【摘要】：研究背景 心室顫動(dòng)(簡(jiǎn)稱室顫)是心源性猝死最常見的原因。近年來,隨著電生理標(biāo)測(cè)技術(shù)的進(jìn)步和對(duì)心臟顫動(dòng)的激動(dòng)特點(diǎn)研究的深入,對(duì)室顫?rùn)C(jī)制的認(rèn)識(shí)有了很大進(jìn)展,但快速心律失常要維持存在,折返激動(dòng)仍是其最主要的機(jī)制。構(gòu)成折返環(huán)的條件包括：①解剖上客觀存在折返環(huán)；②單向傳導(dǎo)阻滯；③傳導(dǎo)速度和不應(yīng)期的不一致。在這3個(gè)基本條件中,可興奮組織的不應(yīng)期是由單個(gè)細(xì)胞的電活動(dòng)決定的,而單個(gè)細(xì)胞的興奮要擴(kuò)布到相鄰的細(xì)胞,進(jìn)而引起整個(gè)心肌組織的同步興奮,則是由細(xì)胞間電耦聯(lián)決定的,而細(xì)胞間電耦聯(lián)通過縫隙連接(gap junction,GJ)來完成,GJ是組織被動(dòng)電活動(dòng)的主要物質(zhì)基礎(chǔ)。 細(xì)胞間GJ有兩種連接方式：端—端(end-to-end)連接和側(cè)—側(cè)(side-to-side)連接,心肌各向異性的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)就取決于GJ的連接方式。正常心肌呈梭狀排列,長(zhǎng)軸方向GJ中端—端連接比例大,結(jié)合處阻抗較低,離子電流易于通過,電激動(dòng)傳導(dǎo)速度快,而短軸方向GJ中側(cè)—側(cè)連接比例大,電流通過結(jié)合處阻抗較大,電激動(dòng)傳導(dǎo)速度慢,呈“之”字形擴(kuò)布,激動(dòng)被分隔而碎裂,出現(xiàn)尖銳錯(cuò)折樣傳導(dǎo),易于形成折返。側(cè)—側(cè)傳導(dǎo)比例的增加,理論上有助于心律失常的產(chǎn)生及維持。 縫隙連接蛋白(connexins, Cx)是構(gòu)成細(xì)胞間GJ的亞單位。Cx表達(dá)水平的降低和分布異常,可使心肌整體的傳導(dǎo)速度減慢,傳導(dǎo)的各向異性改變,從而形成折返環(huán)路的解剖學(xué)基礎(chǔ),誘發(fā)心律失常。在成年心室,GJ僅含有Cx43而且主要分布在閏盤內(nèi)。我們前期的研究已經(jīng)證實(shí),心肌Cx43表達(dá)減少以及分布和排列紊亂造成的GJ重構(gòu)參與了室顫的發(fā)生與維持,而縫隙連接增強(qiáng)劑ZP123可以通過減少或逆轉(zhuǎn)Cx43的降解并使其分布排列趨于均一,從而降低除顫能量,使室顫易于轉(zhuǎn)復(fù)。 Cx43屬于磷蛋白,GJ通道的功能也受Cx43磷酸化的影響。在心肌細(xì)胞,磷酸化的Cx43(p-Cx43)才能構(gòu)成有功能的GJ,而去磷酸化的Cx43不具備GJ的功能。那么,室顫的發(fā)生與轉(zhuǎn)復(fù)過程中是否存在Cx43磷酸化水平的改變?Cx43磷酸化水平的改變對(duì)于室顫的維持與轉(zhuǎn)復(fù)又有著怎樣的影響作用?室顫時(shí)ZP123對(duì)縫隙連接的增強(qiáng)作用是否也包括上調(diào)Cx43的磷酸化水平?這些問題在我們前期的研究中未作深入探索,目前也未見相關(guān)報(bào)道。 電活動(dòng)的均一性傳導(dǎo)除了依賴于心肌細(xì)胞間的電偶聯(lián),還受細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)的影響。正常生理狀態(tài)下,心臟ECM的合成與降解維持著一動(dòng)態(tài)平衡,其成分的過度生成或異常降解都可能會(huì)破壞心肌的力學(xué)性質(zhì)和電生理結(jié)構(gòu),影響電活動(dòng)的均一性傳導(dǎo)。