【摘要】：目的:本實驗以中醫(yī)“腎主骨,生髓”理論為基礎(chǔ),研究左歸丸與右歸丸對去卵巢大鼠骨髓成骨-成脂分化的影響,進(jìn)一步探討中醫(yī)“髓”與“骨”的關(guān)系以及防治PMOP可能存在的機制。材料與方法:SPF級2月齡雌性大鼠65只,依據(jù)體重隨機分層的方法,分為空白組10只,假手術(shù)組10只,模型組45只。采用10%水合氯醛按0.3m L/100g體重進(jìn)行腹腔麻醉,除空白組外,模型組從背部入路切除雙側(cè)卵巢,其中假手術(shù)組只切除卵巢周圍適量的脂肪組織,不切除雙側(cè)卵巢,最后逐層縫合,切口處給予青霉素肌肉注射,預(yù)防感染。術(shù)后7天,依據(jù)大鼠存活情況,分為空白組(KB)、假手術(shù)組(SHAM)、模型組(OVX)、補佳樂組(BJL)、左歸丸組(ZGW)、右歸丸組(YGW),共6組。經(jīng)過12周給藥治療后,去除由于手術(shù)、灌胃等其它原因?qū)е滤劳龅拇笫?只,共納入本次實驗的大鼠為60只,取材對指標(biāo)進(jìn)行檢測。全部實驗大鼠取材前24h禁止喂食,前2h禁止給藥,稱重并麻醉,對大鼠進(jìn)行腹主動脈取血,在室溫下靜置2h后,離心,分離血清,凍存于-80℃冰箱,用于血脂檢測;取大鼠第2、3、4節(jié)腰椎并用濕潤的紗布和錫箔紙包裹好,凍存于-80℃冰箱,用于雙能X線骨密度測量;取大鼠股骨,并將附著于其上的肌肉、筋膜等組織剝離、剔除,置于4%多聚甲醛溶液中固定,然后投入到脫鈣液中脫鈣約21天,進(jìn)行石蠟切片,用于骨組織形態(tài)學(xué)HE染色,觀察骨髓脂肪細(xì)胞數(shù)目;取大鼠股骨,剪斷股骨兩頭,暴露骨髓腔,用PBS緩沖液反復(fù)沖洗髓腔,沖出骨髓,直至骨干發(fā)白透明。將沖出的骨髓離心,棄去上層PBS,將裝有骨髓的離心管凍存于-80℃冰箱,分別采用實時熒光定量PCR法和蛋白印跡法檢測大鼠骨髓組織成骨指標(biāo)Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN和成脂指標(biāo)PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4基因和蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果:1.左歸丸與右歸丸對去卵巢大鼠第2、3、4節(jié)腰椎骨密度的影響各組大鼠第2、3、4節(jié)腰椎骨密度檢測結(jié)果如下:給藥12周后,與空白組比較,假手術(shù)組BMD表達(dá)量相當(dāng),無顯著性差異(P0.05),模型組BMD表達(dá)量降低,有顯著性差異(P0.01);與模型組比較,補佳樂組、左歸丸組、右歸丸組BMD表達(dá)量有所升高,有顯著性差異(P0.01);與補佳樂組比較,左歸丸組BMD表達(dá)量相當(dāng),無顯著性差異(P0.05),右歸丸組BMD升高不及補佳樂組,有顯著性差異(P0.01);與左歸丸組比較,右歸丸組BMD升高不及左歸丸組,有顯著性差異(P0.01)。左歸丸與右歸丸均可以提高去卵巢大鼠BMD,其中左歸丸組效果優(yōu)于右歸丸組。2.左歸丸與右歸丸對去卵巢大鼠血脂的影響各組大鼠血脂檢測結(jié)果如下:給藥12周后,與空白組比較,假手術(shù)組血清TC、TG、LDL-C、HDL-C表達(dá)量相當(dāng),無顯著性差異(P0.05),模型組血清TC、TG、LDL-C表達(dá)量降低,HDL-C表達(dá)量升高,有顯著性差異(P0.01);與模型組比較,補佳樂組、左歸丸組、右歸丸組TC、TG、LDL-C表達(dá)量有所降低,HDL-C表達(dá)量升高,有顯著性差異(P0.01或P0.05)。與補佳樂組比較,左歸丸組、右歸丸組TC、TG、LDL-C、HDL-C表達(dá)量相當(dāng),無顯著性差異(P0.05);與左歸丸組比較,右歸丸組TC、TG、LDL-C、HDL-C表達(dá)量相當(dāng),無顯著性差異(P0.05)。3.左歸丸與右歸丸對去卵巢大鼠骨髓組織Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN的影響各組大鼠骨髓組織成骨m RNA檢測結(jié)果如下:給藥12周后,與空白組比較,假手術(shù)組Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPNm RNA表達(dá)量相當(dāng),無顯著性差異(P0.05),模型組Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPNm RNA表達(dá)量降低,有顯著性差異(P0.01);與模型組比較,補佳樂組、左歸丸組、右歸丸組Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN m RNA表達(dá)量有所升高,有顯著性差異(P0.01或P0.05);與補佳樂組比較,左歸丸組Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPNm RNA表達(dá)量相當(dāng),無顯著性差異(P0.05),右歸丸組Runx2、CollagenⅠm RNA表達(dá)量升高不及補佳樂組,有差異(P0.05);與左歸丸組比較,右歸丸組CollagenⅠm RNA表達(dá)量升高不及左歸丸組,有差異(P0.05)。