【摘要】：目的:急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)是常見的外科急腹癥,可分為輕度AP(mild acute pancreatitis,MAP),中度AP(moderately severe acute pancreatitis,MSAP)和重度AP(severe acute pancreatitis,SAP)。SAP具有發(fā)病急,進展迅速,致死率高的特點,是急腹癥外科中極為兇險的疾病之一。SAP有二個死亡高峰,第一個死亡高峰是由早期的多器官功能衰竭(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)所致,由全身炎癥反應綜合征(inflammatory response syndrome,SIRS)發(fā)展而來。第二個死亡高峰是由晚期的MODS所致,主要是由胰腺組織的壞死感染以及全身的膿毒血癥所誘發(fā)。在人體,腸道除了是非常重要的食物消化和營養(yǎng)吸收場所,同時還是最大的細菌存儲庫。因為腸粘膜屏障(intestinal barrier,IB)的存在,腸道只選擇性地吸收人體需要的營養(yǎng)素,而并不吸收細菌和毒素。SAP是導致腸粘膜屏障功能障礙(intestinal barrier dysfunction,IBD)的重要病因之一,IBD不論在SAP的早期SIRS的發(fā)生,還是在晚期全身膿毒癥的發(fā)生中都起了關(guān)鍵的作用。因此,保護IB,避免IBD的發(fā)生,在SAP的治療中必將具有重要的意義。黃芪多糖(astragalus polysacharin,APS)是具有悠久藥用歷史的中國傳統(tǒng)中藥黃芪的重要天然活性成分。目前研究表明,APS的藥理作用十分寬廣,包括提高免疫功能,延緩衰老,清除氧自由基,控制炎癥反應,抑制細菌、病毒等。本實驗采用�；悄懰徕c逆行注入膽胰管的方法構(gòu)建SAP大鼠模型,應用APS進行干預,探討APS對SAP大鼠腸屏障損傷(intestinal barrier injury,IBI)的干預效果,以期為SAP的治療提供新的思路和方法。方法:75只成年雄性清潔級SD大鼠,按隨機的原則分配到假手術(shù)組(SO組,n=15)、SAP模型組(SAP組,n=15)、APS低劑量干預組(APS1組,n=15),APS中劑量干預組(APS2組,n=15)和APS高劑量干預組(APS3組,n=15)。以0.1 ml/100g的劑量給藥,將5%牛磺膽酸鈉逆行注入膽胰管構(gòu)建SAP模型。SO組的處理:大鼠開腹后,按照造模給藥的手法,將十二指腸拉出體外、展平,辨認出膽胰管后即還納腹腔,逐層關(guān)腹,關(guān)腹后,腹腔注射0.5 ml 0.9%氯化鈉。SAP組的處理:大鼠造模成功后,腹腔注射0.5 ml 0.9%氯化鈉。各APS干預組的處理:大鼠造模成功后,APS1組、APS2組、APS3組分別以100 mg/kg、200 mg/kg、300 mg/kg的劑量,將APS用0.9%氯化鈉配成0.5 ml溶液腹腔注射。各組大鼠于造模及給藥后24h,以30 mg/100g的劑量,腹腔注射10%水合氯醛實施麻醉。腹主動脈采血,收集血清,ELISA法檢測血TNF-α、IL-6、D-乳酸、DAO。取胰腺組織做HE染色,光學顯微鏡下觀察其病理變化。取回腸組織行HE染色,光鏡下觀察腸黏膜組織病理變化;行免疫熒光染色,免疫熒光顯微鏡下定性分析occludin、ZO-1、TLR4蛋白的表達情況;行western blot檢測,半定量分析occludin、ZO-1、TLR4蛋白的表達情況。刮取腸粘液,ELISA法檢測sIgA。結(jié)果:1.SD大鼠造模后的表現(xiàn)SAP組大鼠一般情況差,精神不振,反應力明顯下降。