【摘要】：目的：肌萎縮側索硬化（amyotrophic lateral sclerosis，ALS）是一種病因未明神經(jīng)系統(tǒng)變性病，選擇性損傷大腦皮層運動神經(jīng)元、腦干運動神經(jīng)核神經(jīng)元、脊髓前角a運動神經(jīng)元，導致進行性加重的肌肉無力、萎縮，最終因呼吸肌麻痹死亡。有許多流行病學的危險因素，例如暴露于重金屬、電或機械損傷、劇烈的體育活動都會影響到肌萎縮側索硬化（ALS）的發(fā)病。但是還有兩個廣為接受的危險因素：年齡和性別。研究表明男性發(fā)病率高于女性，49歲以前男女發(fā)病率之比為3.98:1，55歲以后男女發(fā)病率之比為1.63:1；且男性發(fā)病早于女性[1]；家族性ALS動物模型SOD1G93A轉基因小鼠的發(fā)病時間雄性早于雌性，生存時間雌性大于雄性[2]，說明性別可能是其ALS發(fā)病的危險因素，性激素可能對ALS發(fā)病過程中神經(jīng)元的變性、丟失發(fā)揮作用。 另有研究發(fā)現(xiàn)ALS患者男性以肢體發(fā)病為主，女性以球部發(fā)病為主[1]�？夏岬喜∈且环NX-連鎖的雄激素受體基因突變引起的運動神經(jīng)元病，主要影響高位頸髓及延髓的下運動神經(jīng)元，以上肢發(fā)病常見[3]。家族性肌萎縮側索硬化動物模型（SOD1G93A轉基因小鼠）的特征性臨床表現(xiàn)為成年（12周左右）發(fā)病，后肢運動功能障礙并逐漸進展至終末期（17-20周）[4]。目前有關雄激素受體（AR）在ALS小鼠脊髓表達情況的報道少見。 本實驗應用免疫熒光的方法，觀察家族型肌萎縮側索硬化動物模型（SOD1G93A轉基因小鼠）病程腰段脊髓前角細胞雄激素受體的表達與分布情況,應用免疫組化的方法計數(shù)家族型肌萎縮側索硬化動物模型（SOD1G93A轉基因小鼠）病程腰段脊髓前角運動神經(jīng)元數(shù)目及觀察運動神經(jīng)元雄激素受體的表達情況,旨在探討ALS的發(fā)病過程中雄激素受體的作用，為ALS發(fā)病機制研究提供一定的理論基礎。 方法： 1模型建立及分組 B6SJL-BTg（SOD1G93A）1Gur/J半合子雄鼠與B6SJLF1/J+/+雌鼠1:1雜交，在恒溫、恒濕、12h光照/黑暗交替循環(huán)、無特殊病原菌的（Specificpathogen free， SPF）環(huán)境中，喂以滅菌的SPF級顆粒型鼠類飼料及滅菌水，經(jīng)剪尾尖提取DNA、PCR擴增后、瓊脂糖凝膠電泳結果示（Fig.1）：位于200-300bp之間的條帶（236bp）為mSOD1的PCR產(chǎn)物，此種小鼠為SOD1G93A轉基因陽性小鼠。沒有此條帶為非mSOD1的PCR產(chǎn)物，為非SOD1G93A轉基因鼠。 參考Vercelli A[5]等的1-5分評分法進行評分,4分為發(fā)病時間，1分為死亡時間,60天為癥狀前期，4分為癥狀早期，1分為終末期。各對照組為同窩、同月齡未轉人突變的SOD1基因的小鼠。每組雌雄各3只小鼠。 2取材 10%水合氯醛350mg/kg腹腔注射麻醉后，心臟灌注4%多聚甲醛固定20min，取小鼠腰段脊髓，以4%多聚甲醛固定48h。 3免疫熒光 后固定的組織塊震蕩切片25μm厚，應用免疫熒光三標染色的方法在激光共聚焦顯微鏡下觀察雄激素受體在SOD1G93A轉基因小鼠腰段脊髓前角中的細胞定位。 4免疫組化染色 后固定的組織塊震蕩切片25μm厚，應用ABC方法進行SMI-32及AR免疫組化染色，計數(shù)脊髓前角運動神經(jīng)元數(shù)量及觀察運動神經(jīng)元AR受體表達。脊髓前角α運動神經(jīng)元數(shù)量的計數(shù)方法：對連續(xù)切片的每第五張切片的雙側脊髓前角的α運動神經(jīng)元計數(shù)，每段腰髓觀察10個切片。被計數(shù)的α運動神經(jīng)元標準為：位于前角、直徑＞25μm，細胞核清楚[6]。 