【摘要】：研究背景與目的：急性下肢缺血(Acute limb ischemia, ALI)是下肢動脈因各種原因?qū)Ч芮坏耐蝗华M窄或閉塞,為普通外科危重急癥,一直是血管外科具有挑戰(zhàn)性的問題,其起病急劇,病情發(fā)展迅速,及時、快速復流是治療的最終目標,若因各種原因錯失最佳治療時機,則會導致肢體不可逆的損傷、不僅有很高的截肢致殘率,甚至可危及生命。這在很大程度上與恢復血流后再灌注損傷相關(guān)。如何干預下肢缺血再灌注損傷是近半個世紀以來基礎(chǔ)與臨床的研究熱點。目前治療主要集中在缺血復流后這一階段,對于缺血后復流前這一窗口階段,缺乏有效干預手段,目前研究仍主要停留在基礎(chǔ)及前臨床階段,臨床應用研究方興未艾�？刂菩栽俟嗔魍ㄟ^調(diào)節(jié)初始灌流的條件實現(xiàn)精準控制,為解決這一棘手臨床問題打開一扇新的大門。已有研究表明機器灌流(Machine Perfusion,MP)通過對缺血后初始灌流期進行干預,可以顯著降低下肢缺血再灌注損傷,具有巨大潛力來提高臨床療效。本研究的目的是圍繞干預復流前這一時間窗,利用研發(fā)的灌流機器建立下肢缺血灌流模型,進而探究機器灌流對離體缺血下肢和在體缺血下肢的保護作用。研究方法：第一部分基于研發(fā)的灌流機器,建立動物離體和在體下肢缺血灌流模型,后進行灌流取灌流液對CK、CKMB、LDH、GLU等指標進行檢測。第二部分對大鼠和家豬進行離體下肢灌流實驗。手術(shù)切除下肢,將離體下肢分為機器灌流組(MP)與靜態(tài)冷保存組(SCS),每組5只,機器灌流組在一定流速和壓力保護模式下進行機器灌流3h；靜態(tài)冷保存組靜態(tài)保存3h。分別取0h、1h、3h灌流液,3h后取材,后對血清及灌流液進行CK、CKMB、GLU、LDH等指標進行檢測,并對干濕重比D/W和MTT肌肉活力進行比較,檢測MDA等指標以檢測體內(nèi)氧化／抗氧化系統(tǒng)失衡程度及MP灌流對其的干預作用。第三部分對大鼠在體缺血下肢進行灌流實驗。手術(shù)麻醉大鼠,誘導缺血3h,期間經(jīng)插管對缺血下肢實行在體機器灌流,灌流速度為1rpm,期間取灌流液,缺血3h后結(jié)束,恢復3h。后取材,對血清及灌流液進行CK、CKMB、GLU、LDH等指標檢測,并對干濕重比D/W和MTT肌肉活力進行比較,檢測、MDA等以評價體內(nèi)氧化／抗氧化系統(tǒng)失衡程度及MP灌流對其的干預作用。后對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析,p0.05為有顯著性差異。結(jié)果：(1)基于研發(fā)的灌流機器,成功建立了一種離體和在體缺血下肢灌流模型,灌流液的CK、CKMB、LDH、GLU等指標結(jié)果顯示MP模型切實可行,具有相對穩(wěn)定性。(2)離體大鼠下肢灌流實驗結(jié)果顯示灌流組MP在3h取得的灌流液葡萄糖水平、LDH水平、CKMB水平顯著降低(P0.05); MTT結(jié)果顯示MP組織活力顯著高于SCS (P0.05);離體家豬下肢灌流實驗結(jié)果顯示MP組的MTT肌肉組織活力顯著高于SCS組；MP組D/W比例明顯高于SCS組；HE結(jié)果顯示機器灌注能干預保護缺血肌肉組織。(3)機器干預大鼠在體急性缺血再灌注損傷,發(fā)現(xiàn)經(jīng)機器灌流后,經(jīng)右下肢缺血經(jīng)機器灌流的灌流液中在灌流1h內(nèi)GLU、LDH、CK、CKMB逐漸下降,在20min至40min下降明顯,而灌流液的鈉離子、氯離子、鉀離子無明顯變化。MP組MDA水平較對照組顯著下降；對下肢缺血經(jīng)機器灌流后的大鼠進行血液檢測,發(fā)現(xiàn)血液的LDH水平顯著降低(P0.05), CKMB下降。結(jié)論：(1)本課題成功建立大鼠離體、家豬離體下肢缺血模型,并在此基礎(chǔ)上建立大鼠在體急性缺血下肢模型,且該模型切實可行,這將在今后進一步探討下肢缺血再灌注損傷的基礎(chǔ)及轉(zhuǎn)化研究發(fā)展中起到重要作用。(2)通過進一步研究,本課題發(fā)現(xiàn)機器灌流方法可實現(xiàn)精準參數(shù)控制,能成功干預離體下肢缺血,減少缺血再灌注損傷。因此,機器灌流成為推動發(fā)展下肢缺血再灌注損傷治療的新策略。(3)本課題相關(guān)機制研究證實機器灌流能進一步抑制氧自由基損傷,減小炎癥細胞反應和細胞凋亡,本課題對后期進一步深入機器灌流對下肢缺血保護的相關(guān)機制研究起重要作用。(4)如何實現(xiàn)在體下肢缺血灌流實驗成為前臨床基礎(chǔ)實驗研究的重點,本課題研究顯示機器灌流能成功干預動物下肢缺血再灌注損傷。因此,本課題的研究將為實現(xiàn)臨床轉(zhuǎn)化提供理論依據(jù),并推動未來臨床應用轉(zhuǎn)化。
【圖文】：

圖３急性下肢缺血再灌注損傷干預機器結(jié)構(gòu)圖逡逑鼠離體缺血下肢灌流模型逡逑成功建立了大鼠離體缺血下肢灌流模型，麻醉后沿大鼠腹巧口，切開皮膚后，對皮下脂肪組織進行分離，后精細分經(jīng)，使股動靜脈充分暴露，利用一次性靜脈留置針對鼠股動靜脈較細，術(shù)中可利用顯微鏡進行操作插管，插管，用生理鹽水對股動脈灌流進行肝素化，抗凝保護。沿腹股溝完整離斷雙側(cè)大鼠下肢。在ＩｍＬ／ｍｉｎ、３０ｍｍＨ冰浴條件下對離體缺血模型進行灌流，可見血流通暢，到灌流液；ＬＤＨ、ＣＫ、ＣＫＭＢ指標結(jié)果顯示在灌流過程

灌流條件為流量５０ｍＬ／ｍｉｎ、壓力保護８０ｍｍＨｇ、４°Ｃ冰浴，灌流過程穩(wěn)定，，灌流液逡逑為腎寶液５００ｍＬ，灌流期間可見持續(xù)灌出的灌流液，ＣＫ、ＣＫＭＢ、ＬＤＨ、ＧＬＵ等逡逑結(jié)果顯示（圖５），相對于ＳＣＳ，ＭＰ灌流模型在灌流過程中明顯改善，證明該缺逡逑１０逡逑
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R654.4

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本文編號：2541072