【摘要】：研究背景骨組織是人體內(nèi)較穩(wěn)定的礦化結(jié)締組織結(jié)構(gòu),其中含有4種活性細(xì)胞成分：成骨細(xì)胞(osteoblast)、破骨細(xì)胞(osteoclast)、骨襯細(xì)胞(bone lining cell)及骨細(xì)胞(osteocyte)。盡管在生理特性上其有惰性的一面,骨組織其實是一種具有高度活力的器官,其內(nèi)部一直發(fā)生著成骨細(xì)胞的新骨形成及破骨細(xì)胞的骨吸收的骨重塑(bone remodeling)過程。簡單來說,骨重塑就是新骨替代舊骨的過程。實際上骨重塑是一個高度復(fù)雜及協(xié)調(diào)的循環(huán)過程,主要包括3個連續(xù)卻無法截然分開的階段：(1)破骨細(xì)胞啟動骨吸收；(2)由骨吸收到新骨形成的過渡期；(3)成骨細(xì)胞的新骨形成期。這個過程的發(fā)生有賴于破骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、骨細(xì)胞及骨襯細(xì)胞之間的協(xié)同作用,這4種細(xì)胞共同形成了臨時的解剖結(jié)構(gòu)——基本多細(xì)胞單位(basic multicellular unit, BMU)。有證據(jù)表明,骨細(xì)胞充當(dāng)機(jī)械應(yīng)力感受器(mechanosensor)并參與調(diào)控骨重塑的過程。正常的骨重塑是骨折修復(fù)、骨骼的機(jī)械適應(yīng)性及鈣穩(wěn)態(tài)所不可缺少的過程。另一方面,如骨吸收及骨形成之間的平衡被破壞,將會導(dǎo)致多種骨骼疾病的發(fā)生,如過度骨吸收會導(dǎo)致骨量丟失或骨質(zhì)疏松,相反,如骨形成過度則會發(fā)生骨硬化癥。因此,骨吸收與骨形成間的平衡是至關(guān)重要的,且有賴于局部及全身多種因素如激素、細(xì)胞因子、化學(xué)因子及生物刺激等的協(xié)同效應(yīng)。各種原因造成的骨折愈合障礙(延遲愈合、不愈合等)目前依然是骨折治療術(shù)后最為常見且后果嚴(yán)重的并發(fā)癥,往往需要多次住院及手術(shù)治療,除治療周期的延長外,其預(yù)后往往無法預(yù)料,對病人衛(wèi)生保健系統(tǒng)來說是一種沉重的負(fù)擔(dān),而對骨科學(xué)者來說則是一項嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)。因此,如何預(yù)防及治療這些并發(fā)癥一直是眾多骨科學(xué)者孜孜不倦所研究的重心。在骨不連的治療領(lǐng)域存在著一種“鉆石四邊理念”(Diamond Concept),該理念強(qiáng)調(diào)在治療骨不連時應(yīng)同時予以生長因子、支架及成骨細(xì)胞,并在需要的時候更換骨折固定方式。我們認(rèn)為在這理念中生長因子的范疇?wèi)?yīng)該是廣義的,不單指生長因子(growth factor),還應(yīng)包括激素、藥物等一切有生物效應(yīng)的物質(zhì),而在這當(dāng)中較有研究前景的還包括他汀類藥物(statins)。他汀類是臨床上治療高膽固醇血癥最主要的藥物,然而,除降脂作用外,他汀類藥物尚被發(fā)現(xiàn)可發(fā)揮一系列如促進(jìn)骨再生、抗氧化、抗血栓形成及免疫抑制等生物學(xué)效應(yīng)。在這些效應(yīng)中,促進(jìn)骨再生這方面最受研究者的關(guān)注,且在這方面研究得最多的一種他汀類藥物是辛伐他汀(simvastatin)。有足夠的證據(jù)表明,辛伐他汀通過促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖分化、抑制成骨細(xì)胞凋亡及抑制破骨細(xì)胞形成及激活等途徑發(fā)揮促進(jìn)骨再生效應(yīng)。然而,辛伐他汀對骨組織內(nèi)數(shù)目最多的細(xì)胞類型——骨細(xì)胞的作用卻鮮有報道。骨細(xì)胞是骨骼中重要的感受器、整合器及傳感器,一直以來被認(rèn)為是一種較不活躍的細(xì)胞。