肉眼觀察,腹腔內(nèi)存在大量血性或炎性腹水;胰腺呈現(xiàn)不同程度的水腫、壞死;胰腺、大網(wǎng)膜等部位有皂化斑。鏡下觀察,胰腺實質(zhì)呈現(xiàn)出水腫、出血、壞死的改變,間質(zhì)內(nèi)還可見大量的炎性細胞浸潤。2.小腸組織病理學改變SO組小腸粘膜完好,無缺損,腸上皮細胞無破壞,絨毛排布規(guī)整,刷狀緣光整平滑,覆有一薄層粘液。SAP組小腸粘膜不完整,腸上皮細胞有脫落、壞死,小腸絨毛增粗,排列紊亂,大量炎癥細胞浸潤,毛細血管充血或出血,有輕重不一的斷裂和缺損。與SAP組比較,APS各治療組IBI有不同程度的減輕,以APS3組減輕顯著。3.腸黏膜occludin、ZO-1、TLR4蛋白的表達免疫熒光結(jié)果顯示:SO組occludin、ZO-1蛋白定位于腸絨毛表面,分布連續(xù)、均勻,密度較高;SAP組occludin、ZO-1蛋白表達量極少,散在分布、密度不均勻;與SAP組比較,occludin蛋白在APS1、APS2組表達量略增加,在APS3組表達量明顯增加,ZO-1蛋白在APS1組表達量略增高,在APS2、APS3組表達量明顯增加。TLR4蛋白在各組大鼠腸粘膜組織中均有表達,但表達量存在明顯的差異。與SO組相比,SAP組TLR4蛋白表達量明顯增加;與SAP組相比,APS3組TLR4蛋白的表達量明顯減少。Western blot結(jié)果顯示:與SO組相比,SAP組大鼠腸黏膜occludin和ZO-1表達量明顯下降(P0.01);與SAP組比較,APS2、APS3組大鼠腸黏膜occludin和ZO-1的表達量增加(P0.01)。與SO組相比,SAP組大鼠腸黏膜TLR4的表達增多(P0.01);與SAP組比較,APS2組大鼠腸黏膜TLR4的表達量下降(P0.05),APS3組大鼠腸黏膜TLR4的表達量顯著下降(P0.01)。4.血TNF-α、IL-6、D-乳酸、DAO和腸粘液sIgA的變化與SO組比較,SAP組大鼠血清TNF-α、IL-6含量顯著升高(P0.01);與SAP組相比,APS1、APS2、APS3組大鼠血清TNF-α、IL-6含量顯著下降(P0.01)。與SO組比較,SAP組大鼠血D-乳酸水平顯著升高(P0.01);與SAP組相比,APS2、APS3組大鼠血D-乳酸水平明顯下降(P0.05)。與SO組比較,SAP組大鼠血DAO水平顯著升高(P0.01);與SAP組相比,APS1組大鼠血DAO水平下降(P0.05),APS2、APS3組大鼠血DAO水平明顯下降(P0.01)。與SO組比較,SAP組大鼠腸粘液sIgA水平顯著降低(P0.01);與SAP組相比,APS1組大鼠腸粘液sIgA水平明顯升高(P0.05),APS2、APS3組大鼠腸粘液sIgA水平顯著升高(P0.01)。結(jié)論:1.�；悄懰徕c逆行注入膽胰管可成功構(gòu)建SAP大鼠模型,該方法重復性好,其誘導的SAP在發(fā)病過程和病理改變方面均與人的SAP接近。2.SAP可導致大鼠IBD,包括機械屏障功能障礙和免疫屏障功能障礙,具體表現(xiàn)為腸粘膜上皮的壞死、脫落、缺損,occludin、ZO-1蛋白的表達量下降,sIgA的分泌減少,TLR4蛋白的表達量升高。3.APS腹腔注射可減輕SAP大鼠的IBI。其機制可能是通過上調(diào)occludin和ZO-1的轉(zhuǎn)錄和翻譯,促進sIgA的分泌,下調(diào)TLR4的轉(zhuǎn)錄和翻譯來完成。APS有望成為治療SAP所致IBI的一個重要方法。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：吉林大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
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本文編號：2323918
