【摘要】：目的： 本實驗以3月齡的雌性大鼠為研究對象,探討補腎法、健脾法、調(diào)肝法分別對育齡鼠和去勢雌性大鼠ER及衰老因子的影響,探討金代名醫(yī)劉完素在《素問病機氣宜保命集.婦人胎產(chǎn)論》中提出“婦人童幼天癸未行之間,皆屬少陰；天癸已行,皆從厥陰論之；天癸已絕,乃屬太陰經(jīng)也”的理論內(nèi)涵。從太陰脾經(jīng)、少陰腎經(jīng)及厥陰肝經(jīng)等治法的角度探討對更年期大鼠衰老的影響和治療效果。為臨床治療女性更年期提供科學依據(jù)。 方法： 80天的雌性大鼠,體重在108-250g之間,適應性喂養(yǎng)10天后,區(qū)組隨機分為空白組、假手術組、去勢模型組、去勢健脾組、去勢補腎組、去勢調(diào)肝組。給藥組在手術前先給藥1個月,給藥濃度為健脾組：歸脾丸,0.4g/ml；補腎組：更年期補腎口服液,4.8g/ml；調(diào)肝組：養(yǎng)陰疏肝膠囊0.4g/ml。其它組予以0.9%的生理鹽水,每日一次。然后對給藥的3組(健脾組、補腎組、調(diào)肝組)和去勢模型組進行去卵巢手術,假手術組僅切除卵巢周圍的脂肪組織。在去勢后10天給藥組繼續(xù)按上法藥物灌胃2個月。末次給藥24小時后0.35%的水合氯醛過量麻醉處死。腹主動脈采血,3000r/min離心血清10min,檢測血清中的MDA(丙二醛)、H202(過氧化氫)、ROS(活性氧簇),SOD(超氧化物歧化酶)、CAT(過氧化物酶)、GPX(谷胱甘肽過氧化物酶)、5-HT(5-羥色胺)、DA(多巴胺)及腸中的衰老基因P21、P16、cyclinDl(細胞周期依賴性蛋白D)及ER(雌激素受體)的表達。檢測大鼠子宮、下丘腦、海馬、垂體、脾、胸腺、腎上腺的體重指數(shù)。 結果： 1.模型組子宮、下丘腦、垂體、腎上腺的體重指數(shù)在去勢后均降低。脾的體重指數(shù)隨著年齡的衰老而降低,胸腺的體重指數(shù)去勢后升高。 (1)子宮體重指數(shù)：與空白組、假手術組比較,模型組子宮體重指數(shù)降低(P0.05)；補腎法可以升高下降的子宮體重指數(shù)(P0.05),與模型組比較,健脾組、調(diào)肝組無顯著性差異(P0.05)。 (2)海馬體重指數(shù)：假手術組、健脾組、調(diào)肝組、補腎組、模型組組間比較,無顯著性差異(P0.05)。 (3)下丘腦體重指數(shù)：與空白組、假手術組比較,模型組下丘腦體重指數(shù)降低(P0.01)；與模型組比較,脾法、補腎法可以升高下降的下丘腦體重指數(shù)(P0.05)。調(diào)肝組則無顯著性差異(P0.05)。 (4)垂體體重指數(shù)：與空白組、假手術組比較,模型組垂體體重指數(shù)明顯降低(P0.01)；與模型組比較,健脾法、調(diào)肝法、補腎法可以升高下降的垂體體重指數(shù)(P0.05)；三種中藥干預組對垂體體重指數(shù)的升高明顯低于空白組(P0.01)； (5)腎上腺體重指數(shù)：與空白組、假手術組比較,模型組的腎上腺體重指數(shù)無顯著性差異(P0.05),結合均值,腎上腺的體重指數(shù)是降低的；與模型組比較,健脾組、調(diào)肝組的腎上腺體重指數(shù)顯著增高(P0.05),補腎組無顯著性差異(P0.05)；與空白組比較,健脾組的腎上腺體重指數(shù)顯著升高(P0.05),而調(diào)肝組、補腎組則無顯著性差異(P0.05)；三組中藥干預組組間比較,健脾組的腎上腺體重指數(shù)高于補腎組(P0.05)。 (6)脾體重指數(shù)：與空白組、假手術組比較,模型組的脾體重指數(shù)無顯著性差異(P0.05)；與模型組比較,健脾組、調(diào)肝組、補腎組的脾體重指數(shù)升高(P0.05),與空白組比較,健脾組、調(diào)肝組、補腎組的脾體重指數(shù)顯著升高(P0.05)；三組中藥干預組組間進行比較無顯著性差異(P0.05)。 (7)胸腺體重指數(shù)：與空白組、假手術組比較,模型組的胸腺體重指數(shù)明顯升高(P0.01)；與模型組比較,健脾組的胸腺體重指數(shù)降低(P0.05),調(diào)肝組的胸腺體重指數(shù)明顯降低(P0.01),補腎組大鼠胸腺體重指數(shù)則無顯著性差異(P0.05)。三組中藥干預組組間比較,健脾組、調(diào)肝組的胸腺體重指數(shù)明顯低于補腎組(P0.01)。與空白組比較,健脾組、調(diào)肝組、補腎組的胸腺體重指數(shù)明顯偏高(P0.01)。 2.衰老因子H2O2, MDA, ROS及抗衰老因子SOD、CAT、GPX在去勢后大鼠體內(nèi)的變化 (1)衰老因子方面： ①H202：與空白組、假手術組比較,模型組中的血清中H202含量偏高(P0.05),與模型組比較,健脾組、調(diào)肝組、補腎組血清中H202的含量降低(P0.05)。與空白組比較,健脾組、調(diào)肝組、補腎組血清中H202的含量無顯著性差異(P0.05)。 ②MDA：與空白組、假手術組比較,模型組血清中MDA的含量明顯升高(P0.01)。與模型組比較,健脾組、補腎組血清中的MDA含量無顯著性差異(P0.05),調(diào)肝組血清中的MDA含量明顯低于模型組(P0.05)。與空白組比較,健脾組、調(diào)肝組、補腎組血清中MDA的含量無顯著性差異(P0.05)。 ③ROS：與空白組比較,模型組中的ROS的活力偏高(P0.05),與模型組比較,健脾組、調(diào)肝組ROS的活力降低(P0.05)。與空白組比較,健脾組、調(diào)肝組血清中H202的含量無顯著性差異(P0.05)。 (2)抗衰老因子方面：SOD、GPX的活力在去勢后降低。 ①SOD：與空白組、假手術組比較,模型組血清中SOD的活力無顯著性差異(P0.05),結合均值,模型組的SOD的活力在降低。與模型組比較,健脾組、補腎組血清中SOD的活力明顯升高(P0.01),調(diào)肝組大鼠血清中SOD的活力則無顯著性差異。與空白組比較,健脾組、補腎組血清中的含量無顯著性差異(P0.05)。 ②CAT：空白組、假手術組、補腎組、調(diào)肝組、健脾組、模型組組間比較,差異無統(tǒng)計學意義(PO.05)。 ③GPX：與空白組、假手術組比較,模型組大鼠血清中GPX的活力明顯降低(P0.01),與模型組比較,調(diào)肝組、補腎組大鼠血清中GPX的活力升高(P0.05)。健脾組則無顯著性差異(P0.05)。與空白組比較,調(diào)肝組、補腎組大鼠血清中GPX的活力無顯著性差異(P0.05),健脾組大鼠血清中GPX的活力明顯低于空白組(P0.01)。三組中藥干預組組間比較,補腎組血清中GPX的活力高于健脾組(P0.05)。 3.神經(jīng)遞質5-HT及DA方面 (1)5-HT：與空白組、假手術組比較,模型組大鼠血清中5-HT的含量降低,與模型組比較,健脾組大鼠血清中5-HT的含量明顯增高(P0.01),調(diào)肝組、補腎組血清中5-HT的含量則無顯著性差異(P0.05)。與空白組比較,健脾組大鼠血清中5-HT的含量則無顯著性差異(P0.05),調(diào)肝組、補腎組大鼠血清中的5-HT的含量則明顯降低(P0.01)。三組中藥干預組組間比較,健脾組大鼠血清中5-HT的含量則明顯高于調(diào)肝組、補腎組(P0.01) (2)DA：空白組、假手術組、健脾組、調(diào)肝組、補腎組、模型組組間比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05)。 4.小腸中衰老相關基因及ER方面 (1)衰老相關基因CyclinD1、P16、P21:對于CyclinD1的表達,與模型組比較,調(diào)肝組CyclinD1的表達升高(P0.05),健脾組、補腎組則無顯著性差異(P0.05)。對于P16的表達,三組中藥干預組與模型組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),但結合均值,P16的表達在模型組表達最高,在三種中藥組干預的作用下有下調(diào)的趨勢。對于P21的表達,與模型組比較,健脾組、補腎組P21的表達顯著降低(P0.01),調(diào)肝組P21的表達升高(P0.01),三組中藥干預組組間比較,補腎組、健脾組P21的表達低于調(diào)肝組(P0.05)。 (2)ER基因：對于ER的表達,三組中藥干預組與模型組比較,差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),結合其均值ER在模型組表達最高,在中藥組的干預下,ER的表達下調(diào)的趨勢。 結論： 1.健脾法對去勢大鼠的衰老狀態(tài)的作用：健脾法可以改善下降的下丘腦、垂體、腎上腺的體重指數(shù),還可增加脾的體重指數(shù),控制胸腺體重指數(shù)的增加,增強機體的免疫力；其對腎上腺、胸腺的體重指數(shù)的效果要優(yōu)于補腎法、調(diào)肝法；健脾法通過降低衰老因子H202和ROS的活力,下調(diào)衰老基因P21,同時升高SOD的活力起到抗衰老的作用,還可以調(diào)節(jié)血清中神經(jīng)遞質5-HT的含量。 2.補腎法對去勢大鼠的衰老狀態(tài)的作用：補腎法可以改善下降的子宮、下丘腦、垂體的體重指數(shù),可以升高脾的體重指數(shù)。還可以降低衰老因子H202的含量,降低衰老基因P21的表達,增強抗衰老因子GPX、SOD的活力起到延緩衰老的作用。 3.調(diào)肝法對去勢大鼠的衰老狀態(tài)的作用：調(diào)肝法可以改善下降的垂體、腎上腺體重指數(shù),還可升高脾的體重指數(shù),控制胸腺的異常肥大,還可以降低衰老因子MDA、 ROS、H2O2的含量個,增強抗衰老因子GPX的活力,上調(diào)細胞周期正性調(diào)控因子CyclinD1起到抗衰的作用。 綜上,健脾法、調(diào)肝法、補腎法對于去勢大鼠衰老狀態(tài)的均有改善的作用,但作用層次及著眼點不同。其中健脾法的作用層次有5個,著眼點有腎上腺、胸腺、神經(jīng)遞質5-HT,衰老基因P21。補腎法的作用層次有4個,著眼點有抗衰老因子GPX和衰老基因P21；調(diào)肝法作用層次有4個,著眼點在于上調(diào)細胞周期正性調(diào)控因子CyclinD1的表達。因此其三種方法中健脾法最好,其次是補腎法,最后是調(diào)肝法。本實驗的結果初步探討劉完素的“天癸竭,乃屬太陰經(jīng)也”的理論,為豐富臨床治療更年期的方案提供了的初步的實驗依據(jù)。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R285.5