近年來研究表明,基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)與基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制因子(tissue inhibitom of metalloproteinases, TIMPs)的調(diào)節(jié)對(duì)ECM的合成與降解起著非常重要的作用,在心肌組織中MMPs與TIMPs存在嚴(yán)格的平衡。這就提示,心肌MMPs/TIMPs比例失調(diào)有可能參與了室顫的發(fā)生與維持。但是MMPs與TIMPs在室顫的過程中究竟變化如何?對(duì)室顫的發(fā)生維持及預(yù)后又發(fā)揮什么樣的作用?這些問題都不清楚,都非常值得研究和探索。 血管緊張素Ⅱ (AngⅡ)是腎素一血管緊張素系統(tǒng)(renin-angiotensin system, RAS)的主要活性成分,既往的研究結(jié)果證實(shí)其廣泛參與了高血壓、左室肥厚、心力衰竭等許多心血管疾病的發(fā)生和發(fā)展。近年來的研究還發(fā)現(xiàn),Ang Ⅱ能夠影響左室心肌的各項(xiàng)電生理指標(biāo)而參與惡性室性心律失常的發(fā)生,而傳統(tǒng)的降壓藥物血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑(ACEI)和血管緊張素受體拮抗劑(ARB)則能通過抑制循環(huán)與局部心肌組織Ang Ⅱ的生物學(xué)效應(yīng),減少惡性室性心律失常的發(fā)生。目前關(guān)于AngⅡ致室性心律失常的具體機(jī)制尚不明確,但有研究報(bào)道,AngⅡ可以減少Cx43的表達(dá),減慢心肌細(xì)胞間的電傳導(dǎo),提示AngⅡ通過引起心肌細(xì)胞間的GJ重構(gòu)而導(dǎo)致心肌電生理的異常。那么,這會(huì)不會(huì)就是Ang II參與室顫維持的蛋白分子機(jī)制呢? 因此,本研究擬通過建立長(zhǎng)時(shí)程室顫動(dòng)物模型,對(duì)以上未知的問題進(jìn)行深入的探討。 目的 一、觀察心肌細(xì)胞膜Cx43的表達(dá)、分布及其磷酸化水平在室顫發(fā)生維持與轉(zhuǎn)復(fù)過程中的動(dòng)態(tài)變化。 二、觀察心肌MMP-2/TIMP-2在室顫發(fā)生維持及轉(zhuǎn)復(fù)過程的表達(dá)變化,并分析其與室顫預(yù)后的關(guān)系。 三、觀察縫隙連接增強(qiáng)劑ZP123在不同室顫時(shí)程對(duì)Cx43的表達(dá)、分布及磷酸化水平的影響作用。 四、通過分析ZP123對(duì)除顫閾值、除顫成功率、ROSC和存活率等指標(biāo)的影響,評(píng)價(jià)其對(duì)室顫轉(zhuǎn)復(fù)的作用效果。 五、探尋AngⅡ參與室性心律失常的蛋白分子機(jī)制。 方法 一、通過建立長(zhǎng)時(shí)程室顫動(dòng)物模型,觀察心肌Cx43及其磷酸化水平、MMP-2與TIMP-2在室顫發(fā)生與維持過程中的動(dòng)態(tài)變化 (一)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備 1.隨機(jī)選取成年家犬32只,雌雄不限。3%戊巴比妥鈉(30mg/kg)耳緣靜脈靜注麻醉,氣管插管,連接呼吸機(jī),監(jiān)測(cè)心電圖。 2.所有動(dòng)物行經(jīng)胸超聲檢查,測(cè)量左房?jī)?nèi)徑(LAD)、左室舒張期內(nèi)徑(LVDd)和左室射血分?jǐn)?shù)(LVEF)。 3.穿刺股動(dòng)、靜脈,分別將壓力導(dǎo)管送入主動(dòng)脈和右心房,在X線下確定導(dǎo)線位置,并連于多導(dǎo)電生理記錄儀,監(jiān)測(cè)與記錄主動(dòng)脈收縮壓(AOSP)、主動(dòng)脈舒張壓(AODP)和右房舒張壓(RADP)。冠脈灌注壓(CPP)=AOPD-RADP,平均動(dòng)脈壓(MAP)=1/3AOSP+2/3AODP。 (二)室顫動(dòng)物模型的建立 1.