【摘要】：目的： 針刺療法適用于臨床多種疾病，其中包括消化道胃腸功能紊亂。大量的實(shí)驗(yàn)和臨床證據(jù)表明：針刺在治療功能性腸病方面具有獨(dú)到的療效與優(yōu)勢(shì)。功能性腸病臨床分為腹瀉與便秘兩種疾病，這兩種疾病在臨床治療選穴時(shí)存在用穴交叉和混亂的狀況，本實(shí)驗(yàn)的目的旨在明確臨床選穴，為臨床治療疾病準(zhǔn)確選穴提供進(jìn)一步的指導(dǎo)。盡管目前已經(jīng)有大量關(guān)于針刺治療腸道疾病的研究，之前也有針刺對(duì)麻醉大鼠胃運(yùn)動(dòng)刺激效應(yīng)的相關(guān)研究，但是關(guān)于胃腸運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)方面針刺對(duì)自主神經(jīng)功能調(diào)節(jié)作用的相關(guān)研究并不多見，而關(guān)于針刺起效的傳入機(jī)制以及效應(yīng)方式仍在研究當(dāng)中。此外，在體同時(shí)記錄小鼠空腸和結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的實(shí)驗(yàn)研究也不多見，針刺作用到底是通過何種傳入機(jī)制起作用以及針刺作用的效應(yīng)受體為何仍不清楚。本研究采用腸道內(nèi)水囊測(cè)壓的方法觀察針刺曲池、上巨虛、天樞及大腸俞四穴對(duì)正常及特定基因敲除小鼠空腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的影響，從而探討針刺作用的外周感受器傳入機(jī)制和效應(yīng)器官受體調(diào)控機(jī)制。 材料與方法： 1.實(shí)驗(yàn)方案 C57BL/6小鼠20只，TRPV1外周感受器基因敲除（TRPV1-/-）小鼠、ASIC3外周感受器基因敲除（ASIC3-/-）小鼠及效應(yīng)受體M23基因敲除（M23-/-）小鼠各10只，體重20±2g，禁食不禁水24小時(shí)后，10%烏來糖溶液（烏來糖1-1.2g/kg）腹腔麻醉。小鼠取仰臥位，腹正中線劍突下切口，在幽門下5厘米左右的空腸處和肛門上2厘米左右的遠(yuǎn)端結(jié)腸處，分別放置直徑為3毫米的水囊，水囊通過導(dǎo)管與壓力換能器相連，用Micro1401和Spike27.03數(shù)據(jù)采集軟件記錄腸道運(yùn)動(dòng)的信號(hào)。 2.穴位定位和針刺 上巨虛穴（ST37）：小鼠脛骨外側(cè)偏下方6毫米處，直刺5毫米達(dá)到肌層； 曲池穴（LI11）：小鼠橈骨近端肘關(guān)節(jié)外側(cè)前方的凹陷處，直刺3毫米； 天樞穴（ST25）:小鼠前正中線旁開5毫米，恥骨聯(lián)合以上20毫米處，直刺2毫米； 大腸俞穴（BL25）：在腰部，當(dāng)?shù)?腰椎棘突下，旁開5毫米，直刺4毫米。 針刺肢體一側(cè)單穴，進(jìn)行提插捻轉(zhuǎn)的操作，刺激頻率為2Hz，持續(xù)60秒。 3．?dāng)?shù)據(jù)采集及分析 采用Spike27.03信號(hào)采集分析系統(tǒng)，對(duì)小鼠的腸道內(nèi)壓力信號(hào)進(jìn)行采集與分析。實(shí)驗(yàn)開始后，首先記錄穩(wěn)定的小鼠腸道內(nèi)壓力曲線60秒，然后穴位針刺60秒同時(shí)觀察腸道內(nèi)壓力曲線的變化，比較針刺前后60秒壓力曲線幅值及曲線下面積平均值的變化。使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)針刺前、后60秒壓力曲線幅值的平均值及曲線下面積平均值進(jìn)行自身配對(duì)t檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±SD）表示，P＜0.05認(rèn)為具有顯著性差異，P＜0.01認(rèn)為具有非常顯著性差異。 結(jié)果： 1.針刺不同腧穴對(duì)C57BL/6小鼠及TRPV1外周感受器基因敲（TRPV1-/-）小鼠（以下簡(jiǎn)稱TRPV1KO小鼠）腸道運(yùn)動(dòng)的影響 1.1針刺不同腧穴對(duì)C57BL/6小鼠腸道運(yùn)動(dòng)的影響 1.1.1空腸運(yùn)動(dòng) 手針刺激LI1160秒，明顯促進(jìn)了C57BL/6小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)。C57BL/6小鼠空腸壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有不同程度的增加，P＜0.05；而頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生顯著變化，P＞0.05。 手針刺激ST3760秒，明顯促進(jìn)了C57BL/6小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)。C57BL/6小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激ST2560秒，明顯抑制了C57BL/6小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)。C57BL/6小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率、平均振幅以及平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著降低，P＜0.05。 手針刺激BL2560秒，對(duì)C57BL/6小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)無明顯作用，空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率、平均振幅以及平均曲線下面積與針刺前相比均沒有明顯變化，P＜0.05。 1.1.2遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng) 手針刺激LI1160秒，明顯促進(jìn)了C57BL/6小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。C57BL/6小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激ST3760秒，明顯促進(jìn)了C57BL/6小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。C57BL/6小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸壓力曲線的運(yùn)動(dòng)平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其遠(yuǎn)端結(jié)腸壓力曲線的運(yùn)動(dòng)頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激ST2560秒，明顯促進(jìn)了C57BL/6小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。