【摘要】：研究目的： 本研究通過去卵巢小鼠模型和雌激素受體表達(dá)陽性的MCF-7細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn),探討五加生化膠囊類雌激素樣作用及其發(fā)揮作用的有效用藥部位,為五加生化膠囊替代雌激素治療圍絕經(jīng)期綜合癥提供依據(jù)。 研究方法： 1.五加生化膠囊粉對(duì)成熟去卵巢小鼠的影響：選取12周齡的昆明種雌性小鼠60只,隨機(jī)分為假手術(shù)組、模型組、五加生化低劑量組(3.120g/kg)、五加生化高劑量組(4.992g/kg)、乙烯雌酚組(0.325mg/kg),每組12只,乙醚麻醉,行雙側(cè)卵巢摘除術(shù)(假手術(shù)組只切除卵巢附近的脂肪,不切除卵巢)。各組灌胃給藥,每日一次,假手術(shù)組及模型組按體重給予相應(yīng)體積的生理鹽水,所有動(dòng)物均在同等條件下進(jìn)食、飲水,連續(xù)給藥四周。期間觀察各組小鼠動(dòng)情周期情況；于末次給藥兩小時(shí)后,摘除眼球取血,離心取上清,分別測(cè)定血清中E2、FSH、TC、TG含量；迅速剝離小鼠子宮及腎上腺稱重,計(jì)算子宮及腎上腺的臟器指數(shù),并將子宮標(biāo)本固定,HE常規(guī)病理切片染色法觀察子宮體積、宮腔形態(tài)、腺體數(shù)量等。 2.五加生化膠囊65%乙醇提取物對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的影響：用D-101型大孔樹脂柱將五加生化膠囊65%乙醇提取物分離為水洗脫部位、20%乙醇洗脫部位、40%乙醇洗脫部位、60%乙醇洗脫部位,用培養(yǎng)液將各洗脫部位分別配制成10mg/ml、1mg/ml、0.1mg/ml及0.01ng/ml四個(gè)濃度,設(shè)空白對(duì)照組、五加生化組及E2陽性組。將MCF-7細(xì)胞接種于96孔板,給藥繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)后,進(jìn)行MTT顯色反應(yīng),于酶標(biāo)儀(BIO-TEK)上490nm處測(cè)定各孔光吸收值OD(OD與活細(xì)胞數(shù)量成正比),并進(jìn)行三次獨(dú)立重復(fù)實(shí)驗(yàn),結(jié)果以三次獨(dú)立重復(fù)試驗(yàn)平均值為準(zhǔn)。 研究結(jié)果： 1.對(duì)成熟去卵巢小鼠的影響 與假手術(shù)組比較,模型組小鼠去除卵巢后,連續(xù)5日的動(dòng)情周期消失,一直處于間情期,子宮萎縮,重量減輕,腺體數(shù)量減少,且血清E2、TG含量降低,FSH、TC含量升高。 與模型組比較,五加生化高、低劑量組及乙烯雌酚組均可恢復(fù)去卵巢小鼠的動(dòng)情周期,拮抗小鼠子宮萎縮,增加子宮重量；子宮病理切片HE染色顯示小鼠子宮內(nèi)膜變厚,細(xì)胞間隙增大,腺體數(shù)量增多且腺腔擴(kuò)大,其中部分充滿了紅色分泌物(嗜酸性物質(zhì))；對(duì)去卵巢小鼠腎上腺重量有溫和的增加作用,但除乙烯雌酚組外其他各劑量組之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；ELISA試劑盒檢測(cè)發(fā)現(xiàn),五加生化兩個(gè)劑量組均能顯著增加血清中E2含量,促進(jìn)雌激素分泌,明顯降低FSH的含量,拮抗促卵泡生成素分泌,且高劑量組可以顯著降低TC含量,并明顯升高TG含量,而低劑量組對(duì)小鼠血清中TC、TG的含量與模型組相比,無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 2.對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的影響： 與空白對(duì)照組比較,在0.01mg/ml濃度時(shí),五加生化膠囊提取物各脫部位對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖無影響；在0.1mg/ml濃度時(shí),水洗脫部位、20%乙醇洗脫部位及60%乙醇洗脫部位對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖均無影響,而40%乙醇洗脫部位可明顯促進(jìn)MCF-7細(xì)胞增殖；在1mg/ml濃度時(shí),20%、40%及60%乙醇洗脫部位均可明顯促進(jìn)MCF-7細(xì)胞增殖,且以40%乙醇洗脫部位對(duì)MCF-7細(xì)胞的增殖作用最強(qiáng),但仍弱于E2陽性組；在10mg/ml藥物濃度時(shí),五加生化膠囊提取物各洗脫部位對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖均具有抑制作用,其對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)產(chǎn)生了毒副作用。綜上,五加生化膠囊40%乙醇洗脫部位植物雌激素活性最強(qiáng),可能是該藥發(fā)揮雌激素樣作用的主要有效部位。 結(jié)論： 1.五加生化膠囊具有明顯的類雌激素樣作用,可以拮抗小鼠子宮萎縮,增加小鼠子宮重量,調(diào)節(jié)去卵巢小鼠血清中雌二醇、FSH等激素含量,同時(shí)對(duì)血脂代謝紊亂有一定的改善作用。 2.五加生化膠囊40%乙醇大孔樹脂洗脫部位能顯著促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的增殖,是五加生化膠囊發(fā)揮植物雌激素樣作用的有效部位。
【學(xué)位授予單位】：黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R285.5

【參考文獻(xiàn)】

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