【摘要】：背景:甲狀腺激素(TH)幾乎作用于機(jī)體所有的細(xì)胞,海馬神經(jīng)元便是其中之一。海馬是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中負(fù)責(zé)記憶與情感的重要區(qū)域。有研究發(fā)現(xiàn)成年期甲狀腺激素缺乏可以導(dǎo)致海馬結(jié)構(gòu)損傷和功能異常,其原因尚不十分清楚,一系列突觸蛋白參與的突觸可塑性改變可能是其機(jī)制之一。突觸結(jié)合蛋白-1(synaptotagmin-1,syt-1)和突觸小體相關(guān)蛋白-25KDa(synaptosomal-associated protein of 25kDa,SNAP-25)是兩種重要的突觸蛋白,高度表達(dá)于海馬神經(jīng)元。已有研究顯示成年期甲減可以導(dǎo)致突觸蛋白如syt-1和SNAP-25表達(dá)改變。甲狀腺素(T4)替代治療是治療甲減的常規(guī)手段,它的治療標(biāo)準(zhǔn)是使血清甲狀腺激素恢復(fù)到正常水平,但其是否能完全恢復(fù)甲減所致的腦損傷目前還存在爭議。我們之前的研究報道甲減大鼠在給予常規(guī)劑量T4替代治療后,血清T3、T4水平恢復(fù)正常,但異常表達(dá)的突觸蛋白syt-1和SNAP-25卻沒有完全恢復(fù)正常,提示有必要尋找其他更加有效的治療甲減腦損傷的方法。多奈哌齊是一種乙酰膽堿酯酶抑制劑,臨床上常用它來治療輕中度老年性癡呆。有研究證實(shí)它除了抑制乙酰膽堿酯酶外,還對神經(jīng)元具有多種保護(hù)作用。因此,應(yīng)用多奈哌齊來恢復(fù)甲減所致的海馬損傷可能也具有潛在的治療價值。目的:在本研究中,我們通過觀察成年期甲減大鼠海馬突觸的超微結(jié)構(gòu),以及突觸蛋白syt-1、snap-25表達(dá)的情況,旨在評價甲狀腺素聯(lián)合多奈哌齊治療對上述觀察指標(biāo)的影響。方法:健康雄性sd大鼠75只,3月齡,spf級,體重240-280g,隨機(jī)分為對照組(con)、甲減組(hypo)、甲狀腺素治療組(t4)、多奈哌齊治療組(don)、聯(lián)合治療組(t4+don)5個組。除了con組飲用正常水外,其它4組每天飲用0.05%(w/v)ptu水制造甲減動物模型,共持續(xù)6周時間。從第4周開始給予干預(yù)措施,其中t4組大鼠予腹腔注射l-t4(6μg/100g體重),don組大鼠在飲用水中加入0.005%多奈哌齊,而t4+don組上述兩項(xiàng)措施同時進(jìn)行。同時,沒有給予l-t4的3組大鼠(con、hypo、don)每日腹腔注射相同體積的生理鹽水,干預(yù)時間為2周,每周稱量各組大鼠的體重,根據(jù)其結(jié)果調(diào)整給藥劑量。造模結(jié)束稱量體重后,所有大鼠被麻醉并留取腹主動脈血樣和海馬組織用作下一步實(shí)驗(yàn)。采用放射免疫法進(jìn)行大鼠血清t3、t4水平測定;運(yùn)用透射電子顯微鏡(tem)技術(shù)觀察各組大鼠海馬突觸超微結(jié)構(gòu);進(jìn)行westernblot和實(shí)時定量rt-pcr實(shí)驗(yàn)分析各組大鼠海馬syt-1和snap-25的蛋白質(zhì)和mrna表達(dá)水平。結(jié)果:1.體重變化:造模前各組大鼠體重水平無明顯差異(p0.05)。造模結(jié)束后,con組大鼠體重較造模前增加了87.9%,而hypo組、t4組、don組及t4+don聯(lián)合治療組大鼠體重與造模前相比分別增加了36.7%、59.4%、33.2%和58.5%。相比于con組,其余各組大鼠體重較低,尤其是hypo組和don組,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。2.甲狀腺激素水平:血清放射免疫測定顯示,與con組比較,hypo組大鼠血清t3(0.23±0.04vs0.42±0.07nmol/l)及t4(22.84±2.50vs75.25±5.89nmol/l)水平明顯減低(p0.01),don組t3(0.22±0.05vs0.42±0.07nmol/l)及t4(21.79±2.84vs75.25±5.89nmol/l)水平也明顯低于對照組(p0.01),而t4治療組和t4+don聯(lián)合治療組血清t3、t4水平與con組接近,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.海馬突觸超微結(jié)構(gòu):透射電子顯微鏡(TEM)觀察顯示CON組突觸前膜、突觸間隙、突觸后膜三層結(jié)構(gòu)清晰,特化帶明顯,突觸囊泡含量豐富,可見清亮型和致密芯型囊泡,而Hypo組海馬突觸前、后膜融合,突觸囊泡數(shù)量明顯減少,幾乎不見清亮型突觸囊泡。上述損傷在T4或DON單藥治療組有所改善,T4+DON聯(lián)合治療組表現(xiàn)最接近CON組。4.Syt-1和SNAP-25表達(dá)水平:Western blo分析結(jié)果顯示Hypo組海馬syt-1蛋白表達(dá)水平與CON組比較顯著減少52.3%(P0.01),SNAP-25蛋白表達(dá)水平比CON組顯著增加57.6%(P0.01)。