C57BL/6小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸壓力曲線的運(yùn)動(dòng)平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其遠(yuǎn)端結(jié)腸壓力曲線的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激BL2560秒，明顯促進(jìn)了C57BL/6小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。C57BL/6小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸壓力曲線的運(yùn)動(dòng)平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其遠(yuǎn)端結(jié)腸壓力曲線的平均 頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 1.2針刺不同腧穴對(duì)TRPV1KO小鼠空腸及遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的影響 1.2.1空腸運(yùn)動(dòng) 手針刺激LI1160秒，明顯促進(jìn)了TRPV1KO小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)。TRPV1KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激ST3760秒，明顯促進(jìn)了TRPV1KO小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)。TRPV1KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激ST2560秒，明顯抑制了TRPV1KO小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)。TRPV1KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率、平均振幅以及平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著降低，P＜0.05。 手針刺激BL2560秒，，對(duì)TRPV1KO小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)無明顯作用。TRPV1KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率、平均振幅以及平均曲線下面積與針刺前相比均沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 1.2.2遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng) 手針刺激LI1160秒，明顯促進(jìn)了TRPV1KO小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。TRPV1KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激ST3760秒，明顯促進(jìn)了TRPV1KO小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。TRPV1KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其遠(yuǎn)端結(jié)腸壓力曲線的運(yùn)動(dòng)頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激ST2560秒，明顯促進(jìn)了TRPV1KO小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。TRPV1KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均顯著增加，P＜0.05；而其遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激BL2560秒，明顯促進(jìn)了TRPV1KO小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。TRPV1KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率與針刺前相比沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 1.3針刺不同腧穴對(duì)C57BL/6小鼠及TRPV1KO小鼠空腸及遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的影響的比較 在同種系野生小鼠C57BL/6與TRPV1KO小鼠，針刺ST37與ST25對(duì)兩種小鼠空腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的影響區(qū)別較為明顯。 針刺LI11和ST37對(duì)TRPV1KO小鼠空腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用均低于同種野生小鼠C57BL/6（即針刺LI11和ST37時(shí)，TRPV1KO小鼠空腸及遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均均低于C57BL/6小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05)。 針刺ST25對(duì)TRPV1KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)的抑制作用也低于C57BL/6小鼠（即針刺ST25時(shí)，TRPV1KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率、平均曲線下面積變化率以及平均頻率均低于同種系野生鼠C57BL/6小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05)；針刺ST25對(duì)TRPV1KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用也低于C57BL/6小鼠（即針刺ST25時(shí)，TRPV1KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均低于同種系野生鼠C57BL/6小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05）。 