5統(tǒng)計學處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計處理。采用均數(shù)標準差表示腰膨大脊髓切片兩側神經(jīng)元計數(shù)之和，三組數(shù)據(jù)的比較采用單因素方差分析，兩組數(shù)據(jù)的比較采用兩個獨立樣本比較的t檢驗，以a=0.05為顯著性檢驗標準。 結果： 1模型建立 如Fig.1所示：位于200-300bp之間的條帶（236bp）為mSOD1的PCR產(chǎn)物，此種小鼠為SOD1G93A轉基因陽性小鼠。沒有此條帶為非mSOD1的PCR產(chǎn)物，為非SOD1G93A轉基因鼠。 2免疫熒光 SOD1G93A轉基因小鼠脊髓前角運動神經(jīng)元有雄激素受體表達，且位于胞漿，而星型膠質細胞和小膠質細胞均無雄激素受體表達；對照組與ALS小鼠一致（Fig.2）。 3免疫組化染色(SMI-32) SOD1G93A轉基因雄性小鼠在癥狀前期、發(fā)病期、終末期神經(jīng)元計數(shù)分別為20.672.92、14.732.84、8.472.72，各組比較P值分別為0.000、0.000、0.000，差別均有統(tǒng)計學意義（Fig.3，Table1）。SOD1G93A轉基因雌性小鼠在癥狀前期、發(fā)病期、終末期神經(jīng)元計數(shù)分別為20.603.20、17.473.40、8.473.44，各組比較P值分別為0.015、0.000、0.000，差別均有統(tǒng)計學意義（Fig.4，Table2）。雄雌對比，P值分別為0.953、0.024、1.000，僅發(fā)病期差別有統(tǒng)計學意義（Fig.5，Table3）。 4免疫組化染色(AR) 4.1與免疫熒光結果一致，SOD1G93A轉基因小鼠AR表達于脊髓前角運動神經(jīng)元，且位于胞漿，胞漿著色均勻一致，隨病情進展，未出現(xiàn)顆粒樣沉積。對照組與ALS小鼠一致（Fig.6）。 4.2SOD1G93A轉基因雄性小鼠在癥狀前期、發(fā)病期、終末期神經(jīng)元計數(shù)分別為20.871.81、14.931.67、8.671.23，各組比較P值分別為0.000、0.000、0.000，差別均有統(tǒng)計學意義（Fig.7，Table4）。SOD1G93A轉基因雌性小鼠在癥狀前期、發(fā)病期、終末期神經(jīng)元計數(shù)分別為20.801.97、17.672.13、8.671.59，各組比較P值分別為0.000、0.000、0.000，差別均有統(tǒng)計學意義（Fig.8，Table5）。雄雌對比，P值分別為0.924、0.001、1.000，僅發(fā)病期差別有統(tǒng)計學意義（Fig.9，Table6）。5免疫組化(SMI-32)和免疫組化(AR)的比較 SOD1G93A轉基因雄性小鼠各期SMI-32免疫陽性的神經(jīng)元計數(shù)與AR免疫陽性的神經(jīng)元計數(shù)相比，P值分別0.823、0.816、0.798，差異均無統(tǒng)計學意義（Fig.10，Table7）。SOD1G93A轉基因雌性小鼠P值分別為0.839、0.848、0.840，差異均無統(tǒng)計學意義（Fig.11，Table8）。 結論： 1.正常小鼠腰段脊髓前角細胞：雄激素受體（AR）在運動神經(jīng)元表達，且位于胞漿，星型膠質細胞及小膠質細胞均無表達。 2.SOD1G93A轉基因小鼠腰段脊髓前角細胞：雄激素受體（AR）在運動神經(jīng)元表達，且位于胞漿，星型膠質細胞及小膠質細胞均無異常表達。 3.SOD1G93A轉基因小鼠腰段脊髓前角雄激素受體（AR)逐漸減少,與病程進展中運動神經(jīng)元數(shù)目減少有關。
[Abstract]:......
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R744