然而,有研究結(jié)果表明,骨細(xì)胞會在骨構(gòu)建、代謝性骨病等高骨轉(zhuǎn)換率(bone turnover)狀態(tài)下發(fā)生凋亡。這一發(fā)現(xiàn)使學(xué)者們對骨細(xì)胞重新燃起了研究熱情。近十年來,我們不斷拓寬了對骨細(xì)胞功能的理解水平,最主要的原因是骨細(xì)胞的一些特異性標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn),如牙本質(zhì)基質(zhì)蛋白1(dentin matrix protein 1,DMP1)、骨硬化蛋白(sclerostin)等,使得我們對骨細(xì)胞的生理功能有了更深刻的認(rèn)識。骨硬化蛋白(sclerostin)主要由骨細(xì)胞分泌,是骨形成的重要負(fù)向調(diào)節(jié)因素,主要通過抑制成骨細(xì)胞的增殖分化而抑制骨形成。骨硬化蛋白的表達(dá)受多種因素的調(diào)節(jié),包括機(jī)械應(yīng)力、局部細(xì)胞因子和內(nèi)分泌等因素。眾多實驗研究證實,下調(diào)骨硬化蛋白的表達(dá)可導(dǎo)致骨形成及骨量的增加。在臨床上,骨硬化蛋白的單克隆抗體被用于治療婦女絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥,可顯著降低骨硬化蛋白水平及恢復(fù)骨礦密度。核因子KB受體活化因子配體(receptor activator for nuclear factor-κB ligand, RANKL)是一種Ⅱ型跨膜蛋白,且是腫瘤壞死因子(TNF)超級家族的一員,是目前發(fā)現(xiàn)的唯一具有誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化、發(fā)育及發(fā)揮細(xì)胞效應(yīng)的因子。有研究證明,肢體不負(fù)重會導(dǎo)致增加骨細(xì)胞凋亡,并且會提高RANKL蛋白的表達(dá)水平。此外,骨細(xì)胞是RANKL的主要來源,抑制骨細(xì)胞凋亡可下調(diào)RANKL的表達(dá)。由此看來,骨細(xì)胞更像是骨構(gòu)建(modeling)與重塑(remodeling)過程的“司令細(xì)胞”,通過骨硬化蛋白和RANKL調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞與破骨細(xì)胞的功能。然而,目前為止仍缺乏闡明骨細(xì)胞的凋亡與骨硬化蛋白及RANKL的表達(dá)之間關(guān)系的相關(guān)資料。實驗?zāi)康?、通過動物實驗的方法,并從醫(yī)學(xué)影像學(xué)、組織病理學(xué)、分子生物學(xué)等多個角度,探討辛伐他汀在大鼠脛骨開放截骨模型骨愈合過程中所起的作用,并重點觀察辛伐他汀對骨細(xì)胞凋亡的作用情況,為后續(xù)的研究提供理論依據(jù)。2、通過SD大鼠原代骨細(xì)胞分離培養(yǎng),驗證辛伐他汀、骨細(xì)胞凋亡及骨硬化蛋白、RANKL的表達(dá)之間的關(guān)系,并初步探討這之間可能的分子機(jī)制,從而為該藥物在骨科臨床上的應(yīng)用提供更充分的理論依據(jù)。實驗方法一、動物實驗1、載辛伐他汀克氏針的制備160mg辛伐他汀原料藥溶于由1.5m1乙酸乙酯及100mg PDLLA組成的溶液中,得出濃度為10% W/W的辛伐他汀工作液。將直徑1.Omm、長30mm的克氏針在辛伐他汀工作液中蘸2次,在層流環(huán)境中自然干燥后-20°保存?zhèn)溆谩?、建模及分組。72只雌性SD大鼠隨機(jī)分為辛伐他汀治療組及對照組。采用Christine等報道的方法建立SD大鼠脛骨開放截骨模型,治療組用載藥的克氏針作髓內(nèi)固定物,對照組的固定物則僅含PDLLA涂層。3、影像學(xué)檢查于術(shù)后2周、4周及8周,戊巴比妥鈉麻醉大鼠后,拍攝大鼠右脛骨側(cè)位X線片影,并按照改良Lane-Sandhu X射線評分標(biāo)準(zhǔn)對拍攝所得的X線片進(jìn)行評分。