各組大鼠骨髓組織成骨蛋白檢測結(jié)果如下:給藥12周后,與空白組比較,假手術(shù)組Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表達(dá)量相當(dāng),無顯著性差異(P0.05),模型組Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表達(dá)量降低,有顯著性差異(P0.01);與模型組比較,補佳樂組、左歸丸組、右歸丸組Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表達(dá)量有所升高,有顯著性差異(P0.01或P0.05);與補佳樂組比較,左歸丸組Runx2、CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表達(dá)量相當(dāng),無顯著性差異(P0.05),右歸丸組CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表達(dá)量升高不及補佳樂組,有顯著性差異((P0.01或P0.05);與左歸丸組比較,右歸丸組CollagenⅠ、ALP、OPN蛋白表達(dá)量不及左歸丸組,有顯著性差異(P0.01或P0.05)。4.左歸丸與右歸丸對去卵巢大鼠股骨近端骨髓脂肪細(xì)胞數(shù)目的影響各組大鼠股骨近端HE染色結(jié)果如下:給藥12周后,與空白組比較,假手術(shù)組股骨近端骨小梁排列致密整齊,形態(tài)完整,骨髓中有少量的脂肪細(xì)胞,無顯著性差異(P0.05),模型組骨小梁結(jié)構(gòu)散亂稀疏變細(xì),股骨近端骨髓脂肪細(xì)胞數(shù)目增多,有顯著性差異(P0.01);與模型組比較,補佳樂組、左歸丸組、右歸丸組股骨近端骨髓脂肪細(xì)胞數(shù)目明顯減少,有顯著性差異(P0.01);與補佳樂組比較,左歸丸組股骨近端骨髓脂肪細(xì)胞數(shù)目相當(dāng),無顯著性差異(P0.05),右歸丸組股骨近端骨髓脂肪細(xì)胞數(shù)目增多,有顯著性差異(P0.01);與左歸丸組比較,右歸丸組股骨近端骨髓脂肪細(xì)胞數(shù)目增多,有顯著性差異(P0.01)。5.左歸丸與右歸丸對去卵巢大鼠骨髓組織PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4的影響各組大鼠骨髓組織成脂m RNA檢測結(jié)果如下:給藥12周后,與空白組比較,假手術(shù)組PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4m RNA表達(dá)量相當(dāng),無顯著性差異(P0.05),模型組PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4m RNA表達(dá)量升高,有顯著性差異(P0.01);與模型組比較,補佳樂組、左歸丸組、右歸丸組PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4m RNA表達(dá)量有所降低,有顯著性差異(P0.01或P0.05);與補佳樂組比較,左歸丸組PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4m RNA表達(dá)量相當(dāng),無顯著性差異(P0.05),右歸丸組C/EBPαm RNA表達(dá)量升高,有顯著性差異(P0.01);與左歸丸組比較,右歸丸組C/EBPαm RNA表達(dá)量升高,有顯著性差異(P0.01)。各組大鼠骨髓組織成脂蛋白檢測結(jié)果如下:給藥12周后,與空白組比較,假手術(shù)組PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4蛋白表達(dá)量相當(dāng),無顯著性差異(P0.05),模型組PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4蛋白表達(dá)量升高,有顯著性差異(P0.01);與模型組比較,補佳樂組、左歸丸組、右歸丸組PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4蛋白表達(dá)量有所降低,有顯著性差異(P0.01或P0.05);與補佳樂組比較,左歸丸組PPARγ、C/EBPβ、C/EBPα、FABP4蛋白表達(dá)量相當(dāng),無顯著性差異(P0.05),右歸丸組PPARγ、C/EBPβ蛋白表達(dá)量升高,有顯著性差異(P0.01或P0.05);與左歸丸組比較,右歸丸組PPARγ、C/EBPβ蛋白表達(dá)量升高,有顯著性差異(P0.01或P0.05)。結(jié)論:1.實驗大鼠切除雙側(cè)卵巢后,腰椎骨密度降低;左歸丸與右歸丸可有效改善去卵巢骨質(zhì)疏松癥大鼠骨密度的流失,防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥。2.實驗大鼠切除雙側(cè)卵巢后,出現(xiàn)血脂代謝紊亂,骨髓向脂肪細(xì)胞分化增強。左歸丸與右歸丸可有效改善去卵巢骨質(zhì)疏松大鼠脂代謝紊亂,促進(jìn)成骨分化,抑制成脂分化,調(diào)控骨髓成骨-成脂分化平衡。3.絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的病機之一與骨髓成骨-成脂分化失衡有關(guān)。左歸丸與右歸丸可以有效防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥,其作用機理與其調(diào)控骨髓成骨-成脂分化平衡有關(guān),本研究為臨床應(yīng)用左歸丸與右歸丸防治絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥提供了一定的實驗依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：遼寧中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5
【參考文獻(xiàn)】
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本文編號：
2294651