針刺BL25對(duì)TRPV1KO小鼠及同種系野生鼠C57BL/6小鼠空腸運(yùn)動(dòng)均無明顯作用（即針刺BL25時(shí)，兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均無明顯差異，P＞0.05）;針刺BL25對(duì)TRPV1KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用低于同種系野生鼠C57BL/6小鼠（即針刺BL25時(shí)，TRPV1KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均低于同種系野生鼠C57BL/6小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05）。 2針刺不同腧穴對(duì)ASIC3外周感受器基因敲除（ASIC3-/-）小鼠（以下簡(jiǎn)稱ASIC3KO小鼠）空腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的影響 2.1空腸運(yùn)動(dòng) 手針刺激LI1160秒，明顯促進(jìn)了ASIC3KO小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)。ASIC3KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其空腸運(yùn)動(dòng)的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激ST3760秒，明顯促進(jìn)了ASIC3KO小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)。ASIC3KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其空腸運(yùn)動(dòng)的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激ST2560秒，明顯抑制了ASIC3KO小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)。ASIC3KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率、平均振幅以及平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著降低，P＜0.05。 手針刺激BL2560秒，對(duì)ASIC3KO小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)無明顯作用。ASIC3KO小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率、平均振幅以及平均曲線下面積與針刺前相比均沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 2.2遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng) 手針刺激LI1160秒，明顯促進(jìn)了ASIC3KO小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。ASIC3KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激ST3760秒，明顯促進(jìn)了ASIC3KO小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。ASIC3KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其遠(yuǎn)端結(jié)腸壓力曲線的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激ST2560秒，明顯促進(jìn)了ASIC3KO小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。ASIC3KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其遠(yuǎn)端結(jié)腸壓力曲線的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激BL2560秒，明顯促進(jìn)了ASIC3KO小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。ASIC3KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 2.3針刺不同腧穴對(duì)C57BL/6小鼠及ASIC3KO小鼠空腸及遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的影響的比較 在同種系野生小鼠C57BL/6與ASIC3KO小鼠，針刺ST37與ST25對(duì)兩種小鼠空腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的影響區(qū)別較為明顯。 針刺LI11和ST37對(duì)ASIC3KO小鼠空腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用均低于同種系野生小鼠C57BL/6（即針刺LI11和ST37時(shí)，ASIC3KO小鼠空腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均低于同種系野生鼠C57BL/6小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05）。 針刺ST25對(duì)ASIC3KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)的抑制作用也低于同種系野生小鼠C57BL/6（即針刺ST25時(shí)，ASIC3KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率、平均曲線下面積變化率以及平均頻率變化率均低于同種系野生鼠C57BL/6小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05），同時(shí)對(duì)ASIC3KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用也低于同種系野生小鼠C57BL/6（即針刺ST25時(shí)，ASIC3KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均低于同種系野生小鼠C57BL/6相應(yīng)的變化率，P＜0.05）。 