)構(gòu)完整；ConA組小鼠肝組織大片及亞大片壞死，細(xì)胞壞死、腫脹嚴(yán)重；SAL組肝臟病變程度較刀豆蛋白A對(duì)照組顯著減輕。各組小鼠肝臟病理切片光學(xué)顯微鏡下評(píng)分統(tǒng)計(jì)分析提示，ConA組評(píng)分顯著高于NS組(P0.01)；SAL組評(píng)分明顯低于Con A組(P0.01); SAL組評(píng)分顯著高于NS組(P0.01)。 2.采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)小鼠外周血、肝臟及脾臟組織結(jié)果顯示，Con A組小鼠外周血中CD4+T及CD8+T淋巴淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)均顯著低于NS組(P均小于0.01)，肝臟組織中CD4+T及CD8+T淋巴淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)均顯著高于NS組(P均小于0.01)，脾臟組織中CD4+T及CD8+T淋巴淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)均顯著低于NS組(P均小于0.01)；SAL組小鼠外周血中CD4+T及CD8+T淋巴淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)與Con A組均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P均大于0.05)，肝臟組織內(nèi)CD4+T及CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)均顯著低于Con A組(P均小于0.01)，脾臟組織中CD4+T及CD8+T淋巴計(jì)數(shù)均明顯高于Con A組(P均小于0.01)；SAL組小鼠外周血中CD4+T及CD8+T淋巴淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)均顯著低于NS組(P均小于0.01)，肝臟組織內(nèi)CD4+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著高于NS組(P0.01)而CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)與NS組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)，脾臟組織中CD4+T及CD8+T淋巴計(jì)數(shù)均明顯低于NS組(P均小于0.05)。 3．采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)小鼠外周血結(jié)果顯示， Con A組中TNF-α、IFN-γ、IL-6、IL-10水平顯著高于NS組（P均小于0.01)；SAL組中上述指標(biāo)均顯著低于Con A組（P均小于0.01)。采用RT-PCR法檢測(cè)小鼠肝臟組織結(jié)果顯示，，Con A組中TNF-α、IFN-γ、IL-6、CXCL-10mRNA表達(dá)水平顯著高于NS組（P均小于0.01),IL-10mRNA顯著低于NS組（P0.01）；SAL組中TNF-α、IFN-γ、IL-6、CXCL-10mRNA顯著低于Con A組（P均小于0.01)，IL-10mRNA顯著高于Con A組（P0.05）。 4.采用western蛋白印跡法檢測(cè)小鼠肝組織結(jié)果顯示，SAL組小鼠肝臟組織中NF-κB p65及IκBα蛋白表達(dá)明顯低于Con A組。 【結(jié)論】 紅景天苷預(yù)處理可顯著減輕刀豆蛋白A誘導(dǎo)的小鼠肝損傷，其機(jī)制可能與紅景天苷抑制趨化因子CXCL-10mRNA表達(dá)減少CXCL-10的分泌，降低CD4+T及CD8+T淋巴細(xì)胞在肝臟組織浸潤(rùn)，以及抑制NF-κB p65和IκBα表達(dá)水平，調(diào)控TNF-α、IFN-γ、IL-6及IL-10等炎癥因子分泌有關(guān)。
【圖文】：

紅景天苷預(yù)處理對(duì)刀豆蛋白 A 誘導(dǎo)小鼠肝損傷的結(jié) 果景天苷預(yù)處理對(duì)刀豆蛋白 A 誘導(dǎo)肝損傷小酶及谷草轉(zhuǎn)氨酶的影響最后一次尾靜脈注射后12h時(shí)，外周血經(jīng)自動(dòng)生化儀檢測(cè)血漿 ALT、AST 的水平均明顯高于 NS 組（P 均小于 0.0T、AST 水平均顯著低于 Con A 組（P 均小于 0.01），而大于＞0.05) （圖 1，圖 2）。

天苷預(yù)處理對(duì)刀豆蛋白 A 誘導(dǎo)肝損傷小鼠外周血谷草轉(zhuǎn)水組；Con A：刀豆蛋白 A 組；SAL：紅景天苷組。與 NS 組相比，P<0.01。紅景天苷預(yù)處理對(duì)刀豆蛋白 A 誘導(dǎo)小鼠肝響微鏡下，NS 組肝臟組織病理切片可見肝小葉結(jié)構(gòu)完整，A）。Con A 組肝組織大面積壞死，肝細(xì)胞氣球樣變，表現(xiàn)變，匯管區(qū)明顯有大量淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)（圖 3B）。SAL 組肝死，但肝小葉仍舊存在，偶有不完整情況存在，匯管區(qū)亦（圖 3C）。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 ;Signal molecule-mediated hepatic cell communication during liver regeneration[J];World Journal of Gastroenterology;2009年46期

2 ;Immune mechanisms of Concanavalin A model of autoimmune hepatitis[J];World Journal of Gastroenterology;2012年02期

本文編號(hào)：2699945