4、組織病理學(xué)檢查于術(shù)后2周、4周、8周用空氣栓塞法處死動物,取出標(biāo)本后依次進(jìn)行脫鈣、脫水、透明、透蠟、包埋等處理,最后將組織塊切成5μM的薄片,并采用HE及番紅O-固綠對組織切片進(jìn)行染色,并于光鏡下觀察結(jié)果。5、Western blot檢測于術(shù)后2周、4周及8周采用western blot技術(shù)檢測2組實驗動物骨痂中骨硬化蛋白及RANKL的蛋白表達(dá)水平。6、Real-time PCR檢測采用Real-time PCR檢測術(shù)后第2、4、8周2組實驗動物骨痂中Bcl-2、caspase-3、sclerostin及RANKL mRNA的表達(dá)水平。RT-PCR按照TaKaRa RNA PCR Kit(AMV)Ver.3.0試劑盒說明書進(jìn)行。7、免疫組織化學(xué)染色術(shù)后4周時,采用免疫組織化學(xué)染色法檢測組織中caspase-3、sclerostin、 α-SMA蛋白的表達(dá)量。8、TUNEL原位細(xì)胞凋亡檢測采用TUNEL原位細(xì)胞凋亡檢測法檢測術(shù)后第4周時2組實驗動物標(biāo)本中骨細(xì)胞的凋亡情況,實驗操作按生產(chǎn)商提供的說明書進(jìn)行。9、生物力學(xué)檢測在術(shù)后第8周,采用三點彎曲試驗對2組的脛骨標(biāo)本進(jìn)行生物力學(xué)分析,記錄最大載荷并計算出標(biāo)本的彈性模量。所得結(jié)果與同一實驗動物健側(cè)脛骨自我比較,結(jié)果以占對側(cè)百分比的形式表示。二、細(xì)胞實驗1、SD大鼠原代骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)無菌條件下將3只SD乳鼠的長骨及顱骨取出,剔除干凈骨膜及其他附著于骨骼上的軟組織,取Hank's平衡鹽溶液將長骨內(nèi)骨髓組織沖出,然后通過序貫、交替的膠原酶消化及EDTA脫鈣法進(jìn)行骨細(xì)胞的分離。用α-MEM培養(yǎng)基(含5%胎牛血清+5%小牛血清)培養(yǎng)原代骨細(xì)胞,至細(xì)胞長至融合狀態(tài)時進(jìn)行細(xì)胞傳代。本研究使用第5-10代細(xì)胞進(jìn)行實驗。2、骨細(xì)胞的鑒定骨細(xì)胞的鑒定要點有：(1)細(xì)胞外形特點：細(xì)胞外形呈星形或樹枝狀,形態(tài)偏圓偏短,表面有4個以上的突觸并與周圍細(xì)胞形成聯(lián)系；(2)細(xì)胞上清液中堿性磷酸酶測定值較低(與成骨細(xì)胞相比較)；(3)骨鈣蛋白表達(dá)水平較高。3、骨細(xì)胞凋亡模型的建立采用腫瘤壞死因子-α刺激骨細(xì)胞而形成骨細(xì)胞凋亡模型。為了獲得TNF-α的最佳刺激濃度,使用流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度(5、10、20、40ng/ml) TNF-α刺激下骨細(xì)胞的總凋亡率,TNF-α作用時間為24小時。4、骨細(xì)胞凋亡檢測采用TUNEL細(xì)胞凋亡檢測法檢測在不同處理條件下骨細(xì)胞的凋亡情況,檢測操作按產(chǎn)品說明書進(jìn)行,熒光顯微鏡下觀察,激發(fā)波長為460nm,發(fā)射波長為545nm。5、活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)檢測采用細(xì)胞活性氧簇檢測試劑盒(Deep Red Fluorescence)檢測骨細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的活性氧簇,實驗步驟按產(chǎn)品說明書進(jìn)行,采用熒光酶標(biāo)儀檢測各孔的熒光信號強(qiáng)弱,熒光酶標(biāo)儀激發(fā)波長為650 nm,發(fā)射波長為675 nm。未處理組細(xì)胞用于設(shè)定背景熒光強(qiáng)度。6、Real-time PCR采用Real-time PCR檢測骨細(xì)胞中IL-1α、TNF-α、NF-κB mRNA的表達(dá)水平。RT-PCR按照TaKaRa RNA PCR Kit(AMV) Ver.3.0試劑盒說明書進(jìn)行。