【摘要】：第一章 芍藥苷對于非酒精性脂肪肝的小鼠一般狀況、糖脂代謝和胰島素抵抗的影響目的通過研究芍藥苷對飲食誘導(dǎo)的非酒精性脂肪肝小鼠的一般情況、糖脂代謝、炎癥及胰島素抵抗的影響。方法從武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心購買7周齡雄性C57BL/6J野生型小鼠為實(shí)驗(yàn)對象。飼養(yǎng)環(huán)境穩(wěn)定(溫度為：23±2℃,濕度為：60±5%,每天光照時(shí)間為：7am～7pm)。實(shí)驗(yàn)動物可自由進(jìn)食食物和飲用水。適應(yīng)1周后根據(jù)飼料不同將實(shí)驗(yàn)小鼠分為4組：正常對照組(Control, n=10)、正常干預(yù)組(Con+Pa, n=10)、模型組(HF,n=10)、模型干預(yù)組(HF+Pa, n=10)。正常對照組采取普通飲食(ANI-76A飼料：11.5%的脂肪,67.7%的碳水化合物,20.8%的蛋白質(zhì))。正常干預(yù)組是在普通飼料的基礎(chǔ)上添加濃度為0.05%的芍藥苷。模型組小鼠則采用高脂飲食(高脂飼料為：37.4%的脂肪,42.6%的碳水化合物,20.0%的蛋白質(zhì))誘導(dǎo)。模型干預(yù)組則在高脂飼料中添加0.05%的芍藥苷。小鼠可自由進(jìn)食,時(shí)間共24周。每周記錄小鼠的攝食情況,每2周記錄小鼠的體重。動物實(shí)驗(yàn)結(jié)束前一天,小鼠隔夜禁食,第二日檢測小鼠空腹體重和身長,并計(jì)算Lee's指數(shù)：Lee's指數(shù)=體重(g)1/3*1000*身長(cm)-1。對所有小鼠進(jìn)行眶后靜脈叢采血,分離血清(4000 rpm,30 min,4℃)。待小鼠完全麻醉后,迅速處死并分離肝臟組織,計(jì)算肝指數(shù)：肝指數(shù)=肝重(g)/空腹體重(g)*100%。留取肝左葉組織,其中部分固定在10%的中性福爾馬林溶液里,行病理學(xué)分析和實(shí)驗(yàn)。分離出內(nèi)臟脂肪(包括附睪脂肪墊、腹膜后白色脂肪組織和腎周脂肪組織)并稱重,計(jì)算脂肪指數(shù)：脂肪指數(shù)=脂肪重(g)/空腹體重(g)*100%。結(jié)果1、小鼠一般狀況：通過高脂飲食誘導(dǎo)24周之后,我們發(fā)現(xiàn)模型組小鼠出現(xiàn)了中心性肥胖、高血糖癥,胰島素抵抗、血脂異常、炎癥狀態(tài)及肝脂肪變性。到實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),HF組HF+pa組小鼠體重分別達(dá)到41.53±0.799,37.24±0.964,(p0.01), Con+Pa和Control小鼠體重?zé)o明顯差異,說明芍藥苷僅在肥胖狀態(tài)下起到了抑制作用,降低了體重及內(nèi)臟指數(shù)。其他的指標(biāo)如：腹圍、Lee's指數(shù)、肝重和肝指數(shù)、脂肪重和脂肪指數(shù)等一些指標(biāo)也發(fā)生了相應(yīng)變化。芍藥苷有效地防治了這些變化,可以減輕肝重和肝指數(shù)、脂肪重和脂肪指數(shù)等。2、小鼠的糖脂代謝和肝功能變化：高脂飲食誘導(dǎo)的模型組小鼠出現(xiàn)了顯著的高血糖癥、胰島素抵抗、高脂血癥和肝功能損害。高脂飲食組小鼠血清膽固醇水平增加了145.4%((p0.01)),芍藥苷使其降低到68.7%(p0.01),LDL及HDL水平發(fā)生了同樣改變,甘油三酯的變化不明顯。長期的高脂飲食導(dǎo)致ALT及AST水平升高,芍藥苷可使其降至正常水平。3、小鼠空腹血糖及胰島素抵抗：我們的實(shí)驗(yàn)表明,長期的高脂飲食誘導(dǎo)小鼠HOMA-IR指數(shù)比對照組小鼠升高8倍,芍藥苷使HOMA-IR指數(shù)降低至27.3%,空腹血糖、胰島素水平存在同樣的變化。長期的芍藥苷干預(yù)可以緩解胰島素抵抗。