動(dòng)物隨機(jī)分為4組：假手術(shù)組,8分鐘室顫組,12分鐘室顫組和30分鐘室顫組,每組8只。假手術(shù)組只麻醉插管取心肌,不予致顫。 2.致顫：將體外電刺激器火線端與零線端的導(dǎo)電針頭分別插入心前區(qū)左上方與右下方的皮下,以80V持續(xù)刺激5s可以成功的誘發(fā)持續(xù)性室顫。 室顫成功的標(biāo)準(zhǔn)：(1)心電圖示室顫波形；(2)主動(dòng)脈壓力失去波動(dòng)(近似一條直線),降至10～20mmHg以下。此時(shí)立即撤除呼吸機(jī),模仿臨床人類室顫狀態(tài)。 (三)測(cè)定Cx43、p-Cx43、MMP-2及TIMP-2在室顫不同時(shí)程中的表達(dá)水平 1.待各組持續(xù)相應(yīng)的室顫時(shí)間,將動(dòng)物用氯化鉀處死,迅速開胸沿左心室長(zhǎng)軸,留取0.5cm3大小的左心室游離壁心肌組織數(shù)塊,一部分用4%多聚甲醛固定,另一部分放入液氮中速凍,然后轉(zhuǎn)存至-80℃冰箱凍存。 2.分別提取心肌細(xì)胞總蛋白及細(xì)胞膜蛋白,Western blot檢測(cè)心肌細(xì)胞膜Cx43、p-Cx43,心肌MMP-2及TIMP-2的表達(dá)。 3.免疫熒光及激光共聚焦顯微鏡分析Cx43和p-Cx43的表達(dá)和分布。用Image-Pro Plus6.0軟件分析熒光強(qiáng)度。 4.免疫組織化學(xué)染色法分析MMP-2與TIMP-2的表達(dá)水平。 二、觀察心肌Cx43、p-Cx43、MMP-2/TIMP-2、AngⅡ在室顫轉(zhuǎn)復(fù)過程中的表達(dá)變化,以及ZP123對(duì)Cx43、p-Cx43表達(dá)與分布的影響,評(píng)價(jià)ZP123對(duì)室顫轉(zhuǎn)復(fù)的作用效果,同時(shí)探尋MMP-2/TIMP-2、AngⅡ與室顫預(yù)后的關(guān)系 (一)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物準(zhǔn)備 1.隨機(jī)選取家犬48只,雌雄不限。3%戊巴比妥鈉(30mg/kg)耳緣靜脈靜注麻醉,氣管插管,連接呼吸機(jī),用體外自動(dòng)除顫器監(jiān)測(cè)心電圖及血氧飽和度(Sa02)。 2.超聲心動(dòng)圖及血流動(dòng)力學(xué)檢測(cè)：所有動(dòng)物在致顫前及自主循環(huán)恢復(fù)(ROSC)后行經(jīng)胸超聲檢查,測(cè)量LAD、LVDd和LVEF。穿刺股動(dòng)、靜脈,分別將壓力導(dǎo)管送入主動(dòng)脈和右心房,在X線下確定導(dǎo)線位置,并連于16道多導(dǎo)電生理記錄儀,監(jiān)測(cè)并記錄AOSP、AODP和RADP。CPP=AOPD-RADP, MAP=1/3AOSP+2/3AODP。 (二)室顫動(dòng)物模型的建立 1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為6組：8分鐘室顫ZP123組(8-min VF+ZP123組),8分鐘室顫生理鹽水對(duì)照組(8-min VF+NS組),12分鐘室顫ZP123組(12-min VF+ZP123組),12分鐘室顫生理鹽水對(duì)照組(12-min VF+NS組),30分鐘室顫ZP123組(30-min VF+ZP123組)和30分鐘室顫生理鹽水對(duì)照組(30-min VF+NS組),每組8只。 2.藥物應(yīng)用：3個(gè)ZP123組在致顫前給予ZP1231μg/kg靜推+10μg·kg-1·h-1溶于50ml生理鹽水微量泵泵入30分鐘；3個(gè)對(duì)照組給予生理鹽水50ml微量泵泵入30分鐘。 3.心前區(qū)備皮后,將體外電刺激器的導(dǎo)電針頭分別插入心前區(qū)左上方與右下方的皮下,待各組藥物泵完后,立即按下體外電刺激器上的綠色通電按鈕,80V,持續(xù)5s致顫。 (三)心肺復(fù)蘇及電除顫 1.