針刺BL25對(duì)ASIC3KO小鼠及同種系野生鼠C57BL/6小鼠空腸運(yùn)動(dòng)均無明顯作用（即針刺BL25時(shí)，兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線均無明顯差異的平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率，P＞0.05），同時(shí)對(duì)ASIC3KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用低于同種系野生小鼠C57BL/6（即針刺BL25時(shí)，ASIC3KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均低于同種系野生鼠C57BL/6小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05）。 2.4針刺不同腧穴對(duì)C57BL/6小鼠及TRPV1KO、ASIC3KO小鼠空腸及遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的影響的比較 在同種系野生小鼠C57BL/6與TRPV1KO小鼠與ASIC3KO小鼠，針刺ST37與ST25對(duì)三種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物空腸及遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的影響區(qū)別較為明顯。 針刺LI11和ST37對(duì)TRPV1KO小鼠及ASIC3KO小鼠空腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用均低于同種系野生小鼠C57BL/6（即針刺LI11和ST37時(shí)，TRPV1KO小鼠及ASIC3KO小鼠空腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均低于同種系野生鼠C57BL/6小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05）；在兩種基因敲除動(dòng)物，針刺LI11和ST37對(duì)TRPV1KO小鼠空腸及遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用均低于ASIC3KO小鼠（即針刺LI11和ST37時(shí)，TRPV1KO小鼠空腸及遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均低于ASIC3KO小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05）。 針刺ST25對(duì)TRPV1KO小鼠及ASIC3KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)的抑制作用也低于同種系野生小鼠C57BL/6（即針刺ST25時(shí)，TRPV1KO小鼠及ASIC3KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率、平均曲線下面積變化率及平均頻率變化率均低于同種系野生鼠C57BL/6小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05）；在兩種基因敲除動(dòng)物，針刺ST25對(duì)TRPV1KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)的抑制作用低于ASIC3KO小鼠（即針刺ST25時(shí)，TRPV1KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率變化率、平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均低于ASIC3KO小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05）。同時(shí)針刺ST25對(duì)TRPV1KO小鼠及ASIC3KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用也低于同種系野生小鼠C57BL/6（即針刺ST25時(shí)，TRPV1KO小鼠及ASIC3KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均低于同種系野生鼠C57BL/6小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05）；在兩種基因敲除動(dòng)物，針刺ST25對(duì)TRPV1KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用低于ASIC3KO小鼠（即針刺ST25時(shí)，TRPV1KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均低于ASIC3KO小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05）。 針刺BL25對(duì)三種小鼠空腸運(yùn)動(dòng)均無明顯作用（即針刺BL25時(shí)，三種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線均無明顯差異的平均頻率變化率、平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率，P＞0.05），同時(shí)針刺BL25對(duì)TRPV1KO小鼠及ASIC3KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用均低于同種系野生小鼠C57BL/6（即針刺BL25時(shí)，TRPV1KO小鼠及ASIC3KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均明顯低于同種系野生鼠C57BL/6小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05）；在兩種基因敲除動(dòng)物，針刺BL25對(duì)TRPV1KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用低于ASIC3KO小鼠（及針刺BL25時(shí)，TRPV1KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均低于ASIC3KO小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05）。 