7、Western blot檢測采用western blot檢測骨細(xì)胞中骨硬化蛋白、RANKL蛋白表達(dá)水平及MAPKs、NF-κB信號通路及相關(guān)凋亡因子(Bax,Bcl-2,caspase-3)在不同條件下的活化情況。實驗結(jié)果一、動物實驗1、影像學(xué)檢查及Lane-Sandhu評分影像學(xué)檢查提示術(shù)后2周2組實驗動物的X線片表現(xiàn)并無明顯差別,均未見明顯骨痂形成。術(shù)后4周、8周辛伐他汀治療組無論從骨痂形成量還是愈合質(zhì)量均優(yōu)于對照組。Lane-Sandhu影像學(xué)評分顯示：術(shù)后2周,實驗組動物的評分為(0.26±0.86)分,對照組為(0.35±1.00)分,統(tǒng)計結(jié)果為P0.05,無統(tǒng)計學(xué)差異。術(shù)后4周,實驗組動物的評分為(4.92±1.44)分,對照組為(3.58±2.06)分,統(tǒng)計結(jié)果為P0.05,且辛伐他汀治療組優(yōu)于對照組。術(shù)后8周,實驗組動物的Lane-Sandhu評分為(7.92±2.53)分,對照組為(5.17±1.94)分,統(tǒng)計結(jié)果為P0.05,故2組動物在術(shù)后4周的Lane-Sandhu評分差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,且治療組優(yōu)于對照組。2、組織病理學(xué)檢查結(jié)果HE染色結(jié)果顯示：術(shù)后第2周時,2組動物脛骨的骨折間隙由炎性纖維組織填充,均未見明顯纖維性骨痂形成。骨折固定術(shù)后4周,2組實驗動物骨折端均可見骨痂形成,實驗組的骨痂形成量較多,且骨痂中可見大量新生血管,纖維骨痂逐漸被軟骨性骨痂取締。骨折內(nèi)固定術(shù)后8周,辛伐他汀組軟骨骨痂周邊連續(xù)不斷為新生骨小梁取代,骨小梁粗細(xì)較均勻,且骨小梁排列亦較術(shù)后4周時整齊,由此可見實驗組硬骨痂已逐漸開始塑形過程。相比之下,對照組軟骨骨痂數(shù)量相對較少,軟骨化骨進(jìn)程緩慢,新生小梁狀骨排列紊亂無序。番紅O-固綠染色結(jié)果顯示2組實驗動物組織的染色結(jié)果顯示,2組中均可見軟骨性骨痂,且辛伐他汀組骨折部位軟骨組織較對照組少,說明其骨折區(qū)軟骨化骨進(jìn)程比對照組快。3、Western blotting檢測結(jié)果Western blotting檢測結(jié)果顯示術(shù)后2周、4周及8周,辛伐他汀處理組實驗動物骨痂中骨硬化蛋白及RANKL的蛋白表達(dá)量均顯著比對照組低；而同一組實驗動物在不同時間期間此兩種蛋白的表達(dá)量亦存在顯著性差異,并呈遞減趨勢。4、Real-time PCR結(jié)果Real-time PCR檢測結(jié)果提示：術(shù)后2周,實驗組caspase-3、sclerostin及RANKL mRNA的表達(dá)水平均低于對照組(p0.05)；實驗組Bcl-2 mRNA的表達(dá)水平較對照顯著升高。術(shù)后4周,實驗組caspase-3、sclerostin及RANKL mRNA的表達(dá)水平依然低于對照組(p0.05),實驗組Bcl-2mRNA的表達(dá)水平依然較對照顯著升高。術(shù)后8周,2組實驗動物caspase-3、sclerostin mRNA水平的比較無顯著性差異,而2組實驗動物Bcl-2 mRNA的表達(dá)水平比較,對照組依然低于實驗組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05),實驗組RANKL mRNA表達(dá)水平較對照組高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.008)。對各指標(biāo)行單因素方差分析后發(fā)現(xiàn),除RANKL外,各指標(biāo)的表達(dá)水平隨時間推移而均有所下降。5、骨細(xì)胞凋亡檢測結(jié)果TUNEL原位細(xì)胞凋亡檢測結(jié)果顯示在骨折術(shù)后第4周時,對照組大鼠組織切片中TUNEL陽性的骨陷窩數(shù)量顯著多于實驗組,經(jīng)統(tǒng)計分析得出二者之間差異存在統(tǒng)計意義(t=3.648,p=0.004)。