待各組室顫持續(xù)相應(yīng)的時(shí)間后,立即開始胸外心臟按壓(cardiopulmonary resuscitation, CPR),同時(shí)連接氣囊,按壓通氣比為30：2,通氣時(shí)不中斷按壓,通過POWERLAB系統(tǒng)監(jiān)測(cè)壓力波形判斷和保證按壓的效果,頻率控制在100-120次/min,放松時(shí)胸廓恢復(fù)到正常位置,按壓／放松時(shí)間比大致相等。 2.5個(gè)復(fù)蘇周期即2min后,進(jìn)行脈搏與心律評(píng)估,仍為室顫的給予雙相波電除顫,若沒有達(dá)到ROSC,則再按照前述進(jìn)行下一個(gè)2min CPR,如此循環(huán)。所有動(dòng)物首次除顫能量均為70J,第二次則增至100J,第三次增至150J,以后每次除顫均為150J。對(duì)于30min內(nèi)未達(dá)到ROSC的動(dòng)物不再繼續(xù)復(fù)蘇,達(dá)到ROSC (AOSP≥80mmHg且至少持續(xù)1min)的動(dòng)物立即給予高級(jí)生命支持,并觀察1小時(shí)。 3.計(jì)算各組平均除顫能量,除顫成功率,ROSC和存活(1小時(shí))率。 (四)測(cè)定各組Cx43、p-Cx43、MMP-2及TIMP-2的表達(dá) 1.達(dá)到實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)的動(dòng)物用氯化鉀處死,迅速開胸沿左心室長(zhǎng)軸,留取左室游離壁心肌組織。 2. Western blot檢測(cè)心肌細(xì)胞膜Cx43、p-Cx43,心肌MMP-2與TIMP-2的表達(dá)水平。 3.免疫熒光及激光共聚焦顯微鏡分析Cx43和p-Cx43的表達(dá)和分布。 4.免疫組織化學(xué)染色法測(cè)定MMP-2及TIMP-2的表達(dá)。 (五)心肌AngⅡ含量的測(cè)定 1.制備心肌組織勻漿。 2.雙抗體夾心ELISA法測(cè)定心肌組織AngⅡ含量。 結(jié)果 一、Cx43、p-Cx43、MMP-2及TIMP-2在室顫發(fā)生與維持過程中的動(dòng)態(tài)變化 (一)各組動(dòng)物基礎(chǔ)狀態(tài)的比較 各組動(dòng)物在體重、心率、LAD、LVDd、LVEF及血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)等均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05) (二)Cx43和p-Cx43在心室顫動(dòng)發(fā)生與維持過程中的表達(dá) 1.免疫熒光染色結(jié)果 假手術(shù)組Cx43和p-Cx43熒光信號(hào)強(qiáng),形態(tài)清晰,分布均勻,排列有序；室顫組隨著室顫時(shí)程的延長(zhǎng),Cx43和p-Cx43熒光信號(hào)逐漸減弱,形態(tài)模糊,排列紊亂,呈現(xiàn)不均一分布。 2. Western blot分析結(jié)果 圖像定量分析結(jié)果顯示,與假手術(shù)組相比,心肌細(xì)胞膜Cx43表達(dá)水平隨室顫時(shí)程延長(zhǎng)明顯下降(P0.05)。12分鐘室顫組和30分鐘室顫組心肌細(xì)胞膜p-Cx43表達(dá)水平明顯減少(P0.05),而8分鐘室顫組與假手術(shù)組相比無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但仍有下降趨勢(shì)(P0.05)。 3.p-Cx43/Cx43比值隨室顫時(shí)程延長(zhǎng)而不斷減小(P0.05) (三)MMP-2與TIMP-2在心室顫動(dòng)發(fā)生與維持過程中的變化 1.免疫組化與Western blot結(jié)果顯示,與假手術(shù)組相比,室顫組TIMP-2表達(dá)水平隨室顫時(shí)程的延長(zhǎng)明顯減少(P0.05)。