【摘要】：目的：通過觀察七氟醚預(yù)處理對大鼠缺血再灌注心肌細(xì)胞自噬作用的影響，探討七氟醚預(yù)處理對缺血再灌注損傷心肌早期保護作用的可能機制，為臨床應(yīng)用七氟醚提供理論參考。 方法： 1實驗分組與動物模型制備 清潔級雄性SD大鼠45只，鼠齡8～12周，體重200～240g，由河北醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，采用隨機數(shù)字表法隨機分為3組（n=15)：假手術(shù)組（Sham組）,左冠狀動脈前降支穿線，不結(jié)扎，觀察150min;缺血再灌注組（I/R組）,結(jié)扎左冠狀動脈前降支，阻斷冠脈血流缺血30min,再灌注120min制備心肌缺血再灌注模型；七氟醚預(yù)處理+缺血再灌注組（Sevo組），在缺血前30min吸入七氟醚,使呼出氣末七氟醚濃度達(dá)到2.5%,維持15min,洗脫15min后，結(jié)扎左冠狀動脈前降支，阻斷冠脈血流缺血30min，再灌注120min。 大鼠禁食水8h后稱重，腹腔注射3%戊巴比妥鈉（50mg/kg）麻醉，仰臥位固定，在其軀干下放置自制暖水袋，軀干上方放置60w白熾燈，通過調(diào)節(jié)白熾燈到大鼠軀干的距離及更換暖水袋來維持大鼠的肛溫在37.0～37.5℃，四肢連接針形電極，通過連接監(jiān)護儀持續(xù)監(jiān)測Ⅱ?qū)?lián)心電圖。經(jīng)口氣管插管，連接嚙齒類小動物呼吸機，行機械通氣并連接多參數(shù)麻醉氣體監(jiān)護儀檢測呼吸。于頸部正中切口剝離頸前肌肉，暴露主支氣管，用3-0絲線在主支氣管下穿線結(jié)扎氣管導(dǎo)管和主支氣管避免漏氣，分離左側(cè)頸總動脈穿刺置管檢測動脈壓。胸前剪毛并消毒，于胸骨中線左旁開0.5cm處切開皮膚，斷開3、4肋，，打開心包，暴露心臟，于左心房置入套管針，輕推入左心室，測量左室發(fā)展壓。在左心耳與肺動脈圓錐間可見與左冠狀動脈伴行的心大靜脈，以心大靜脈為標(biāo)志在左心耳根部1～2mm處用6-0prolene帶針線穿線結(jié)扎左冠狀動脈前降支，阻斷冠脈血流30min后剪開結(jié)扎線再灌注120min，實驗過程中間斷腹腔注射戊巴比妥鈉維持麻醉。Sham組穿線不結(jié)扎觀察150min；I/R組和Sevo組結(jié)扎左冠狀動脈前降支，阻斷冠狀動脈血流30min后剪開結(jié)扎線再灌注120min，其中Sevo組在結(jié)扎前30min進行七氟醚預(yù)處理。缺血成功的標(biāo)志：肉眼觀察結(jié)扎部位遠(yuǎn)端心肌外膜發(fā)紺，心肌收縮運動減弱；MAP下降，心率由慢轉(zhuǎn)快又迅速轉(zhuǎn)慢，心電圖出現(xiàn)QRS波寬度及高度增加，ST段抬高，T波增高。再灌注成功的標(biāo)志：肉眼觀察缺血心肌顏色、左心室收縮運動較缺血期末好轉(zhuǎn)；MAP較缺血期末升高， ST段、T波和QRS波寬及波高均顯著下降，但仍高于缺血前水平。 2檢測指標(biāo)與標(biāo)本采集 2.1血流動力學(xué)指標(biāo)：監(jiān)測并記錄房室導(dǎo)管穿刺成功后穩(wěn)定10min（T0）、冠脈結(jié)扎成功即刻（T1）、缺血30min（T2）、再灌注10min（T3）、再灌注30min（T4）、再灌注1h（T5）和再灌注2h（T6）時的心率（HR）、平均動脈壓（MAP）、左室收縮壓（LVSP）和左室舒張末壓(LVDEP)，計算并記錄各時間點的左室發(fā)展壓（LVDP=LVSP-LVDEP）。 2.2生化指標(biāo)：再灌注120min末經(jīng)頸動脈置管處抽取動脈血3ml，離心取其上清液，測定肌鈣蛋白I（cTnI）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）的濃度。 2.3梗死面積測量及心肌細(xì)胞自噬檢測：取血后重新結(jié)扎冠狀動脈前降支，每組隨機抽取5只，Evensblue-TTC（伊文氏藍(lán)-2,3,5-三苯基氯化四氮唑）雙染色法測定心肌梗死面積。每組中隨機抽取5只，取心肌標(biāo)本用于電鏡觀察：取血后快速取下心臟在冠脈結(jié)扎線下約0.5cm處取一小塊心肌修剪成3塊13

本文編號：2165464