6、免疫組織化學(xué)染色結(jié)果免疫組化染色結(jié)果顯示,與實驗組相比,對照組實驗動物骨組織中caspase-3及sclerostin的蛋白表達(dá)量顯著增多,兩者差異有統(tǒng)計學(xué)意義。然而,在術(shù)后第4周時對照組大鼠骨痂中的微血管密度卻比實驗組少,且差異存在統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。7、生物力學(xué)測試結(jié)果骨折治療后8周三點彎曲力學(xué)性能檢測結(jié)果顯示,對照組的最大載荷及彈性模量均小于實驗組,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.05)。二、細(xì)胞實驗1、SD大鼠原代骨細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定骨細(xì)胞分離培養(yǎng)初期,可見有少許成骨細(xì)胞及成纖維細(xì)胞共同生長,經(jīng)多次消化、傳代后骨細(xì)胞逐漸純化,形成長勢良好、外形獨特的細(xì)胞系。骨細(xì)胞外形多呈星形或樹枝狀,細(xì)胞表面有多個長突觸,并與周圍細(xì)胞形成聯(lián)系,而成骨細(xì)胞多外形多為梭形、錐形或立方形,細(xì)胞表面突觸少且細(xì)。骨細(xì)胞體型較成骨細(xì)胞小,但更立體。此外,骨細(xì)胞的堿性磷酸酶活性比成骨細(xì)胞低(p0.01),而骨鈣素表達(dá)水平卻顯著高于成骨細(xì)胞(p0.01)。2、最佳TNF-α刺激濃度及辛伐他汀處理濃度流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果示,骨細(xì)胞的總凋亡率隨TNF-α刺激濃度升高而相應(yīng)升高(F=71.57,P0.000)。根據(jù)檢測結(jié)果,本研究最終選用20ng/ml作為TNF-α的刺激濃度。MTT比色法檢測結(jié)果示骨細(xì)胞的活性隨著辛伐他汀刺激的濃度升高而下降(F=57.04,P0.000),根據(jù)結(jié)果,選取10-5 mol/L作為本次實驗辛伐他汀的主要處理濃度。3、ROS檢測結(jié)果骨細(xì)胞內(nèi)活性氧簇檢測結(jié)果顯示,TNF-a顯著刺激ROS的形成(P0.01 vs對照組),而辛伐他汀預(yù)處理則可顯著抑制ROS的形成(P0.01 vs TNF-α處理組)。4、辛伐他汀抑制TNF-α誘導(dǎo)的骨細(xì)胞凋亡TUNEL檢測結(jié)果顯示TNF-α (20ng/ml)刺激顯著誘導(dǎo)骨細(xì)胞發(fā)生凋亡(P0.01 vs對照組)。辛伐他汀預(yù)處理可顯著抑制TNF-α誘導(dǎo)的骨細(xì)胞凋亡(P0.01 vs TNF-α處理組)。此外,流式細(xì)胞術(shù)顯示出相近的結(jié)果,且ROS清除劑NAC對骨細(xì)胞預(yù)處理后同樣顯著抑制骨細(xì)胞凋亡。5、TNF-α誘導(dǎo)骨細(xì)胞上調(diào)sclerostin、RANKL蛋白的表達(dá)Western blot結(jié)果顯示,20ng/ml的TNF-α刺激骨細(xì)胞24 h后,骨細(xì)胞中sclerostin及RANKL蛋白的表達(dá)量顯著高于對照組(P0.01)。辛伐他汀保護(hù)骨細(xì)胞30 min后再使用TNF-α進(jìn)行刺激,辛伐他汀有抑制TNF-α對骨細(xì)胞上調(diào)sclerostin及RANKL蛋白表達(dá)量的效應(yīng),且該抑制效應(yīng)呈濃度依賴性。6、辛伐他汀抑制TNF-α誘導(dǎo)的凋亡相關(guān)因子的活化Western blot檢測結(jié)果顯示,骨細(xì)胞暴露于TNF-α刺激后,顯著增加了Bax蛋白的表達(dá)及減少了Bcl-2蛋白的表達(dá)。然而,辛伐他汀預(yù)處理骨細(xì)胞后,顯著抑制了TNF-α上調(diào)Bax蛋白及下調(diào)Bcl-2蛋白的效應(yīng)。