8分鐘室顫組MMP-2表達(dá)水平與假手術(shù)組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),但是在另外兩個(gè)長(zhǎng)時(shí)程室顫組(12分鐘和30分鐘室顫組)MMP-2表達(dá)水平明顯增加(P0.05與假手術(shù)組比較)。 2.室顫組MMP-2/TIMP-2比值較假手術(shù)組升高,而且隨室顫時(shí)程延長(zhǎng)逐漸增加(P0.05)。 p-Cx43/Cx43與MMP-2/TIMP-2的比值變化 相關(guān)分析結(jié)果顯示,p-Cx43/Cx43與MMP-2/TIMP-2呈顯著負(fù)相關(guān)(r=—0.93,P0.01)。 二、心肌Cx43、p-Cx43、MMP-2/TIMP-2、AngⅡ在室顫轉(zhuǎn)復(fù)過程中的表達(dá)變化及ZP123的作用 (一)各組動(dòng)物基礎(chǔ)狀態(tài)指標(biāo)的比較 致顫前,各組動(dòng)物體重、心率、LAD、LVDd、LVEF及血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)等均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 (二)實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)各組存活的動(dòng)物超聲與血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)的比較 對(duì)各組復(fù)蘇后恢復(fù)自主循環(huán)并存活超過1小時(shí)的家犬進(jìn)行超聲與血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)統(tǒng)計(jì)分析顯示,8分鐘室顫、12分鐘室顫的ZP123組和NS對(duì)照組LAD、LVDd均較室顫前明顯增大(P0.05),而LVEF則較室顫前明顯下降(P0.05),且12分鐘室顫ZP123組和NS對(duì)照組LAD、LVEF與8分鐘室顫的同治療組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05), LVDd值雖然也比8分鐘室顫的同治療組增大,但未達(dá)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)除RADP與室顫前無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),其余指標(biāo)AOSP、AODP、MAP及CPP四組均較室顫前明顯降低(P0.05)。30分鐘室顫的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)組因存活家犬?dāng)?shù)量過少,未進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 (三)實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)各組動(dòng)物除顫成功率、平均除顫能量以及存活率的比較 8分鐘室顫ZP123治療組8只家犬全部成功除顫,其中有7只在前三次除顫成功復(fù)律,且7只全部達(dá)到ROSC并存活；8分鐘室顫NS對(duì)照組有7只獲得成功除顫,其中4只在前三次除顫成功復(fù)律,共有6只達(dá)到ROSC并存活1小時(shí)以上。12分鐘室顫ZP123治療組有7只家犬成功除顫,其中5只在前三次除顫中復(fù)律并成功達(dá)到ROSC,4只存活時(shí)間大于1小時(shí)；同時(shí)程室顫的NS對(duì)照組有5只除顫成功,其中2只是在前三次除顫中復(fù)律,4只家犬達(dá)到了ROSC但僅3只存活超過1小時(shí)。30分鐘室顫ZP123治療組有2只家犬獲得成功除顫,但均未達(dá)到ROSC；同時(shí)程N(yùn)S組有1只除顫成功并存活。 