4、小鼠肝臟病理改變：持續(xù)高脂飲食使小鼠肝臟出現(xiàn)了明顯的脂肪變性、炎癥、氣球樣變性和壞死。芍藥苷使得脂質(zhì)包涵體的大小及數(shù)量明顯降低。結(jié)論：1、芍藥苷可顯著抑制非酒精性脂肪肝的小鼠體重增加,并降低器官指數(shù)和Lee's指數(shù)；2、芍藥苷可顯著改善非酒精性脂肪肝小鼠脂代謝紊亂,具有明確的護(hù)肝作用；3、芍藥苷明顯地降低非酒精性脂肪肝空腹血糖、胰島素抵抗,提高了機(jī)體對胰島素的敏感性,并改善NAFLD小鼠對于葡萄糖的耐受力；4、芍藥苷可顯著抑制脂質(zhì)異位沉積,進(jìn)而減輕其對肝臟的脂毒性損害。第二章 芍藥苷對非酒精性脂肪肝小鼠的保護(hù)機(jī)制目的：從降脂、抗炎、改善胰島素抵抗方面,探討芍藥苷防治非酒精性脂肪肝的分子機(jī)制。方法：動物模型及分組同第一章部分。采用Real-time PCR法檢測芍藥苷對脂質(zhì)代謝通路相關(guān)靶點(diǎn)及炎癥基因的影響,包括：脂質(zhì)的從頭合成途徑、PPARα介導(dǎo)的脂肪酸氧化代謝、PPARγ介導(dǎo)的脂質(zhì)合成途徑、以及甘油三酯的合成、脂質(zhì)輸出相關(guān)基因表達(dá)、糖代謝相關(guān)基因表達(dá)及炎癥基因(TNF-α、IL-1, IL-6, MCP-1)的表達(dá)。結(jié)果：1、各組小鼠從頭合成途徑的比較：高脂飲食的誘導(dǎo)使小鼠肝臟內(nèi)SREBP-1c、FAS、 ACCα顯著上調(diào),芍藥苷抑制了三者的高表達(dá),降低了脂質(zhì)的從頭合成。2、高脂飲食降低了模型組小鼠肝內(nèi)(PPARα, CPT-1a, ACOX的表達(dá),肝臟脂質(zhì)氧化代謝受阻,肝內(nèi)UCP2的水平在接受高脂飲食后顯著上調(diào)。芍藥苷改變了相關(guān)靶點(diǎn)的變化,增加脂質(zhì)氧化發(fā)揮降脂作用。3、PPARγ介導(dǎo)的脂質(zhì)合成途徑：高脂飲食使PPARγ介導(dǎo)的脂質(zhì)合成途徑增高。給予芍藥苷干預(yù)后,PPARγ表達(dá)基本上回到了正常水平,說明芍藥苷可以下調(diào)PPARγ的表達(dá)影響脂質(zhì)的合成。HMGCR和LDLR也有類似的表達(dá)。4、脂質(zhì)輸出相關(guān)基因LXR-α, ABCA-1在高脂飲食組明顯升高,芍藥苷降低了其表達(dá),作者認(rèn)為可能與小鼠體內(nèi)一系列代償機(jī)制有關(guān)。5、甘油三酯合成的相關(guān)靶點(diǎn)：模型組小鼠肝臟內(nèi)的SCD-1升高了1.1倍,芍藥苷治療后其水平有所下降,但無明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,提示芍藥苷的防治并未降低小鼠肝內(nèi)的SCD-1表達(dá)水平。6、糖代謝相關(guān)基因里PEPCK和G6Pase在模型組小鼠體內(nèi)分別增加了301% and178%,芍藥苷降低了其表達(dá)。7、炎癥相關(guān)基因表達(dá)：長期的高脂飲食導(dǎo)致炎癥基因(如TNF-α、IL-1, IL-6, MCP-1)表達(dá)明顯上調(diào),芍藥苷對其有明顯的抑制作用。結(jié)論：1、芍藥苷可以抑制SREBP-1c、FAS及ACCα,進(jìn)而抑制脂質(zhì)的從頭合成途徑；下調(diào)PPARγ、HMGCR和LDLR,減少脂質(zhì)合成；提高PPARα、CPT-1a、ACOX及UCP2的表達(dá),增加脂質(zhì)氧化；對SCD-1影響不大,故不能降低甘油三酯血癥。2、芍藥苷可抑制炎癥基因的表達(dá),從而發(fā)揮其抗炎作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5

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本文編號：2393405