【摘要】：研究目的： 近年發(fā)現(xiàn)胃腸道存在與營養(yǎng)物質(zhì)代謝密切相關(guān)的甜味覺受體和信號分子,中醫(yī)自古有脾在味為甘的理論,相關(guān)報道指出脾與腸道營養(yǎng)物質(zhì)代謝關(guān)系緊密,同時通過健運脾胃法可調(diào)節(jié)食欲、影響機體能量平衡。與腸道甜味覺信號分子轉(zhuǎn)導功能不謀而合,也與脾在味為甘的理論相應(yīng),因此從腸道甜味信號分子轉(zhuǎn)導的新角度探討脾的功能實質(zhì),有助于揭示脾在味為甘的理論內(nèi)涵,同時在病理狀態(tài)下研究脾與腸道甜味覺受體和關(guān)鍵信號分子的關(guān)系,也將有助于闡明中醫(yī)從脾論治功能性腹瀉有著現(xiàn)實的研究指導意義。 脾在五行屬土,曰稼斂,“萬物土中生”、“萬物土中滅”,脾胃為后天之本,有孕育和滋養(yǎng)萬物之功能。而五臟中脾對應(yīng)的五味中的甘味的作用則主要體現(xiàn)在“土”的孕育和滋養(yǎng)方面。五臟六腑氣血經(jīng)絡(luò)的滋養(yǎng),都要依賴脾胃的運化和散精作用,甘味藥無論補陰、補陽、補氣、補血都要以脾胃的作用才能實現(xiàn)。脾主運化水濕的作用,脾陽不足無力運化水濕,水液不行、聚濕成飲,故臨床上痰飲病,脾胃濕熱病多會選擇健運脾胃、利水滲濕為原則進行治療,在利水滲濕藥里,我們不難發(fā)現(xiàn),眾多中藥其性味多為甘,有健脾利水滲濕之功效,這也是甘味入脾,脾在味為甘的體現(xiàn)。 本論文臨床選取常見疾病功能性腹瀉,其由于腸道功能失調(diào)而引發(fā)的疾病。功能障礙主要是指胃腸道在受外界某些不良刺激下而引起的營養(yǎng)物質(zhì)吸收不良和蠕動障礙,進而對其消化、吸收和分泌等造成不良影響。當腸道內(nèi)的食物不能被完全消化和分解時,消化液就會分泌增多,但是由于蠕動功能異常,消化液吸收減少,糞便內(nèi)溶有的液體增多,導致糞便稀碎,進而導致每天排便的次數(shù)增多,由于不良刺激持續(xù)存在,功能性失調(diào)持續(xù)發(fā)作,最后功能性腹瀉由此形成。 功能性腹瀉當屬中醫(yī)學“泄瀉”范疇,主要病變在于脾胃與腸。其致病原因有外邪、內(nèi)傷及臟腑虛弱等,但關(guān)鍵在于脾臟本身�！皾穸喑晌逍埂薄盁o濕不成瀉”脾臟喜燥惡濕,外邪夾雜濕邪侵入人體,影響脾胃運化功能,致升降失司,運化不利,大腸傳導失常,終致泄瀉。內(nèi)因在于脾臟本身虛弱,脾胃功能失調(diào),脾失運化,氣機升降失常,清濁不分,傳導失司致泄瀉。在發(fā)病和病變過程中外邪傷脾,脾虛生濕,兩者相互影響。脾虛濕盛是泄瀉發(fā)生的關(guān)鍵,脾虛為本,濕盛為標。病位在腸,主臟在脾。同時與肝、腎密切相關(guān)。所以功能性腹瀉必須從脾論治。 研究方法： 臨床部分以功能性腹瀉脾虛證病人為受試對象,實驗部分建立對照研究觀察生理狀態(tài)及病理狀態(tài)下(脾虛證)模型大鼠模型,通過健脾方案進行治療并對治療前后十二指腸粘膜味覺通路中味覺受體第一家族(T1R1、T1R2、T1R3)及信號關(guān)鍵分子Gαgust、TRPM5表達以及免疫組化對Gαgust表達情況進行檢測,嘗試從腸道甜味覺信號分子與物質(zhì)代謝新角度探討脾功能實質(zhì),以揭示脾在味為甘的理論內(nèi)涵。同時通過證實脾、腸道甜味覺信號通路、物質(zhì)代謝三者的密切關(guān)系,揭示中醫(yī)藥從脾論治功能性腹瀉的作用機制。 1臨床研究觀察 臨床研究對象選取廣州中醫(yī)藥大學第一附屬醫(yī)院嶺南名醫(yī)診室門診病人,觀察時間為2012年3月至2013年10月,證型符合者納入；西醫(yī)的診斷嚴格按照標準執(zhí)行；功能性腹瀉每個證型選擇例數(shù)20例。所有受試對象均需簽署知情同意書。脾胃虛弱服用健脾Ⅰ號方,脾胃濕熱組服用健脾Ⅱ號方,每次20ml,3次/日,療程4周。對比分析治療前后中醫(yī)主要及次要癥狀臨床療效。 