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析結(jié)果顯示,8分鐘和12分鐘室顫ZP123組前三次除顫成功率均明顯高于同時(shí)程室顫NS對(duì)照組(P0.05),且所用平均除顫能量顯著低于同時(shí)程室顫NS對(duì)照組(P0.05)。盡管ZP123用藥組的自主循環(huán)恢復(fù)率和存活率與同室顫時(shí)程的NS對(duì)照組相比,差異未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P0.05),但8分鐘和12分鐘室顫ZP123組均較同時(shí)程的NS對(duì)照組有著相對(duì)較高的自主循環(huán)恢復(fù)率和存活率。 (四)用藥后各ZP123組與對(duì)照組心肌Cx43與p-Cx43的表達(dá)變化 1.免疫熒光染色結(jié)果 各ZP123組的Cx43和p-Cx43熒光信號(hào)均較同時(shí)程室顫生理鹽水對(duì)照組強(qiáng),形態(tài)更加清晰,分布更加均勻,排列更加有序；且隨著室顫時(shí)程的延長(zhǎng),ZP123組和對(duì)照組Cx43. p-Cx43熒光信號(hào)逐漸減弱,形態(tài)模糊,排列紊亂,呈現(xiàn)不均一分布。 2. Western blot分析結(jié)果 圖像定量分析結(jié)果顯示,與假手術(shù)組相比,3個(gè)ZP123治療組和3個(gè)對(duì)照組心肌胞膜Cx43表達(dá)水平均明顯降低(P0.05或P0.01),12分鐘室顫和30分鐘室顫ZP123治療組Cx43表達(dá)水平高于同時(shí)程室顫NS對(duì)照組(P0.05),8分鐘室顫ZP123治療組與NS對(duì)照組Cx43表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。 隨室顫時(shí)間的延長(zhǎng),各組心肌細(xì)胞膜p-Cx43表達(dá)水平逐漸下降,不同時(shí)程室顫ZP123治療組心肌細(xì)胞膜p-Cx43表達(dá)水平均明顯高于同時(shí)程室顫NS對(duì)照組(P0.05)。 3. p-Cx43/Cx43比值變化 p-Cx43/Cx43比值隨室顫時(shí)程延長(zhǎng)逐漸減小,且不同時(shí)程室顫ZP123治療組p-Cx43/Cx43比值高于同時(shí)程室顫NS對(duì)照組(P0.05)。 (五)治療組與對(duì)照組心肌AngⅡ含量測(cè)定結(jié)果 與假手術(shù)組相比較,各ZP123治療組與NS對(duì)照組心肌Ang Ⅱ含量均顯著增加(P0.05或P0.01),且隨室顫時(shí)程的延長(zhǎng),心肌Ang Ⅱ含量逐漸升高,但同時(shí)程室顫ZP123治療組與NS對(duì)照組相比,心肌Ang Ⅱ含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。 (六)不同室顫時(shí)程存活組與死亡組心肌MMP-2與TIMP-2表達(dá)水平 1.免疫組織化學(xué)染色與Western blot結(jié)果 通過統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,同時(shí)程室顫ZP123組與NS對(duì)照組相比,心肌MMP-2和TIMP-2的表達(dá)均無顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。但是對(duì)實(shí)驗(yàn)終點(diǎn)時(shí)各時(shí)程室顫的存活家犬與死亡家犬心肌MMP-2和TIMP-2的表達(dá)水平進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析比較,結(jié)果顯示,8分鐘與12分鐘時(shí)程室顫存活組心肌MMP-2表達(dá)水平較死亡組略高,但差異無顯著性(P0.05),存活組心肌TIMP-2表達(dá)水平顯著高于同時(shí)程室顫死亡組(P0.05)。