3針刺不同腧穴對(duì)M23效應(yīng)受體基因敲除（M23-/-）小鼠（以下簡(jiǎn)稱M23KO小鼠）空腸及遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的影響 3.1空腸運(yùn)動(dòng) 手針刺激LI1160秒，明顯促進(jìn)了M23KO小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)。M23KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激ST3760秒，明顯促進(jìn)了M23KO小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)。M23KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率則沒 有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激ST2560秒，明顯抑制了M23KO小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)。M23KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率、平均振幅以及平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著降低，P＜0.05。 手針刺激BL2560秒，針刺對(duì)M23KO小鼠的空腸運(yùn)動(dòng)無明顯作用。M23KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率、平均振幅以及平均曲線下面積與針刺前相比均沒有明顯變化，P＞0.05。 3.2遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng) 手針刺激LI1160秒，明顯促進(jìn)了M23KO小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。M23KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激ST3760秒，明顯促進(jìn)了M23KO小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。M23KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激ST2560秒，明顯促進(jìn)了M23KO小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。M23KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 手針刺激BL2560秒，明顯促進(jìn)了M23KO小鼠的遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。M23KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅和平均曲線下面積與針刺前相比均有顯著增加，P＜0.05；而其遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均頻率與針刺前相比則沒有發(fā)生明顯變化，P＞0.05。 3.3針刺不同腧穴對(duì)C57BL/6小鼠及M23KO小鼠空腸及遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的影響的比較 在同種系野生小鼠C57BL/6，針刺ST37與ST25對(duì)兩種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 空腸及遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的影響區(qū)別較為明顯。 針刺LI11和ST37對(duì)M23KO小鼠空腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用均低于同種系野生小鼠C57BL/6（即針刺LI11和ST37時(shí)，M23KO小鼠空腸和遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均低于同種系野生鼠C57BL/6小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05）。針刺ST25對(duì)M23KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)的抑制作用也低于同種系野生小鼠C57BL/6（即針刺ST25時(shí)，M23KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率、平均曲線下面積變化率以及平均頻率變化率均低于同種系野生鼠C57BL/6小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05）。同時(shí)對(duì)M23KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的次進(jìn)組也低于同種系野生小鼠C57BL/6（即針刺ST25時(shí)，M23KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均低于同種系野生鼠C57BL/6小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05）。針刺BL25對(duì)M23KO小鼠及同種系野生小鼠C57BL/6空腸運(yùn)動(dòng)均無明顯作用（即針刺BL25時(shí)，二種實(shí)驗(yàn)動(dòng)物空腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線均無明顯差異的平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率，P＞0.05），同時(shí)對(duì)M23KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用低于同種系野生鼠C57BL/6小鼠（即針刺BL25時(shí)，M23KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)壓力曲線的平均振幅變化率及平均曲線下面積變化率均低于同種系野生鼠C57BL/6小鼠相應(yīng)的變化率，P＜0.05）。 結(jié)論： 1ST25作為空腸的單元穴位（與空腸內(nèi)臟神經(jīng)支配節(jié)段相同），針刺能夠通過軀體-交感神經(jīng)反射通路抑制空腸運(yùn)動(dòng)；LI11和ST37作為空腸的集元穴位（與空腸內(nèi)臟神經(jīng)支配遠(yuǎn)節(jié)段腧穴），針刺能夠通過激活副交感神經(jīng)通路促進(jìn)空腸運(yùn)動(dòng)。 