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 王海青;楊崇禮;;雄激素的療愈原理[J];天津醫(yī)藥;1986年05期

2 崔毓桂;雄激素受體研究方法及其進展[J];實用男科雜志;1996年03期

3 劉穎,陸一帆;運動對制動大鼠骨骼肌中雄激素受體的影響[J];中國康復醫(yī)學雜志;2001年04期

4 張子彥;雄激素受體的研究進展[J];國外醫(yī)學(分子生物學分冊);2002年02期

5 江軍,金錫御,靳風爍,王洛夫;雄激素對大鼠前列腺不同分葉雄激素受體及其mRNA表達的影響[J];第三軍醫(yī)大學學報;2003年13期

6 陳蕾蕾,姚兵;睪丸外組織雄激素受體的分布及檢測[J];中華男科學;2003年01期

7 梁軍;雄激素對淋巴細胞的調節(jié)[J];現(xiàn)代免疫學;2004年03期

8 王洛夫,江軍;雄激素受體在雄激素非依賴性前列腺癌中的作用[J];第三軍醫(yī)大學學報;2004年24期

9 楊潔,張秋養(yǎng),葛玲,邱曙東;青春期大鼠實驗性精索靜脈曲張對附睪雄激素受體的影響[J];西安交通大學學報(醫(yī)學版);2005年01期

10 朱院山;蔡力群;;雄激素對男性性別、行為和認知的影響(英文)[J];中南大學學報(醫(yī)學版);2006年02期

相關會議論文 前10條

1 謝駿逸;陳力;;雄激素及其相關因素對痤瘡影響的研究進展[A];2010全國中西醫(yī)結合皮膚性病學術會議論文匯編[C];2010年

2 游冬青;肖錦松;趙芳;;人雄激素受體激素結合區(qū)的克隆表達與活性研究[A];第三屆全國現(xiàn)代生物物理技術學術討論會論文摘要匯編[C];2000年

3 邱云霞;曲燕;李相如;于建榮;;雄激素受體抵抗1例[A];第5次全國中西醫(yī)結合男科學術會議論文匯編暨男科提高班講義[C];2007年

4 田軍;陶天遵;王凱夫;高峰;單雨;李磊;;雄性大鼠成骨細胞內雄激素受體表達的研究[A];中華醫(yī)學會第三次全國骨質疏松和骨礦鹽疾病學術會議暨骨質疏松診斷技術繼續(xù)教育學習班論文匯編[C];2004年

5 李霖;李紅;尹雪瑤;潘倩倩;吳芳;;雄激素受體在波動性高糖致人臍靜脈內皮細胞損傷中的作用[A];中華醫(yī)學會第十一次全國內分泌學學術會議論文匯編[C];2012年

6 溫俊平;陳剛;薛瑩;;雄激素不敏感綜合征的臨診應對[A];中華醫(yī)學會第十二次全國內分泌學學術會議論文匯編[C];2013年

7 劉娜;賈影;戚基萍;;雄激素受體在乳腺癌中的表達[A];中華醫(yī)學會病理學分會2010年學術年會日程及論文匯編[C];2010年

8 郭東星;張華屏;劉立民;艾曉杰;喬中東;;核因子--κB在雄激素處理的巨噬細胞中的表達[A];動物學專輯——上海市動物學會2002年年會論文集[C];2002年

9 張曼娜;孫首悅;張惠杰;顧衛(wèi)瓊;洪潔;劉建民;王衛(wèi)慶;寧光;李小英;;4例雄激素受體不敏感型綜合征患者的分子遺傳學研究[A];中華醫(yī)學會第二屆糖尿病及性腺疾病學術會議論文集[C];2012年

