【摘要】：臨床上種植義齒在缺失牙患者的治療中適應(yīng)證廣泛,近幾十年種植義齒更是迅速發(fā)展,越來越多的缺牙患者開始選擇種植義齒修復(fù),種植學(xué)也成為了口腔學(xué)科中發(fā)展最為迅速的二級(jí)學(xué)科,種植義齒的出現(xiàn)甚至改變了傳統(tǒng)的缺牙修復(fù)治療模式。種植體周圍炎(又稱種植體周圍黏膜炎)是指發(fā)生在口腔種植體周圍軟組織的可逆炎癥。其發(fā)生發(fā)展的根本因素是寄生在種植體上的細(xì)菌微生物。由于口腔衛(wèi)生不良,種植體周圍菌斑堆積,從而刺激機(jī)體產(chǎn)生炎癥反應(yīng)。臨床上患者表現(xiàn)為黏膜的紅腫、探診出血甚至溢膿等癥狀。其一般發(fā)生在種植體植入之后或行使功能之后,發(fā)生于種植體周圍組織的慢性炎癥,多導(dǎo)致種植體周圍支持骨吸收,其發(fā)展的最終歸宿是種植體脫落。良好的骨整合與種植體頸部良好的軟組織附著所形成的“袖口”封閉是維持種植體長(zhǎng)期穩(wěn)定的生物學(xué)基礎(chǔ),是抵抗種植體周圍炎的關(guān)鍵�！靶淇凇苯Y(jié)構(gòu)的形成,可以起到生物學(xué)屏障作用,能夠有效阻止細(xì)菌及其他致炎因子的入侵,預(yù)防種植體周圍炎的發(fā)生,減少骨組織吸收,提高臨床種植義齒成功率。本實(shí)驗(yàn)意在探討一種更有利于牙齦成纖維細(xì)胞附著的愈合基臺(tái)表面處理方法,為愈合基臺(tái)一種表面臨床改良提供可行的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。種植體可以長(zhǎng)期穩(wěn)定存在于口腔環(huán)境并良好的行使作用,“骨結(jié)合”必不可少,其中種植體穿齦部分也起著至關(guān)重要的作用。雖然種植體周圍結(jié)合上皮和天然牙周圍結(jié)合上皮類似,以半橋粒與基底板附著在種植體表面,但是種植體和結(jié)締組織的結(jié)合方式一直存在著爭(zhēng)議。牙齦結(jié)締組織里牙齦成纖維細(xì)胞占最主要作用,本實(shí)驗(yàn)擬研究微弧氧化處理和微弧氧化載銀處理的Ti6Al4V合金對(duì)牙齦成纖維細(xì)胞的生物學(xué)行為的影響,引導(dǎo)我們探索一種有利于袖口形成的愈合基臺(tái)的表面處理方法,具有一定臨床意義。第一章人牙齦成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定目的:體外分離培養(yǎng)人牙齦成纖維細(xì)胞(Human Gingival Fibroblasts, HGFs),觀察人牙齦成纖維細(xì)胞體外培養(yǎng)的形態(tài)特點(diǎn),對(duì)其來源進(jìn)行鑒定,為接下來的實(shí)驗(yàn)提供細(xì)胞基礎(chǔ)。方法:選擇就診于南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院正畸科且需要拔牙進(jìn)行矯正治療的年輕患者,年齡12～20歲,要求患者牙齦健康、無(wú)齲齒、無(wú)牙齦增生且未服用可使牙齦增生的藥物。征得其同意并簽署知情同意書后局部麻醉下拔除正畸牙同時(shí)切取牙齦組織,采用酶消化組織塊法對(duì)其進(jìn)行原代培養(yǎng),并通過免疫組織化學(xué)染色對(duì)其來源進(jìn)行鑒定。結(jié)果:1.顯微鏡下可觀察到原代細(xì)胞在培養(yǎng)到第3-5d左右時(shí)從黑色組織塊邊緣向四周游出,細(xì)胞緊貼培養(yǎng)瓶壁生長(zhǎng),細(xì)胞形態(tài)多呈長(zhǎng)梭形,胞體豐滿,胞漿均勻,可見到單顆細(xì)胞核位于胞漿中央呈橢圓形,其內(nèi)可見含2-3個(gè)核仁。伴隨培養(yǎng)天數(shù)的增加,細(xì)胞從組織塊中央向四周伸展,以組織塊為中心呈現(xiàn)放射狀排列,排列緊密,細(xì)胞呈極性排列。到觀察到細(xì)胞長(zhǎng)滿培養(yǎng)瓶底約90%面積左右時(shí)可看見HGFs胞體排列緊密呈細(xì)長(zhǎng)梭形,細(xì)胞排列呈旋渦狀與編織狀,傳代培養(yǎng)后的牙齦成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛,上皮細(xì)胞逐漸消失,性狀趨于穩(wěn)定。2.在光鏡下對(duì)細(xì)胞行免疫組化染色觀察,細(xì)胞表現(xiàn)出抗波形絲蛋白染色陽(yáng)性,胞質(zhì)內(nèi)陽(yáng)性顆粒分布均勻,胞核清晰、無(wú)染色;抗角蛋白染色陰性,證明細(xì)胞來源于中胚層,且無(wú)上皮源性細(xì)胞混雜。陰性對(duì)照組均未見陽(yáng)性染色結(jié)果。說明我們培養(yǎng)的細(xì)胞來源于間充質(zhì)而非上皮源性細(xì)胞。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)通過組織塊法成功培養(yǎng)出HGFs,并通過免疫組織化學(xué)對(duì)其進(jìn)行了鑒定,這些細(xì)胞增殖能力較強(qiáng),可以在體外維持較長(zhǎng)時(shí)間,足以滿足本接下來研究所需。