辛伐他汀處理組的Bcl-2/Bax比率顯著高于TNF-α處理組。此外,caspase 3蛋白的檢測結(jié)果與上述結(jié)果一致,TNF-α刺激可顯著增加cleaved caspase-3蛋白的表達(dá)水平(P0.01,VScontrol),表明caspase-3與TNF-α誘導(dǎo)的骨細(xì)胞凋亡相關(guān),而對骨細(xì)胞進(jìn)行辛伐他汀預(yù)處理可顯著下調(diào)cleaved caspase-3蛋白的表達(dá)水平。7、辛伐他汀通過抑制JNK/NF-κB通路而抑制TNF-α誘導(dǎo)的骨細(xì)胞凋亡Western blot檢測結(jié)果顯示,骨細(xì)胞暴露于TNF-α刺激后,顯著增加了JNK、p38及ERK蛋白的磷酸化。然而,辛伐他汀(10-5M)預(yù)處理抑制了JNK蛋白分子的磷酸化,而對p38、 ERK蛋白的磷酸化則無抑制作用。此外,TNF-α刺激尚可使IKKα/β的磷酸化水平上升(p0.01),而辛伐他汀預(yù)處理則可減弱這種上調(diào)效應(yīng)。另一方面,TNF-α刺激骨細(xì)胞可顯著上調(diào)NF-κB的表達(dá)水平(F=42.27,P0.0001),且呈時間依賴性。使用辛伐他汀及MAPKs信號通路抑制劑預(yù)處理骨細(xì)胞后western blot檢測NF-κB蛋白的表達(dá)水平,結(jié)果顯示,辛伐他汀及JNK抑制劑SP600125對NF-κB的表達(dá)有抑制作用,而p38及ERK抑制劑卻無此作用。Western bolt檢測JNK抑制劑SP600125及NF-κB抑制劑BAY11-7082對TNF-α誘導(dǎo)的骨細(xì)胞凋亡的作用,檢測結(jié)果顯示,辛伐他汀及JNK、NF-κB抑制劑顯著抑制骨細(xì)胞中caspase-3蛋白的激活。8、辛伐他汀通過抑制JNK/NF-κB信號通路而下調(diào)sclerostin及RANKL蛋白的表達(dá)Western blot檢測結(jié)果顯示,JNK抑制劑SP600125及NF-κB抑制劑BAY11-7082顯著抑制sclerostin及RANKL蛋白的表達(dá)。9、Real-time PCR結(jié)果本研究采用實時熒光定量PCR檢測骨細(xì)胞凋亡對IL-1α、TNF-αmRNA表達(dá)的影響。PCR檢測結(jié)果顯示,TNF-α刺激顯著增高IL-1α、TNF-αmRNA的表達(dá)水平,而辛伐他汀可顯著抑制這些促炎性因子的表達(dá),NF-κB抑制劑BAY11-7082應(yīng)用亦可抑制IL-1α、TNF-αmRNA的表達(dá)。此外,TNF-a刺激顯著增高NF-κB mRNA的表達(dá)水平,而辛伐他汀可顯著抑制NF-κB mRNA的表達(dá),此外,MAPK/JNK抑制劑SP600125的應(yīng)用同樣顯著抑制NF-κB mRNA的表達(dá)。實驗結(jié)論本研究通過結(jié)合體內(nèi)、體外實驗兩部分,并從影像學(xué)、生物力學(xué)、組織病理學(xué)及分子生物學(xué)等多個角度,探討辛伐他汀在骨再生方面的生物學(xué)效應(yīng)及分子機(jī)制,著重觀察其對骨細(xì)胞的影響作用,全文結(jié)果總結(jié)如下：1、局部應(yīng)用辛伐他汀可加速開放截骨模型骨折修復(fù)的進(jìn)程及提高骨折愈合質(zhì)量,且這種促進(jìn)效應(yīng)與其抑制骨細(xì)胞凋亡、下調(diào)骨硬化蛋白、RANKL的表達(dá)有關(guān)；2、通過TNF-a的刺激,成功構(gòu)建了骨細(xì)胞的凋亡模型,為后續(xù)骨細(xì)胞的功能研究提供了良好的細(xì)胞模型；3、辛伐他汀通過抑制ROS/JNK/NF-κB信號通路而進(jìn)一步抑制凋亡相關(guān)因子的激活,最終抑制骨細(xì)胞凋亡；4、辛伐他汀抑制骨細(xì)胞表達(dá)骨硬化蛋白及RANKL,且該抑制效應(yīng)同樣與ROS/JNK/NF-κB信號通路有關(guān)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R68