10 桂耀庭;;雄激素受體在精子發(fā)生的作用及其分子機制[A];中華醫(yī)學會生殖醫(yī)學分會人類精子庫管理學組第三屆年會全國男性生殖醫(yī)學和精子庫管理新進展第四次研討會論文匯編[C];2012年

相關重要報紙文章 前4條

1 張超群 李幼玲 范曉莉;山西醫(yī)大第一醫(yī)院研究發(fā)現(xiàn)：雄激素受體與再障貧血有關[N];中國醫(yī)藥報;2005年

2 白毅;新型雄激素受體調節(jié)劑有望治療前列腺癌[N];中國醫(yī)藥報;2008年

3 陳茂j　余寧寧;ASC-J9為肌肉萎縮癥治療帶來曙光[N];中國醫(yī)藥報;2007年

4 美國紐約羅切斯特大學教授 張傳祥;雄激素 膀胱癌研究新目標[N];健康報;2007年

相關博士學位論文 前10條

1 莫文娟;前列腺癌雄激素轉錄調控網(wǎng)絡的研究[D];復旦大學;2010年

2 趙靜雯;雄激素受體調控的eRNA在去勢抵抗型前列腺癌enzalutamide抵抗中的作用研究[D];吉林大學;2016年

3 盧益甄;前列腺癌遺傳多態(tài)性風險位點功能及機制分析[D];浙江大學;2016年

4 潘家驊;雄激素/AR-Twist2軸的調控及其促進前列腺癌惡性侵襲的機制研究[D];上海交通大學;2015年

5 蔣璐頻;雄激素/雄激素受體軸調控Nanog基因對腫瘤細胞干性影響及機制研究[D];第三軍醫(yī)大學;2016年

6 浦洋;免疫治療聯(lián)合去勢療法治療前列腺癌的效果和機制研究[D];華南理工大學;2016年

7 田申;母親高雄激素對子代糖代謝的影響及其表觀遺傳機制研究[D];浙江大學;2015年

8 馬金萍;雄激素受體與缺血性心腦血管病關系的臨床和基礎初步研究[D];天津醫(yī)科大學;2013年

9 田晶;雄激素受體在前列腺癌干細胞中的作用及表觀遺傳學調節(jié)機制的實驗研究[D];天津醫(yī)科大學;2011年

10 王振中;雄激素受體介導的青蒿酯對前列腺癌生長的抑制效應研究[D];南京醫(yī)科大學;2017年

相關碩士學位論文 前10條

1 張聰哲;LSD1介導的組蛋白H3K4去甲基化對雄激素受體調控靶基因轉錄的影響[D];復旦大學;2013年

2 楊木易;雌激素通過誘導雄激素抑制性基因SOX4的表達促進前列腺癌細胞的惡性進展[D];山東大學;2015年

3 王琰;二甲雙胍通過雄激素受體途徑抑制雄激素依賴性和非依賴性前列腺癌[D];第三軍醫(yī)大學;2015年

4 戴明莉;金錢魚雄激素受體的克隆及其表達模式的研究[D];廣東海洋大學;2015年

5 徐鵬;醋酸阿比特龍治療轉移去勢抵抗性前列腺癌早期療效和安全性評價[D];吉林大學;2016年

6 郭廣柱;3- (4-氟苯基)-1H-吡唑類雄激素受體拮抗劑的合成及其活性評價[D];山東大學;2016年

7 陳立黎;雌、雄激素對羅非魚性別分化和性腺基因表達的影響[D];西南大學;2016年

8 吳萬明;雄激素受體在乳腺癌中的表達及意義[D];暨南大學;2016年

9 馬一鳴;雄激素受體在周期性機械牽拉調控骨骼肌C2C12細胞增殖中的作用及機制[D];上海體育學院;2016年

10 李光磊;前列腺癌相關成纖維細胞中雄激素受體促進前列腺癌生長及侵襲轉移能力的研究[D];濱州醫(yī)學院;2015年

，

本文編號：2285809