2LI11、ST37、ST25、BL25作為遠(yuǎn)端結(jié)腸的集元穴位（與遠(yuǎn)端結(jié)腸內(nèi)臟神經(jīng)支配遠(yuǎn)節(jié)段腧穴），針刺四個(gè)穴位均可以通過激活副交感神經(jīng)神經(jīng)通路促進(jìn)遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)。 3針刺TRPV1KO及ASIC3KO小鼠，針刺腧穴的效應(yīng)方向沒有改變，但針刺產(chǎn)生的效應(yīng)大小發(fā)生了明顯的變化。提示TRPV1與ASIC3離子通道可能均參與了針刺作用的外周感受器傳入神經(jīng)機(jī)制，其中TRPV1離子通道可能發(fā)揮了更為重要的作用。 4針刺M23KO小鼠，針刺腧穴的效應(yīng)方向也沒有改變，但針刺LI11和ST37對(duì)空腸的促進(jìn)作用明顯減弱。提示M23受體可能參與了針刺作用的靶器官效應(yīng)受體機(jī)制，即迷走神經(jīng)膽堿能受體在針刺單元穴促進(jìn)空腸運(yùn)動(dòng)中起主要作用。從本次研究的結(jié)果來看，針刺對(duì)于TRPV1及ASIC3基因敲除小鼠空腸及遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)作用均較野生鼠有所降低，這些結(jié)果支持A類和C類纖維較A類纖維在針刺調(diào)節(jié)腸道運(yùn)動(dòng)中起更主要作用，這兩種感受器均參與了針刺對(duì)胃腸功能的調(diào)節(jié)，即當(dāng)針刺ST37及LI11時(shí)，激活TRPV1及ASIC3受體離子通道，興奮了副交感神經(jīng)，引起增強(qiáng)空腸運(yùn)動(dòng)的效應(yīng)；當(dāng)針刺ST25時(shí)，激活TRPV1及ASIC3受體離子通道，興奮了交感神經(jīng)，引起抑制空腸運(yùn)動(dòng)的效應(yīng)。同時(shí)從我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果中明顯可以看出于C57小鼠比較，針刺對(duì)TRPV1基因敲除小鼠空腸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)效應(yīng)差于ASIC3基因敲除小鼠。也說明了TRPV1離子通道在針刺調(diào)節(jié)腸道運(yùn)動(dòng)的神經(jīng)機(jī)制中發(fā)揮著更為關(guān)鍵的作用。而針刺這四個(gè)穴位對(duì)TRPV1和ASIC3基因敲除小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的作用均以興奮性效應(yīng)為主，僅以興奮效應(yīng)的強(qiáng)度與野生型小鼠有所不同，那么針刺對(duì)于遠(yuǎn)端結(jié)腸的調(diào)節(jié)機(jī)制是通過何種受體機(jī)制起主導(dǎo)作用呢？即針刺作用對(duì)遠(yuǎn)端結(jié)腸的調(diào)節(jié)機(jī)制仍需進(jìn)一步研究探討？ 針刺對(duì)M23KO小鼠腸道運(yùn)動(dòng)的促進(jìn)作用明顯低于野生鼠，提示在M23受體在針刺促進(jìn)腸運(yùn)動(dòng)中共同發(fā)揮了作用。結(jié)合之前的分析，我們有理由相信針刺可能是通過激活M23受體，與針刺作用引起副交感神經(jīng)興奮后促進(jìn)腸道釋放的乙酰膽堿相結(jié)合，發(fā)揮促進(jìn)腸道收縮運(yùn)動(dòng)的效應(yīng)。同時(shí)我們還觀察到針刺對(duì)M23KO小鼠空腸運(yùn)動(dòng)的抑制作用與野生鼠相比較沒有明顯差異，說明M23兩種受體在抑制腸道運(yùn)動(dòng)即興奮交感神經(jīng)及拮抗副交感神經(jīng)興奮所產(chǎn)生的收縮促進(jìn)作用效應(yīng)中意義不大或者沒有作用。而針刺這四個(gè)穴位對(duì)M23KO小鼠遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的作用均以興奮性效應(yīng)為主，僅以興奮效應(yīng)的強(qiáng)度與野生型小鼠有所不同，那么針刺對(duì)于遠(yuǎn)端結(jié)腸的調(diào)節(jié)機(jī)制是通過何種受體機(jī)制起主導(dǎo)作用呢？即針刺作用對(duì)遠(yuǎn)端結(jié)腸的調(diào)節(jié)機(jī)制仍需進(jìn)一步研究探討。 基于上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果我們可以得出，針刺對(duì)空腸及遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)的調(diào)節(jié)作用可能是通過激活傳入纖維末梢的TRPV1、ASIC3離子通道啟動(dòng)針刺作用的傳入途徑，興奮膽堿能副交感神經(jīng)，通過M23受體機(jī)制，引起腸道收縮以促進(jìn)腸道運(yùn)動(dòng)；通過激活傳入纖維末梢的TRPV1及ASIC3受體通道，興奮胃腸交感神經(jīng)神經(jīng)，引起對(duì)腸道收縮運(yùn)動(dòng)的拮抗作用以產(chǎn)生抑制腸道運(yùn)動(dòng)的效應(yīng)。從結(jié)果來看，TRPV1及ASIC3受體通道均參與了針刺對(duì)腸運(yùn)動(dòng)調(diào)節(jié)的促進(jìn)和抑制效應(yīng)，說明在針刺對(duì)交感及副交感神經(jīng)的興奮效應(yīng)中此兩種受體通道均起到了一定作用，兩者比較而言TRPV1受體通道在此效應(yīng)中發(fā)揮了更為重要的作用。而針刺效應(yīng)產(chǎn)生的的神經(jīng)機(jī)制中是否還有其他感受器離子通道參與仍需要進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)研究。針刺這四個(gè)穴位均能夠加強(qiáng)遠(yuǎn)端結(jié)腸運(yùn)動(dòng)，尤其是天樞穴與其對(duì)空腸運(yùn)動(dòng)的作用方向不一致，這一點(diǎn)可能與遠(yuǎn)端結(jié)腸的神經(jīng)支配較復(fù)雜且主要以興奮腸道運(yùn)動(dòng)的神經(jīng)效應(yīng)為主有關(guān)，而在這種加強(qiáng)效應(yīng)中何種神經(jīng)支配占據(jù)主導(dǎo)地位仍需進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行深入探討。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：湖北中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R245

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2425219