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2 萬曉艷,于蘇國,郭玉芹,何慶;細(xì)胞凋亡與自身免疫性甲狀腺疾病的研究進(jìn)展[J];中國地方病防治雜志;2002年06期

3 祝偉民,林建棣,馬曉東,段小平;運(yùn)動與細(xì)胞凋亡[J];中國臨床康復(fù);2004年27期

4 王會玲,景文莉,張小紅,高維娟;細(xì)胞凋亡與心肌缺血-再灌注損傷[J];承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2005年04期

5 梁薇;細(xì)胞凋亡的中藥調(diào)節(jié)機(jī)制[J];四川中醫(yī);2005年11期

6 張松彪;細(xì)胞凋亡與細(xì)胞養(yǎng)生[J];中國科技產(chǎn)業(yè);2005年01期

7 楊竹林,伍漢文;細(xì)胞凋亡調(diào)控因素有關(guān)基因的研究[J];國外醫(yī)學(xué)(生理、病理科學(xué)與臨床分冊);1997年02期

8 劉恩梅,楊錫強(qiáng);細(xì)胞凋亡及其影響因素[J];重慶醫(yī)學(xué);1998年01期

9 ;美開發(fā)調(diào)控細(xì)胞凋亡藥物[J];中國腫瘤;1999年07期

10 管孝鞠,廖明陽;細(xì)胞凋亡在致畸中的作用[J];衛(wèi)生毒理學(xué)雜志;2000年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 陳穎麗;李前忠;;不同亞細(xì)胞位置的細(xì)胞凋亡蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)特性分析[A];第十一次中國生物物理學(xué)術(shù)大會暨第九屆全國會員代表大會摘要集[C];2009年

2 孫英麗;趙允;朱山;翟中和;;植物細(xì)胞凋亡及其機(jī)理的研究[A];中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會第七次會議論文摘要匯編[C];1999年

3 劉二龍;袁慧;;鋅與細(xì)胞凋亡[A];2003全國家畜內(nèi)科學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文專輯[C];2003年

4 邱潔;高海青;;鋅在細(xì)胞凋亡中的作用研究進(jìn)展[A];山東省微量元素科學(xué)研究會第三屆學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2006年

5 俞雅萍;;細(xì)胞凋亡的機(jī)制及途徑和影響因素[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會2006年學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2006年

6 于青;袁偉杰;姚建;;晚期糖基化終末產(chǎn)物引起足細(xì)胞凋亡的機(jī)制[A];2007年浙滬兩地腎臟病學(xué)術(shù)年會資料匯編[C];2007年

7 季宇彬;尹立;汲晨鋒;;調(diào)控細(xì)胞凋亡的線粒體因素[A];腫瘤病因?qū)W研究與中西醫(yī)結(jié)合腫瘤綜合診療交流研討會論文集[C];2009年

8 吳經(jīng)緯;湯長發(fā);;運(yùn)動中細(xì)胞凋亡的線粒體變化特征[A];湖南省生理科學(xué)會2006年度學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2007年

9 蒲小平;李長齡;屠鵬飛;宋志宏;;中藥肉叢蓉成分抗神經(jīng)細(xì)胞凋亡的實驗研究[A];第七屆全國生化藥理學(xué)術(shù)討論會論文摘要集[C];2000年

10 江鍵;宋誠榮;崔黎麗;方影;王小平;;靜電場對細(xì)胞凋亡作用的初步探討[A];中國物理學(xué)會第九屆靜電學(xué)術(shù)年會論文集[C];2000年