第二章 微弧氧化與微弧氧化載銀處理的Ti6Al4V鈦合金理化性能的研究目的:使用掃描電鏡(SEM)、表面元素分析儀、表面粗糙度儀、接觸角測(cè)量?jī)x檢測(cè)微弧氧化與微弧氧化載銀處理后的Ti6Al4V鈦合金表面形貌特點(diǎn)、元素組成、表面粗糙度水平和表面接觸角大小水平。方法:購(gòu)置8mm直徑、0.8mm厚度的Ti6Al4V合金片;以Ti6Al4V鈦合金作為陽(yáng)極,鉑電極作為陰極,采用350V恒壓,設(shè)置頻率50Hz,設(shè)置占空比50%,在冰塊冷卻作用下使電解液溫度保持在在40℃以下處理5min。試樣經(jīng)微弧氧化后用去離子水超聲洗滌15min,放入烘干箱,烘干干燥紙塑密封包裝備用。配制為0.006mol/L濃度硝酸銀溶液作電解液,鉑電極作為陽(yáng)極、微弧氧化處理后的試樣作作為陰極,硝酸銀溶液做電解液,設(shè)置2V電壓使試樣在電解液中處理30s,對(duì)鈦合金片作電沉積載銀處理(處理過程中均勻攪拌電解液),超聲清洗后干燥,得到載銀微弧氧化試樣。使用掃描電鏡(SEM)觀察處理后試樣表面形貌、結(jié)構(gòu);使用表面元素分析儀分析處理后試樣表面元素組成;使用表面粗糙度測(cè)量?jī)x測(cè)量試件表面糙度,測(cè)量處理試樣表面液體接觸角并計(jì)算材料表面自由能。結(jié)果:掃描電鏡觀察微弧氧化后鈦合金片表面,可觀察到粗糙多孔氧化陶瓷,呈“火山口 ”形貌,“火山口”孔徑約2-5μm。檢測(cè)Ti6Al4V-MAO以及Ti6Al4V-MAO-Ag表面粗糙度得知粗糙度為微米級(jí)。進(jìn)行表面接觸角檢測(cè),發(fā)現(xiàn)Ti6Al4V-MAO以及Ti6Al4V-MAO-Ag組均小于光滑組。結(jié)論:經(jīng)微弧氧化與微弧氧化載銀處理后的Ti6Al4V合金表面形成了“火山口”狀特殊形貌,其粗糙度加大,處理后所表面水接觸角更小,表面元素及元素比例發(fā)生變化。第三章微弧氧化Ti6Al4V鈦合金載銀對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞早期黏附、細(xì)胞形態(tài)及增殖的影響目的:研究微弧氧化Ti6Al4V鈦合金載銀對(duì)人牙齦成纖維細(xì)胞早期黏附、細(xì)胞形態(tài)及增殖的影響。方法:于光滑的Ti6Al4V鈦合金,Ti6Al4V-MAO以及Ti6Al4V-MAO-Ag表面分別接種原代培養(yǎng)的人牙齦成纖維細(xì)胞,通過掃描電鏡、CCK-8、熒光正置顯微鏡等方法檢測(cè)觀察HGFs的早期黏附、增殖情況及細(xì)胞形態(tài)。結(jié)果:1.細(xì)胞早期黏附:在光滑Ti6Al4V鈦合金、Ti6Al4V-MAO以及Ti6Al4V-MAO-Ag表面分別接種人牙齦成纖維細(xì)胞細(xì)胞,接種細(xì)胞12h,24h后用DAPI染料及熒光抗體分別對(duì)其細(xì)胞核與細(xì)胞骨架進(jìn)行染色處理,熒光顯微鏡下計(jì)算細(xì)胞個(gè)數(shù)。12h,24h后Ti6Al4V-MAO組以及Ti6Al4V-MAO-Ag組表面細(xì)胞數(shù)量明顯多于光滑組,有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。2.細(xì)胞形態(tài):熒光正置顯微鏡下觀察經(jīng)熒光染色處理的HGFs接種在光滑Ti6Al4V鈦合金、Ti6Al4V-MAO組與Ti6Al4V-MAO-Ag組表面12h后的細(xì)胞架形態(tài)變化,發(fā)現(xiàn)牙齦成纖維細(xì)胞在光滑鈦合金表面沿著拋光試樣時(shí)的紋路排列,呈梭型排開,細(xì)胞呈現(xiàn)出極性排列方式。而Ti6Al4V-MAO與Ti6Al4V-MAO-Ag組表面細(xì)胞呈紡錘型生長(zhǎng),細(xì)胞鋪展面積較大。掃描電鏡觀察可見在牙齦成纖維細(xì)胞與試樣恒溫共培養(yǎng)12h之后細(xì)胞延材料表面砂紙打磨痕跡單向極性伸展,呈梭型與條狀。而MAO與MAO-Ag組共培養(yǎng)牙齦成纖維細(xì)胞伸出偽絲和絲狀偽足。繼續(xù)培養(yǎng)至24h后可見到光滑組細(xì)胞有多方向伸展變化,MAO與MAO-Ag組牙齦成纖維細(xì)胞伸展面積明顯增大。3.細(xì)胞增殖:使用CCK8法檢測(cè)HGFs接種在對(duì)對(duì)照組、光滑組、MAO組以及MAO-Ag組表面1d、3d、5d、7d后的細(xì)胞增殖數(shù)量,發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)1d時(shí),各組的細(xì)胞增殖數(shù)量變化不明顯。但培養(yǎng)3 d、5 d、7 d后MAO組以及MAO-Ag組材料表面的細(xì)胞數(shù)量明顯多于光滑組,且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R783.6