2臨床實驗研究 胃鏡均采用Olympus公司GIF-XQ260,胃鏡下鉗取治療前后十二指腸粘膜組織2塊,粘膜取出后放入裝有液氮的凍存管里備用,采用Western blot、QPCR法檢測兩組功能性腹瀉患者治療前后十二指腸粘膜味覺通路中味覺受體第一家族(T1R1、T1R2、T1R3)及信號關(guān)鍵分子Gαgust、TRPM5表達以及免疫組化法檢測腸道甜味覺信號分子Gαgust表達情況,取材前需向患者本人或其家屬解釋本次取材目的,患者本人或其家屬同意并在《知情同意書》上簽字后方可進行取材。 3動物實驗研究 SPF級SD大鼠,體重為160-200g,共60只,雌雄各30只,由廣州中醫(yī)藥大學實驗動物中心提供,動物合格證編號SCXK(粵)2013-0020,隨機分成5組：脾虛模型組、脾虛自然恢復(fù)組、脾虛治療組、正常對照組及腎虛對照組。脾虛模型組以厚樸、枳實、大黃煎劑,隔日一次灌喂,同時隔日喂食,造模7周。脾虛自然恢復(fù)組喂養(yǎng)方式同第一組,3周后,改為正常飲食,脾虛自然恢復(fù)時間為4周。脾虛治療組喂養(yǎng)方式同第一組,3周后,予健脾Ⅰ號方煎劑,每日一次灌喂。治療時間為4周。正常對照組正常飼養(yǎng)。腎虛組適應(yīng)性喂養(yǎng)3周后,每日給予2%腺嘌呤混懸液(2g/100ml生理鹽水)2m1,灌胃4周。造模7周后,將大鼠麻醉處死后,動物解剖后,取十二指腸組織,放入凍存管,置于液氮中備用。采用Western blot、QPCR法檢測各組大鼠十二指腸粘膜味覺通路中味覺受體第一家族(T1R1、T1R2、T1R3)及信號關(guān)鍵分子Gαgust、TRPM5表達以及免疫組化法檢測腸道甜味覺信號分子Gα gust表達情況。 研究結(jié)果： 1臨床療效觀察 臨床實驗研究表明在所相對應(yīng)的脾胃虛弱組和脾胃濕熱組中,健脾Ⅰ、Ⅱ號可明顯改善大便性狀、排便次數(shù)等主要癥狀,且能有效改善功能性腹瀉患者的神疲懶言、食欲不振、腸鳴等次要中醫(yī)證候,并在治療過程中未發(fā)生不良反應(yīng)。 2臨床實驗研究 經(jīng)治療后功能性腹瀉患者兩組腸道味覺受體細胞及關(guān)鍵信號分子Gαgust、TRPM5的蛋白表達均有升高。脾胃虛弱組治療前后腸道味覺受體T1R1、T1R2、T1R3、Gα gust及TRPM5比較,有顯著性差異(P0.01)；治療后,脾胃虛弱組腸道味覺受體第一家族(TIR1、T1R2、T1R3)及信號關(guān)鍵分子Gαgust、TRPM5表達與經(jīng)健脾Ⅱ號方治療后的脾胃濕熱組腸道味覺受體第一家族(T1R1、T1R2、T1R3)及信號關(guān)鍵分子Gαgust、 TRPM5表達比較,有顯著性差異(P0.01)。 3動物實驗研究 實驗研究表明,脾虛治療組中味覺受體細胞T1R1、T1R2、 T1R3、Gαgist、TRPM5表達量明顯高于正常對照組,與正常對照組比較,有顯著性差異(P0.01)；脾虛自然恢復(fù)組、脾虛模型組、腎虛對照組中味覺受體細胞TIR1、T1R2、T1R3、Gαgust、 TRPM5表達量均低于脾虛治療組,與脾虛治療組比較,有顯著性差異(P0.01)。 研究結(jié)論： ①功能性腹瀉可從脾論治。②健脾法可以明顯緩解功能性腹瀉患者臨床癥狀,改善患者大便性狀、減少排便次數(shù)等主要臨床癥狀。③健脾法可影響腸道甜味覺受體及關(guān)鍵信號分子表達并干預(yù)TlRs-Gαgust/PKCβ2味覺通路的轉(zhuǎn)導。④脾虛證的發(fā)生機制與腸道甜味覺受體及關(guān)鍵信號分子表達異常有關(guān)。⑤健脾法通過影響腸道甜味受體及其信號分子表達,干預(yù)味覺通路轉(zhuǎn)導,恢復(fù)脾主運化功能,與中醫(yī)“脾在味為甘”的理論一致。
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【學位授予單位】：廣州中醫(yī)藥大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R259

【參考文獻】

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本文編號：2352987