相關(guān)重要報紙文章 前10條

1 商東;“細(xì)胞凋亡”與臨床醫(yī)學(xué)[N];中國醫(yī)藥報;2001年

2 張志軍;細(xì)胞凋亡與中醫(yī)藥[N];中國醫(yī)藥報;2002年

3 ;“細(xì)胞凋亡療法”正逐步成為治療癌癥的新途徑[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報;2002年

4 記者張建松;治療癌癥新途徑：細(xì)胞凋亡療法[N];科技日報;2002年

5 李明輝;“細(xì)胞凋亡”治癌癥[N];醫(yī)藥導(dǎo)報;2002年

6 洪敏;細(xì)胞凋亡研究引人關(guān)注[N];中國醫(yī)藥報;2008年

7 陶春祥;細(xì)胞凋亡對心臟疾病的影響[N];中國醫(yī)藥報;2003年

8 本報實習(xí)記者 梁媛媛;薛定：發(fā)現(xiàn)癌癥“開關(guān)”[N];北京科技報;2010年

9 高書明;誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡[N];中國醫(yī)藥報;2004年

10 勇匯;中藥誘導(dǎo)癌細(xì)胞凋亡研究進(jìn)展[N];中國醫(yī)藥報;2002年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 楊利;系列多氮類化合物的抗腫瘤活性研究[D];武漢大學(xué);2012年

2 張浩;從分子、細(xì)胞和動物水平研究鉛誘發(fā)氧化損傷及細(xì)胞凋亡的效應(yīng)與機(jī)理[D];山東大學(xué);2015年

3 何欣怡;家蠶微孢子蟲（Nosema bombycis）抑制家蠶BmN細(xì)胞凋亡的功能研究[D];浙江大學(xué);2015年

4 馮全服;從線粒體途徑研究川芎嗪誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡效應(yīng)機(jī)制[D];南京中醫(yī)藥大學(xué);2015年

5 張曉倩;高糖誘導(dǎo)Bim蛋白高表達(dá)而促腎近曲小管上皮細(xì)胞凋亡的機(jī)制探討[D];山東大學(xué);2015年

6 孫健瑋;PTEN基因負(fù)調(diào)控Raf1磷酸化的作用及其對PC3細(xì)胞凋亡的影響[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2014年

7 徐林艷;腫瘤細(xì)胞凋亡過程中TNFRSF10B和CFLAR調(diào)控機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2015年

8 樊慶端;生物調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的建模與動力學(xué)行為研究[D];上海大學(xué);2015年

9 王德選;WNK_3對鈉氯協(xié)調(diào)轉(zhuǎn)運(yùn)子的調(diào)節(jié)及在胚腎細(xì)胞凋亡中的保護(hù)作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2015年

10 葉嘉;Nogo-B在急性肺損傷肺泡上皮細(xì)胞凋亡中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2015年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 曹璐璐;2,2’,4,4’-四溴聯(lián)苯醚(BDE-47)對人胚腎細(xì)胞(HEK293)的毒理效應(yīng)及作用機(jī)制研究[D];中國科學(xué)院煙臺海岸帶研究所;2015年

2 張薇;蒜頭果蛋白誘導(dǎo)HepG-2細(xì)胞凋亡的研究[D];云南民族大學(xué);2015年

3 唐建國;視黃醇X受體出核抑制對神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2015年

4 安璐;3-氯-1,2-丙二醇細(xì)胞毒性及其誘導(dǎo)HEK293細(xì)胞凋亡途徑探究[D];江南大學(xué);2015年

5 楊翔;Procaspase-8的異常表達(dá)抑制TRAIL誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡[D];昆明理工大學(xué);2015年

6 張昌明;I3C通過調(diào)控p53泛素化對喉癌Hep-2細(xì)胞凋亡的影響[D];延邊大學(xué);2015年

7 彭涵;共軛亞油酸對仔豬脂肪細(xì)胞凋亡的影響[D];西南大學(xué);2015年

8 李立輝;ΔFosB通過MMP-9調(diào)控山羊乳腺上皮細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2015年

9 楊鑫鋮;Hedgehog信號通路在大鼠急性胰腺炎腺泡細(xì)胞凋亡中的作用[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

10 賈瓊瓊;MicroRNA-214對H_2O_2損傷L6骨骼肌成肌細(xì)胞增殖和凋亡的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2015年

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本文編號：2490414