【摘要】：目的：本研究探討在老鼠心肌梗死當(dāng)時(shí)，直接注入攜帶microRNA-21基因的腺病毒載體，實(shí)現(xiàn)過(guò)表達(dá)microRNA-21,通過(guò)過(guò)表達(dá)microRNA-21探討其對(duì)心肌梗死面積大小的影響，為將來(lái)指導(dǎo)臨床預(yù)防與治療心肌梗死提供新的思路。 方法：本研究選取40只體重在250-300g之間的雄性標(biāo)準(zhǔn)SD大鼠，隨機(jī)分為四組，每組10只，分別為：攜帶microRNA-21基因的腺病毒載體組、空基因的腺病毒載體組、生理鹽水組、假手術(shù)組。在相對(duì)無(wú)菌條件下按照標(biāo)準(zhǔn)心梗模型的操作規(guī)范，通過(guò)腹腔注射烏拉坦(0.4ml/100g)麻醉大鼠，待老鼠四肢疼痛感覺(jué)消失后，開(kāi)始切開(kāi)頸部皮膚，鈍性分離頸部肌肉，找到氣管，穿線，呈T字形剪開(kāi)氣管，插管連接呼吸機(jī)，在心電監(jiān)護(hù)下，開(kāi)胸結(jié)扎大鼠左心耳和肺動(dòng)脈圓錐交界處下3-4mm的冠狀動(dòng)脈左前降支，觀察心電圖ST段抬高，遠(yuǎn)端心肌變蒼白30后分鐘，確定完成心肌梗死模型的建立，用微量注射器向心肌梗死周?chē)c(diǎn)注入攜帶microRNA-21基因腺病毒載體、空基因的腺病毒載體、生理鹽水同等劑量100ul（病毒滴度為1.0×109pfu/只），假手術(shù)組穿線不結(jié)扎也不注入目標(biāo)物質(zhì)，關(guān)胸后向腹腔注入40萬(wàn)單位青霉素預(yù)防感染，再繼續(xù)飼養(yǎng)大鼠3天，3天后脫臼處死大鼠，取出心臟，生理鹽水沖洗，冰凍切片通過(guò)TTC染色檢測(cè)心肌梗死面積大�。籖T-qPCR檢測(cè)心肌梗死周?chē)M織microRNA-21基因的表達(dá)量，，然后將所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，得出結(jié)論。 結(jié)果：注射攜帶microRNA-21腺病毒載體組較其他三組microRNA-21表達(dá)量明顯增多（P0.01），其他三組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；注射攜帶microRNA-21腺病毒載體組心肌梗死面積大小較其他組明顯減少（P0.05），其他三組之間無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 結(jié)論：直接心肌內(nèi)注射攜帶microRNA-21基因腺病毒載體可實(shí)現(xiàn)心肌內(nèi)microRNA-21基因的過(guò)表達(dá)，該基因表達(dá)出的microRNA-21在心肌梗死3天后有減少心肌梗死面積大小的作用，具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究證實(shí)。
[Abstract]:Objective: to investigate the effect of overexpression of microRNA-21, on myocardial infarction size by directly injecting adenovirus vector carrying microRNA-21 gene during myocardial infarction in rats. To provide new ideas for clinical prevention and treatment of myocardial infarction in the future. Methods: forty male standard SD rats weighing 250-300g were randomly divided into four groups: adenovirus vector group carrying microRNA-21 gene, adenovirus vector group with empty gene, normal saline group. Sham-operation group. Under the condition of relative sterility, the anesthetized rats were anesthetized by intraperitoneal injection of 0.4ml/100g according to the standard myocardial infarction model. After the pain in the limbs disappeared, the skin of the neck was cut open and the muscles of the neck were obtuse. Trachea was found, perforated, trachea was cut in T shape, intubation was connected to ventilator, left anterior descending branch of coronary artery of 3-4mm was ligated under ECG monitoring, left atrial appendage and pulmonary artery conical junction were ligated in rats, and ST segment elevation of ECG was observed. After 30 minutes of palliation of the distal myocardium, the establishment of myocardial infarction model was determined. The adenovirus vector carrying microRNA-21 gene and the adenovirus vector carrying empty gene were injected into the myocardium around myocardial infarction with micro syringe at three points. The same dose of normal saline 100ul (virus titer was 1.0 脳 109pfu/), the sham operation group did not ligate or inject target material, after closing the chest, 400000 units penicillin was injected intraperitoneally to prevent infection, and then the rats were kept for 3 days. Three days later, the rats were killed by dislocation, the heart was taken out, the size of myocardial infarction was detected by TTC staining. RT-qPCR was used to detect the expression of microRNA-21 gene in the tissue around myocardial infarction. Results: compared with the other three groups, the microRNA-21 expression in the adenovirus carrying microRNA-21 group was significantly increased (P0.01), but there was no significant difference among the other three groups. The size of myocardial infarction in the adenovirus carrying microRNA-21 group was significantly smaller than that in the other groups (P0.05), but there was no significant difference among the other three groups. Conclusion: direct intramyocardial injection of adenovirus vector carrying microRNA-21 gene can realize the overexpression of microRNA-21 gene in myocardium. The microRNA-21 expressed by this gene can reduce the size of myocardial infarction 3 days after myocardial infarction. The specific mechanism needs further study and confirmation.
【學(xué)位授予單位】：皖南醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R542.22

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本文編號(hào)：2324921