發(fā)布時(shí)間：2019-10-17 00:42

【摘要】：目的:糖尿病是威脅人類健康主要疾病之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)糖尿病患者中心血管并發(fā)癥所導(dǎo)致的死亡率75%,其中大多數(shù)是死于糖尿病相關(guān)的冠心病。臨床上糖尿病患者可出現(xiàn)各種類型心律失常,但其發(fā)病機(jī)制目前仍未完全明確。同時(shí)臨床上也缺乏有效的治療手段,主要是抗心律失常藥物及導(dǎo)管消融,對(duì)于緩慢性心律失常通過(guò)植入永久起搏器治療,對(duì)于VT/VF還可植入ICD。雖然這些治療措施積極有效,但同時(shí)也有其局限性。近年來(lái),人們提出的針對(duì)心肌離子電流紊亂、折返環(huán)形成及異位興奮點(diǎn)等的病理生理學(xué)上游治療的概念。縫隙連接(gap junction,GJ)是心肌細(xì)胞間特殊的連接方式,常見(jiàn)于心肌間閏盤處。GJ中的連接蛋白(connexin,Cx)在細(xì)胞偶聯(lián)中發(fā)揮著重要的作用。心肌的連接蛋白主要有Cx40、Cx43及Cx45三種。已有研究證實(shí)Cx40主要分布于心房肌及心室肌中,Cx43則主要分布于心室肌,在心房肌中僅有低水平表達(dá),Cx45分布于心臟的傳導(dǎo)系統(tǒng)中。在電傳導(dǎo)方面,Cx40及Cx43具有快速傳導(dǎo)的特點(diǎn),而Cx45的傳導(dǎo)速率相比而言卻要慢很多,可能是在心電傳導(dǎo)中起到調(diào)控作用。糖尿病所致的心律失常發(fā)生與心肌組織的被動(dòng)電特性及傳導(dǎo)性有關(guān),而細(xì)胞-細(xì)胞之間的傳導(dǎo)性正是由位于閏盤的縫隙連接(GJ)所決定。研究證實(shí)RAAS的過(guò)度激活、氧化應(yīng)激、心肌纖維化等可是導(dǎo)致糖尿病心肌Cx表達(dá)與分布異常的原因。本研究通過(guò)分析糖尿病大鼠心肌Cx40表達(dá)與分布的改變,探討參松養(yǎng)心膠囊及貝那普利對(duì)糖尿病大鼠心肌Cx40的影響。方法:對(duì)購(gòu)自南京青龍山動(dòng)物飼養(yǎng)中心的雄性SD大鼠50只進(jìn)行隨機(jī)分組,空白對(duì)照組10只,模型組40只。適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后,模型組予以一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(Streptozotocin,SZT)65mg/kg,3天后測(cè)尾靜脈血糖,血糖≥16.7mmol/l為造模成功。最終糖尿病大鼠成模37只,模型組再隨機(jī)分為糖尿病對(duì)照組12只,貝那普利組12只及參松養(yǎng)心膠囊組13只。貝那普利組予以每日貝那普利7.5mg/kg灌胃,參松養(yǎng)心膠囊組予以每日參松養(yǎng)心膠囊1g/kg灌胃,空白對(duì)照組及糖尿病組每日予以等量蒸餾水灌胃。各組予以充足食物及水飼養(yǎng)8周后,予以25%烏拉坦6ml/kg腹腔注射,麻醉后行心電圖檢查。斷頭猝死,暴露心臟,取心臟,置于4℃生理鹽水中洗滌。沿心臟長(zhǎng)軸切開(kāi),再沿房室溝切開(kāi),分別取出左房及左室。標(biāo)本分成兩部分,其中一份浸入福爾馬林組織固定液中浸泡一周,另一部分放置-80℃超低溫冰箱中保存。采用westernbloting技術(shù)分別對(duì)各組心室肌及心房肌cx40表達(dá)水平進(jìn)行分析。采用he染色技術(shù)觀察各組大鼠心肌結(jié)構(gòu)改變并采用免疫熒光技術(shù)對(duì)心肌cx40分布情況進(jìn)行分析。結(jié)果:1、飼養(yǎng)8周后,糖尿病大鼠出現(xiàn)明顯的三多一少癥狀,心電圖顯示糖尿病組大鼠出現(xiàn)各種類型心律失常,糖尿病大鼠組心率較其他三組明顯下降(p0.05),糖尿病組p波寬度增寬,與正常對(duì)照組及貝那普利組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05),但與參松養(yǎng)心膠囊組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。四組間qrs時(shí)間、qtc比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、糖尿病組大鼠心房肌及心室肌cx40水平較正常對(duì)照組下降(p0.05),貝那普利組心房肌及心室肌cx40表達(dá)水平較糖尿病組有升高趨勢(shì)(p0.05),參松養(yǎng)心膠囊組心房肌cx40表達(dá)水平較糖尿病組有升高趨勢(shì),但心室肌cx40表達(dá)水平較糖尿病組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.05)3、he染色顯示正常對(duì)照組大鼠心肌細(xì)胞排列整齊,糖尿病組大鼠出現(xiàn)大片的心肌細(xì)胞壞死凋亡,排列紊亂,細(xì)胞間多見(jiàn)脂肪組織及纖維組織,貝那普利組及參松養(yǎng)心膠囊組大鼠心肌細(xì)胞排列整齊,但仍可見(jiàn)到纖維組織及血管炎性反應(yīng)。3、免疫染色顯示,正常對(duì)照組心肌cx40表達(dá)分布于心肌細(xì)胞長(zhǎng)軸的端端,呈階梯狀分布,偶可見(jiàn)于細(xì)胞側(cè)面分布。糖尿病組大鼠心肌cx40表達(dá)多數(shù)分布于心肌細(xì)胞的側(cè)面,分布紊亂,貝那普利組大鼠心肌cx40表達(dá)分布呈現(xiàn)端端分布及側(cè)面化分布并存的現(xiàn)象,參松養(yǎng)心膠囊組心房肌cx40表達(dá)水平增高,但分布仍呈現(xiàn)為側(cè)面化分布為主。結(jié)論:1、糖尿病大鼠可出現(xiàn)各種類型心律失常及hr下降等。貝那普利及參松養(yǎng)心膠囊均對(duì)hr有提高作用。貝那普利對(duì)p波寬度有改善作用,但對(duì)qrs時(shí)間及qtc影響有限,參松養(yǎng)心膠囊對(duì)p波寬度、qrs及qtc影響有限。2、cx40主要分布與心房肌中,在心室肌中分布較少。糖尿病大鼠心肌出現(xiàn)Cx40表達(dá)的下降及分布呈側(cè)面化表現(xiàn)。3、貝那普利對(duì)糖尿病大鼠心肌Cx40的表達(dá)及分布均有一定的改善作用,參松養(yǎng)心膠囊對(duì)糖尿病大鼠心房肌Cx40的表達(dá)有一定的上調(diào)作用,但對(duì)其空間分布影響較小;參松養(yǎng)心膠囊對(duì)糖尿病大鼠心室肌Cx40的表達(dá)及分布無(wú)明顯改善作用
【圖文】：