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 程巧愉;謝雨航;王馨怡;李自良;何永文;;牙種植體多種表面處理、改性方法研究及最新進(jìn)展[J];中國(guó)口腔種植學(xué)雜志;2016年04期

2 伍婷;龔成龍;王平;;中國(guó)微弧氧化技術(shù)研究進(jìn)展[J];熱加工工藝;2015年24期

3 崔霖霖;楊建榮;;種植體表面處理研究概述[J];口腔醫(yī)學(xué);2015年02期

4 于乾乾;梁成浩;黃乃寶;李杰蘭;王樹森;賈理男;;Ti-6Al-4V合金氮離子注入后在Tyrode’s體液中的耐蝕耐磨性能[J];材料保護(hù);2014年06期

5 鐘星華;徐淑蘭;周敏;楊爍;姚中雄;王朝;;鈦表面載鈣磷/銀復(fù)合膜層的特征及對(duì)成骨細(xì)胞黏附的影響[J];廣東醫(yī)學(xué);2012年08期

6 張曉偉;劉洪喜;蔣業(yè)華;王傳琦;曾維華;;Ti6Al4V合金表面激光熔覆功能復(fù)合涂層研究進(jìn)展[J];稀有金屬材料與工程;2012年01期

7 崔娟;孫克勤;李霞;張華屏;;人牙齦成纖維細(xì)胞的原代培養(yǎng)及鑒定[J];中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào);2010年03期

8 王衛(wèi)華;;牙種植體材料的理化特征及其臨床應(yīng)用評(píng)價(jià)[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2009年51期

9 劉敏;王繼剛;;NiTi合金上沉積氮化碳薄膜的力學(xué)和血液相容性研究[J];無(wú)機(jī)材料學(xué)報(bào);2009年03期

10 譚兆軍;郭亞峰;;口腔修復(fù)用鈦及鈦合金的理化特性及其生物相容性[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2008年19期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 楊慧;碳離子注入Ti-6Al-4V和TAMZ合金的耐蝕及耐磨行為研究[D];大連海事大學(xué);2012年

，

本文編號(hào)：2400711