30分鐘時(shí)程室顫組因存活動(dòng)物過少,未進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 2. MMP-2/TIMP-2比值 8分鐘與12分鐘時(shí)程室顫存活組MMP-2/TIMP-2比值均明顯低于同時(shí)程室顫死亡組(P0.05) (七)不同時(shí)程室顫存活組與死亡組心肌AngⅡ含量比較 通過對(duì)各時(shí)程室顫存活家犬與死亡家犬的心肌Ang Ⅱ含量進(jìn)行比較發(fā)現(xiàn),存活組家犬心肌Ang Ⅱ含量均明顯低于同時(shí)程室顫死亡組(P0.05)。30分鐘時(shí)程室顫組因存活動(dòng)物過少,未進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 (八)各指標(biāo)的相關(guān)性分析 相關(guān)性分析結(jié)果顯示,心肌細(xì)胞膜Cx43表達(dá)水平與除顫成功率呈顯著正相關(guān)(r=0.91,P0.01)；心肌細(xì)胞膜Cx43表達(dá)水平與平均除顫能量呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.854,P0.01)；心肌細(xì)胞膜磷酸化Cx43表達(dá)水平與前三次除顫成功率呈顯著正相關(guān)(r=0.926,P0.01)；NS對(duì)照組心肌細(xì)胞膜Cx43和p-Cx43表達(dá)水平均與心肌Ang Ⅱ含量呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.945、-0.909,P0.01)；心肌TIMP-2表達(dá)水平與心肌AngⅡ含量呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.947,P0.01)。 結(jié)論 1.室顫的發(fā)生發(fā)展過程中,心肌細(xì)胞膜Cx43發(fā)生了重構(gòu),不僅表現(xiàn)為Cx43表達(dá)量的減少,排列和分布的紊亂,還包括磷酸化Cx43比例的減少和非磷酸化Cx43比例的增加,并且隨著室顫時(shí)程的延長(zhǎng),Cx43重構(gòu)表現(xiàn)得更為明顯�？p隙連接增強(qiáng)劑ZP123能通過減輕Cx43重構(gòu),包括上調(diào)心肌細(xì)胞膜Cx43表達(dá),減少去磷酸化,使Cx43排列與分布趨于均一,改善心肌細(xì)胞間縫隙連接電耦聯(lián),從而降低除顫能量,提高除顫成功率。 2.心肌MMPs與TIMPs調(diào)節(jié)失衡導(dǎo)致的細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)參與了室顫的發(fā)生與維持,且NMMPs/TIMPs表達(dá)失衡與室顫復(fù)蘇死亡率相關(guān),其作用機(jī)制可能是通過引發(fā)復(fù)蘇時(shí)心肌缺血再灌注損傷。 3.在室顫的發(fā)展過程中,縫隙連接重構(gòu)與細(xì)胞外基質(zhì)重構(gòu)是伴隨發(fā)生的。 4.AngⅡ既能通過下調(diào)Cx43表達(dá),降低Cx43磷酸化水平,引起GJ重構(gòu),又能通過破壞MMPs/TIMPs平衡導(dǎo)致心肌缺血再灌注損傷,二者作用的共同結(jié)果就是促使室顫更易于維持,不易轉(zhuǎn)復(fù),而且增加復(fù)蘇后心肌損傷,不利于室顫預(yù)后。而ARB降低室性心律失常發(fā)生率與死亡率的機(jī)制,可能正是因?yàn)樽铚薃ng Ⅱ的上述效應(yīng)。 5.預(yù)防性應(yīng)用ARB類藥物可能會(huì)降低室顫的發(fā)生率和死亡率。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R541.75

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2194486