皖南醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文Connexin40 的表達(dá)[10]。我們實(shí)驗(yàn)中通過(guò) Western blotting 技術(shù)比較心房與心室肌Connexin40 的表達(dá)，，及免疫熒光技術(shù)分析 Cx40 分布再次驗(yàn)證 Cx40 在心房及心室中分布的差異。結(jié)果表明，Connexin40 在心房中表達(dá)遠(yuǎn)高于心室，且這種差異也同樣存在于糖尿病組、貝那普利組及參松養(yǎng)心膠囊組大鼠心肌中。4.1 大鼠心室肌及心房肌 Cx40 表達(dá)差異 Western blotting 圖及免疫熒光圖（圖 2）圖 2 正常組大鼠心室肌及心房肌 Cx40 表達(dá)差異

25注: 圖 3 中 A（正常對(duì)照組）：心肌細(xì)胞排列規(guī)則、緊密；B（糖尿病組）心肌排列紊亂，可見(jiàn)心肌間大量的脂肪浸潤(rùn)，大片的無(wú)核淡染區(qū)及血管炎性反應(yīng)；C（貝那普利組）心肌細(xì)胞排列規(guī)則，但組織較疏松；D（參松養(yǎng)心膠囊組）可見(jiàn)心肌細(xì)胞排列欠規(guī)則，少許無(wú)核淡染區(qū)及少許血管炎性反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2550272