實(shí)時定量RT-PCR結(jié)果顯示Hypo組syt-1 mRNA表達(dá)水平顯著降低54.2%(P0.01),而SNAP-25 mRNA表達(dá)水平在Hypo組及DON治療組較CON組分別增加了36.7%和32.5%(P=0.025,0.029)。上述突觸蛋白表達(dá)改變在T4治療后得到部分恢復(fù),而T4聯(lián)合DON治療后其表達(dá)恢復(fù)至CON組水平。結(jié)論:成年期甲減可能導(dǎo)致海馬突觸超微結(jié)構(gòu)損傷,突觸蛋白syt-1表達(dá)下調(diào)、SNAP-25表達(dá)上調(diào),甲狀腺素聯(lián)合多奈哌齊治療可以修復(fù)上述損傷,其作用比單藥治療更好。背景:大腦是甲狀腺激素(TH)作用的重要靶器官之一。眾所周知TH對胎兒期及新生兒期大腦的成熟和功能完善至關(guān)重要,在孕期母體碘攝入不足或甲狀腺激素缺乏會導(dǎo)致胎兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)改變?nèi)绱粜〔『途癜l(fā)育遲緩。同時,也有越來越多的研究證據(jù)表明甲狀腺激素對成年期大腦同樣具有非常重要的活性作用,特別是與認(rèn)知和情感相關(guān)的解剖區(qū)域,比如海馬。成年期甲狀腺激素缺乏可以導(dǎo)致大鼠海馬及其他腦區(qū)細(xì)胞數(shù)量、結(jié)構(gòu)和功能均發(fā)生改變;在人類,成年期甲減可以導(dǎo)致某些認(rèn)知及情感功能異常,包括記憶、注意力、語言、執(zhí)行功能和心理運(yùn)動速度、抑郁、焦慮等。左甲狀腺素(L-T4)替代治療是治療甲減的傳統(tǒng)方法,以血清甲狀腺激素和促甲狀腺激素(TSH)恢復(fù)正常為治療達(dá)標(biāo)。但是,L-T4治療后甲減患者是否還有認(rèn)知或情感缺陷一直以來仍存在爭論,一些研究顯示L-T4替代治療能夠完全恢復(fù)甲減所致的認(rèn)知及情緒損害,但是也有許多研究者發(fā)現(xiàn)部分L-T4治療后患者盡管血清甲狀腺激素和TSH恢復(fù)到正常水平,仍主訴有甲減相關(guān)癥狀比如疲勞、認(rèn)知損害和情緒紊亂等。目的:在本研究中,我們通過認(rèn)知和情緒量表評估L-T4治療后的甲減患者的認(rèn)知及情緒狀態(tài),觀察其與正常健康對照組相比是否仍存在異常,進(jìn)而探討L-T4治療對甲減患者認(rèn)知損害及情緒紊亂的作用。方法:通過詢問病史、體格檢查和實(shí)驗(yàn)室檢查結(jié)果了解受試者一般健康狀態(tài)、藥物使用情況、甲狀腺功能等,篩選符合入組條件的研究對象。最終納入兩組研究對象:1.甲減治療組:30名女性(20-45歲),均患有原發(fā)性甲減,接受穩(wěn)定劑量的L-T4單藥替代治療至少3個月。2.對照組:30名女性(22-46歲),無甲狀腺疾病史,體格檢查無甲狀腺腫大,不接受甲狀腺激素治療,血清甲狀腺激素及TSH水平正常。所有受試者均進(jìn)行以下測試:簡易精神狀態(tài)檢查(MMSE)、抑郁自評量表(SDS)、焦慮自評量表(SAS),比較兩組間各個量表的分值。結(jié)果:甲減治療組和對照組在年齡、文化程度、體重指數(shù)方面均匹配。所有個體TSH水平均在正常范圍,但是甲減治療組平均TSH水平高于對照組(2.81±0.42vs1.76±0.38m IU/L,P0.05)。兩組間血清f T3、f T4水平無明顯差異。甲減治療組大部分患者甲狀腺過氧化物酶抗體(TPOAb)陽性(23/30),遠(yuǎn)多于對照組(1/30)。兩組間MMSE分值無顯著性差異(28.88±1.02vs29.36±1.21,P0.05);但與對照組相比,甲減治療組SDS(48.01±4.66vs32.18±2.83,P0.01)、SAS(50.50±5.15vs30.36±3.72,P0.01)評分較高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,結(jié)論:L-T4治療后甲減患者仍存在情緒紊亂,而一般認(rèn)知功能正常。甲減患者可能需要更精確的L-T4替代劑量或聯(lián)合其他藥物治療,從而使中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能損害得到更好的恢復(fù)。
【圖文】：

電鏡觀察各組大鼠海馬內(nèi)突觸超微結(jié)構(gòu)×40000A:對照組；B:甲減組；C:T4治療組；D:多奈哌齊治療組；E:聯(lián)合治療組；▲：突觸結(jié)構(gòu)；↑：突觸囊泡

Westernblot分析各組大鼠海馬syt-1（圖A、C）和SNAP-25（圖B、D）蛋白表達(dá)水平與對照組相比，*P<0.05,**P<0.01
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R581.2

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本文編號：2549186