【參考文獻】

相關期刊論文 前10條

1 魏升,陳學堂,李蘭周,李富旺;更年期綜合征從脾論治[J];新中醫(yī);1991年02期

2 孫冰;;知柏地黃丸、歸脾丸聯(lián)合行為干預治療更年期綜合征臨床研究[J];山東中醫(yī)藥大學學報;2006年01期

3 謝俊霞,劉彬;雌激素對電刺激誘發(fā)杏仁核多巴胺釋放的影響[J];生理學報;2001年03期

4 江明,李慶陽,鄭旭;老年脾腎虛與LPO關系研究[J];陜西中醫(yī)學院學報;1999年05期

5 王長海,李鋒,行利,張仲海;二仙湯治療更年期綜合征50例[J];陜西中醫(yī);1997年06期

6 孫艷紅,金若敏;女性更年期綜合征動物模型制備的研究進展[J];時珍國醫(yī)國藥;2005年07期

7 袁靜,章復清,王蘭,陳全珠,劉先華,候正明;養(yǎng)血調(diào)肝方抗衰老作用的實驗研究[J];中國中醫(yī)藥科技;2003年03期

8 黃旭春;王小云;;王小云教授宣肺疏肝法治療更年期郁證經(jīng)驗簡介[J];新中醫(yī);2012年08期

9 辛意;王天芳;杜彩鳳;李力;任婕;金哲;趙紅;經(jīng)燕;鄒小娟;劉宏奇;陳瑩;王麗娜;劉瑞芬;王慶國;;基于經(jīng)驗辨證的更年期綜合征圍絕經(jīng)期和絕經(jīng)后期常見證候及證候要素分布[J];中西醫(yī)結合學報;2009年06期

10 劉利新;王菊莉;;二仙湯合二至丸治療圍絕經(jīng)期綜合征103例臨床觀察[J];中國社區(qū)醫(yī)師;2008年09期

相關博士學位論文 前2條

1 文梅;蒙醫(yī)三穴灸療對模型大鼠衰老因子影響的實驗研究[D];北京中醫(yī)藥大學;2013年

2 陳玲;養(yǎng)陰舒肝膠囊對卵巢功能低下影響的臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學;2013年

，

本文編號：2496968