本文選題：己烯雌酚 + 枸杞多糖　； 參考：《河北農(nóng)業(yè)大學(xué)》2015年碩士論文

【摘要】：本試驗(yàn)主要研究己烯雌酚(Diethylstilbestrol,DES)染毒雄性成年倉(cāng)鼠對(duì)其睪丸和附睪生精細(xì)胞凋亡及其后代生精細(xì)胞凋亡的影響及枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)的緩解作用。將90只成年雄性倉(cāng)鼠正常飼養(yǎng)7 d后,隨機(jī)分為6組(n=15)。于末次給藥24 h后,每組均隨機(jī)選取5只倉(cāng)鼠,乙醚麻醉致死,取出睪丸快速分離睪丸周?chē)闹?放入波恩氏液中固定,制作石蠟切片,應(yīng)用免疫組化方法測(cè)定Caspase-8、Caspase-9、P53、ER及AR的表達(dá)與定位;另外摘取兩側(cè)附睪,左側(cè)附睪尾放于波恩氏液中固定,制做石蠟切片,HE染色觀察其組織學(xué)變化,免疫組織化學(xué)法檢測(cè)凋亡蛋白Caspase-8、Caspase-9、P53的表達(dá)與定位;右側(cè)附睪尾于37℃生理鹽水中剪碎,取精子懸液觀察精子形態(tài),計(jì)算精子密度和畸形率。末次給藥24 h后,各試驗(yàn)組均隨機(jī)選取5只雄性倉(cāng)鼠,與發(fā)情母鼠按1:2比例合籠,連續(xù)2個(gè)發(fā)情周期(9 d),每天早晨,對(duì)雌鼠進(jìn)行陰道涂片,鏡檢發(fā)現(xiàn)精子者視為合籠成功,記為孕1 d。將懷孕母鼠單獨(dú)飼養(yǎng),期間喂給正常的飼料和水,待其分娩。分別記錄每只母鼠妊娠率、妊娠日期、產(chǎn)仔數(shù)、雌雄比例、仔鼠PND 0 d、7 d、14 d、21d、28 d和56 d體重。飼養(yǎng)雄性仔鼠至性成熟,乙醚麻醉致死倉(cāng)鼠,取睪丸組織,稱(chēng)量并計(jì)算器官指數(shù),將睪丸固定在波恩氏液中,制作石蠟切片,觀察組織學(xué)變化,并檢測(cè)睪丸中Fas、Fas L及Caspase-3的表達(dá)與定位;分別摘取兩側(cè)附睪,稱(chēng)重并計(jì)算器官指數(shù),左側(cè)附睪尾放于波恩氏液中固定,制做石蠟切片,HE染色觀察其組織學(xué)變化;右側(cè)附睪尾于37℃生理鹽水中剪碎,取精子懸液觀察精子形態(tài),計(jì)算精子密度和畸形率。6個(gè)試驗(yàn)組中剩余的30只雄性倉(cāng)鼠,繼續(xù)飼喂3個(gè)月,觀察3個(gè)月后倉(cāng)鼠睪丸的組織學(xué)變化;取附睪,計(jì)算精子密度和畸形率。結(jié)果顯示:(1)F0代成年雄性倉(cāng)鼠用DES處理后,附睪組織形態(tài)發(fā)生明顯變化;補(bǔ)充LBP后,附睪管上皮細(xì)胞排列整齊,結(jié)構(gòu)完整,損傷明顯減少,尤其是在LBP高劑量組(50 mg/kg)是最明顯的,維生素組附睪組織形態(tài)也得到很好的恢復(fù),且LBP高劑量組與維生素組無(wú)顯著差異。DES顯著降低F0代倉(cāng)鼠精子數(shù)量,提高精子畸形率(P0.01),而LBP可以提高F0代雄鼠精子數(shù)量,降低畸形率,維生素對(duì)精子數(shù)量和畸形率也有顯著作用。通過(guò)免疫組化法檢測(cè)證實(shí),DES引起F0代成年倉(cāng)鼠睪丸內(nèi)生精細(xì)胞大量凋亡,顯著提高Caspase-9的表達(dá)(P0.01);給予不同劑量的LBP后,Caspase-9及P53的達(dá)呈劑量依賴(lài)性降低,以LBP高劑量組表達(dá)最低(P0.01),同時(shí)LBP高劑量組的Caspase-8陽(yáng)性表達(dá)與對(duì)照組相比差異不顯著。