【摘要】：研究背景 膽汁淤積是膽汁成分及代謝產物在肝內或體內異常積聚引起的臨床綜合癥,是多種疾病的共同特點。毒性膽汁酸在體內的積累,可導致肝細胞的炎癥反應和肝組織纖維化,最終可發(fā)展為肝硬化、肝癌或膽管細胞癌等。根據發(fā)生的部位不同,可分為肝內膽汁淤積(intrahepatic cholestasis, IHC)和肝外膽汁淤積；肝外膽汁淤積多由梗阻性因素引起,臨床上常見的病因如膽結石、膽管癌或壺腹部腫瘤等；IHC的病因較多且更為復雜。膽汁淤積的主要機制為膽汁合成和轉運障礙,這個過程受到一系列膜受體、核受體及其轉錄因子轉錄的調控；其中,法尼酯受體(farnesoid X receptor, FXR)是一種膽汁酸受體和膽汁酸合成的生物感受器,主要表達在肝、腸、腎臟、腎上腺等臟器,在心、肺、脂肪、胃也有少量表達。在肝腸組織中,FXR及其靶基因的激活可調節(jié)多種轉運蛋白和合成酶的表達,促進細胞內膽汁酸排出和解毒,抑制膽汁酸的重吸收和合成來調節(jié)自身平衡,對維持體內膽固醇、膽汁酸代謝平衡起重要作用。 FXR調節(jié)膽汁酸代謝的靶基因指導合成的膽鹽輸出泵(bile salt export pump,Bsep)介導肝細胞內一價膽汁酸向膽管內轉運；多重耐藥相關蛋白2(multidrug resistance-associated protein2, Mrp2)位于膽管膜側,介導非膽鹽性有機陰離子如膽紅素、二價膽汁酸、葡萄糖醛酸膽紅素、谷胱甘肽向膽管內排泄；鈉-�；悄懰徂D運多肽(Na+-taurocholate cotransporting polypeptide, Ntcp)位于肝細胞竇膜側,是表達于肝細胞基底膜的主要的膽汁酸攝取系統(tǒng),從門靜脈攝取膽汁酸的主要轉運子。FXR激活后,可調控肝臟中Bsep、Mrp2、Ntcp的表達,使肝細胞及膽小管調節(jié)膽汁酸鹽和其他有機陰離子的攝取和排泄。因此,FXR的激活可能對高膽紅素血癥、膽汁淤積等疾病起治療作用。 S-腺苷蛋氨酸(S-Adenosyl-L-methionene, SAMe)是人體內重要的生物分子,參與體內的多種生化反應,在轉甲基、轉巰基、轉氨丙基過程中起著重要作用。SAMe可增加細胞膜磷脂的流動性和Na+-K+-ATP酶的活性,加快膽汁酸運轉,加速代謝產物的排泄,影響細胞膜信號通路的傳輸；可以輔助合成肝細胞內的半胱氨酸、谷胱甘肽、�；撬岬�,對抗氧自由基及炎性物質對細胞的損傷；影響細胞內基因表達及對多聚胺的需求,調節(jié)細胞生長、分化及功能等。早期的多項研究表明,SAMe能改善多種膽汁淤積性肝病患者的膽汁酸、膽紅素及轉氨酶水平,減輕肝組織炎癥反應,減輕肝纖維化,并且有可長期使用、副作用少等優(yōu)點,在臨床上廣泛應用。因為SAMe作用通道較多,它對肝病患者肝臟起保護作用的分子機制主要表現(xiàn)在提高線粒體內谷胱甘肽的水平,維持線粒體膜的動態(tài)和穩(wěn)定性,抑制肝星狀細胞合成膠原蛋白等方面；但SAMe與FXR及其靶基因轉錄合成的轉運體Bsep、Ntcp、Mrp2的關系,不能完全排除。 目的 探討SAMe對肝內膽汁淤積大鼠的肝臟保護作用及其與肝組織FXRmRNA、轉運體Bsep、Ntcp、Mrp2表達的關系,從而進一步了解SAMe的作用機制,并為研制對肝內膽汁淤積疾病有效的藥物提供依據。 方法 用50mg/kg1%α-奈異硫氰酸酯(α-Naphthyl isothiocyanate, ANIT)建立肝內膽汁淤積模型,以FXR.激動劑GW4064為對照,按建模后腹腔注射藥物不同分為六組,即A：橄欖油+SAMe溶劑；B：IHC+生理鹽水(nornal saline, NS); C:IHC+SAMe; D:IHC+GW4064; E:IHC+二甲亞砜(dimethyl sulfoxide, DMSO);F:IHC+SAMe溶劑。給藥后48h麻醉后取血及肝組織,檢測各組大鼠血清中總膽固醇(cholesterol,chol)、總膽汁酸(total bile acids,TBA)、總膽紅素(total bilirubin,TBil)、直接膽紅素(direct bilirubin,DBil)、間接膽紅素(indirect biliorubin,IBil)、谷丙轉氨酶(alanine transaminase,ALT)、谷草轉氨酶(aspartate transaminase,AST).堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、谷氨�；D移酶(γ-glutamyl transpeptidase,GGT)水平,PCR法檢測肝臟中FXR mRNA的表達,原位雜交法檢測Bsep.Ntcp.Mrp2的表達。所有數(shù)據使用SPSS13.0軟件,方差分析或卡方檢驗方法分析各組數(shù)據,P值小于0.05表示有統(tǒng)計學意義。 結果 血清學指標(1)IHC+NS組與IHC+SAMe溶劑組/IHC+DMSO組相比,各兩組大鼠血清中chol(4.95±1.78vs.9.20±1.97/8.50±1.70).TBA(332.67±244.79vs.481.23±47.50/471.47±32.41).TBil(139.97±52.73vs.234.53±31.04/232.07±25.52).DBil(71.57±25.25vs.145.70±33.80/92.17±16.29).IBil(68.40±27.80vs.88.83±8.54/139.90±35.79).ALT(966.67±675.52vs.1214.33±247.55/1310.6±257.26).AST(2269.67±1460.16vs.2810.00±329.24/2600.33±146.77). ALP(1094.33±286.55vs.1207.33±253.07/1352.00±46.52).GGT(6.00±1.57vs.9.67+4.73/4.67±1.16)無統(tǒng)計學差異,P0.05,表明SAMe溶劑、DMSO對上述血清學指標無明顯影響,可排除SAMe溶劑、DMSO對上述血清學生化指標的干擾。(2)IHC+SAMe組與IHC+NS組/IHC+GW4064組相比,大鼠血清中chol (2.01±0.19vs.4.95±1.78/4.29±0.65).TBA(41.80±4.32vs.332.67±244.79/281.33±118.20).TBil(5.47±3.86vs.139.97±52.73/124.16±22.30).DBil(0.43±0.21vs.71.57±25.25/67.33±8.02).IBiL(5.03±4.06vs.68.40±27.80/56.83±14.45).ALT(31.00±9.64vs.2269.67±1460.16/808.33±635.56).AST(118.67±17.21vs.2600.33±146.77/987.00±643.47).ALP(755.33±97.78vs.1352.00±46.52/1038.67±160.18).GGT(3.00±1.65vs.6.00±1.57/6.33±1.16)有統(tǒng)計學差異,P0.05,表明SAMe對ANIT誘導的膽汁淤積大鼠具有肝臟保護作用,且比實驗中所用劑量GW4064對肝臟的保護作用更明顯。(3) IHC+SAMe組與橄欖油+SAMe溶劑組相比,chol (3.46±0.69vs.2.01±0.19)、TBA (41.80±4.32vs.48.27±38.23)、TBil (5.47±3.86vs.2.80±0.10)、DBil (0.43±0.21vs.0.60±0.10)、 IBil (5.03±4.06vs.2.20±0.10)、ALT (31.00±9.64vs.47.67±8.51)、AST (118.67±17.21vs.149.00±16.00)、ALP (755.33±97.78vs.694.00±28.60). GGT (3.00±1.65vs.1.00±0.60)無統(tǒng)計學差異,P0.05,表明SAMe處理后的膽汁淤積大鼠與無膽汁淤積大鼠中各血清學指標接近,SAMe對膽汁淤積大鼠肝臟的肝功能有很好的恢復作用。 肝臟組織學橄欖油+SAMe溶劑組肝組織結構基本正常,肝小葉存在,肝索成放射狀排列整齊；IHC+NS組肝小葉結構紊亂,可見片狀肝細胞壞死,IHC+DMSO組、IHC+SAMe溶劑組表現(xiàn)與IHC+NS組類似,提示造模后大鼠肝細胞壞死,肝組織受損,且SAMe溶劑、DMSO對肝組織影響不大；IHC+SAMe組肝小葉結構存在,肝細胞索排列整齊,肝細胞內僅見空泡樣改變,提示所用劑量SAMe對肝組織有明顯保護作用；IHC+GW4064組部分肝小葉結構紊亂,可見壞死肝細胞團,但病灶較IHC+NS組、IHC+DMSO組、IHC+SAMe溶劑組小,提示所用劑量GW4064對肝組織有一定保護作用。 肝組織FXR mRNA表達(1)IHC+NS組與IHC+SAMe溶劑組/IHC+DMSO組相比,各兩組FXR mRNA表達量均無統(tǒng)計學差異(0.18±0.07vs.0.18±0.05/0.20±0.02,P0.05),表明SAMe溶齊、DMSO對肝組織中FXR mRNA的表達量無明顯影響。(2) IHC+SAMe組/IHC+GW4064組與IHC+NS組相比,有統(tǒng)計學差異(0.35±0.03/0.28±0.06vs.0.18±0.07,P0.05),說明所用劑量SAMe、GW4064均可提高肝組織中FXR mRNA的表達。(3) IHC+SAMe組與IHC+GW4064組無統(tǒng)計學差異(0.35±0.03vs.0.28±0.06,P0.05),兩者對表達的影響差異不大。(4) IHC+SAMe組與橄欖油+SAMe溶劑組相比,有統(tǒng)計學差異(0.35±0.03vs.0.23±0.04, P0.05), IHC+SAMe組比橄欖油+SAMe溶劑組表達量增加,提示SAMe對肝臟保護作用可能與FXR mRNA表達增加有關。 Bsep、Mrp2、Ntcp的表達IHC+NS組與IHC+SAMe溶劑組、IHC+DMSO組比較,Bsep/Mrp2/Ntcp表達的陽性率無明顯差異(陽性率均為16.7%),排除SAMe溶劑、DMSO對Bsep/Mrp2/Ntcp表達的影響。與橄欖油+SAMe溶劑組/IHC+NS組/IHC+SAMe溶劑組/IHC+DMSO組比較,IHC+SAMe組、IHC+GW4064組Bsep/Mrp2/Ntcp表達的陽性率增強(16.7%vs.100%,χ2=5.486,P=0.019,0.05),主要表達在細胞質中,提示SAMe對膽汁淤積大鼠的保護作用,與Bsep、Mrp2、Ntcp的表達增強有一定關系。 結論 SAMe可降低ANIT誘導的IHC大鼠血清中chol、TBA、TBil、DBil、IBil、 ALT、AST、ALP、GGT水平,減少肝細胞損傷,對肝臟起保護作用,其肝功能的恢復水平可達到基本正常；補充外源性的SAMe可恢復IHC大鼠的肝臟損傷。SAMe可增強IHC大鼠肝組織中FXR mRNA的表達,增強肝細胞胞質中Bsep、 Mrp2、Ntcp的表達,促進膽汁排泄和代謝,與SAMe的肝臟保護作用有關。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R575

【參考文獻】

相關期刊論文 前5條

1 沈鐳;陸倫根;;腺苷蛋氨酸在膽汁淤積性肝病治療中的應用[J];胃腸病學;2006年03期

2 楊紅蓮;吳純啟;廖明陽;;肝內膽汁淤積發(fā)生機制的研究進展[J];毒理學雜志;2007年01期

3 楊悅杰;黃芬;;肝星狀細胞及相關細胞因子在肝纖維化形成中的作用[J];世界華人消化雜志;2007年27期

4 趙志華;劉宇瓊;張蕾;李晟磊;高冬玲;陳奎生;;RhoC基因mRNA在食管鱗癌中的表達及其意義[J];世界華人消化雜志;2010年18期

5 Arthur I Cederbaum;;Hepatoprotective effects of S-adenosyl-L-methionine against alcohol-and cytochrome P450 2E1-induced liver injury[J];World Journal of Gastroenterology;2010年11期

，

本文編號：2482594