DES顯著降低AR基因的表達(dá)(P0.01),添加LBP后,各治療組AR的表達(dá)量隨LBP劑量升高而增加。DES能夠使ER基因表達(dá)顯著升高,LBP應(yīng)用后ER表達(dá)量均減少。DES可顯著增加F0代倉(cāng)鼠附睪組織中Caspase-8、Caspase-9及P53的表達(dá)(P0.01),添加LBP后,1/10/50 mg/kg LBP組凋亡蛋白Caspase-8的表達(dá)較DES降低(P0.01),10/50 mg/kg LBP組Caspase-9的陽(yáng)性表達(dá)較DES降低(P0.01),50 mg/kg LBP組凋亡蛋白P53的表達(dá)較DES降低(P0.01)。(2)與DES組雄鼠交配的10只雌鼠中,僅有4只懷孕,1 mg/kg LBP組和10 mg/kg LBP組雌鼠的妊娠率分別為60%和70%,對(duì)照組、50 mg/kg LBP組和維生素組雄性倉(cāng)鼠與發(fā)情雌鼠合籠,3個(gè)組中雌鼠全部懷孕。各組間雌鼠妊娠日齡、產(chǎn)仔數(shù)、出生重及仔鼠雌雄比例比較,均差異不顯著。F1代仔鼠PND 7 d體重,各組間比較均沒(méi)有顯著差異。DES組和維生素組仔鼠PND 14 d和PND 21 d體重顯著低于對(duì)照組和LBP各劑量組(P0.05),LBP各劑量組仔鼠PND 14 d和PND 21 d體重與對(duì)照組沒(méi)有顯著差異。DES組仔鼠PND 28 d體重與對(duì)照組相比差異顯著(P0.05),LBP各劑量組仔鼠PND 28 d體重與對(duì)照組相比沒(méi)有顯著差異,與對(duì)照組相比,維生素組仔鼠PND 28 d體重差異明顯(P0.05)。仔鼠成年后(PND 56d)體重各組之間比較,維生素組為110.77 g,顯著低于對(duì)照組的135.80 g(P0.05),DES組和LBP各劑量組與對(duì)照組相比沒(méi)有明顯差異。F1代倉(cāng)鼠睪丸重量及其器官指數(shù)各組之間比較,沒(méi)有差異。DES組、1/10 mg/kg LBP組和VC+VE組F1代附睪重量及附睪器官指數(shù)和精子數(shù)量低于對(duì)照組,而50 mg/kg LBP組與對(duì)照組相比差異不顯著。DES組、1 mg/kg LBP組F1代倉(cāng)鼠睪丸組織結(jié)構(gòu)有輕微損傷,10/50 mg/kg LBP組睪丸組織接近正常;各組間F1代附睪組織形態(tài)正常。各組間F1代倉(cāng)鼠精子畸形率比較無(wú)顯著性差異。DES組、1 mg/kg LBP組F1代睪丸中Fas的表達(dá)較對(duì)照組顯著增高(P0.01),10/50 mg/kg LBP組和維生素組無(wú)顯著變化。DES組、1/10mg/kg LBP組F1代睪丸中Fas L的陽(yáng)性表達(dá)較對(duì)照組顯著增高(P0.01),50 mg/kg LBP組和VC+VE組相比差異不顯著。F1代睪丸組織中Caspase-3的陽(yáng)性表達(dá),除DES組顯著高于對(duì)照組外其他各組與對(duì)照組相比沒(méi)有差異。(3)經(jīng)過(guò)3個(gè)月的恢復(fù)后,各組的睪丸和附睪重量及睪丸組織形態(tài)皆恢復(fù)到正常水平,精子畸形率也降低到正常水平,DES組、1/10 mg/kg LBP組和VC+VE組精子數(shù)量顯著低于對(duì)照組,50 mg/kg LBP組恢復(fù)到對(duì)照組水平。各組倉(cāng)鼠恢復(fù)3個(gè)月后,其體重均較用藥結(jié)束時(shí)有顯著增加(P0.01);睪丸重量較用藥結(jié)束時(shí)均有增加,但沒(méi)有顯著差異;1 mg/kg DES組和維生素組附睪重量分別增加81.25%和55.81%,但差異不顯著;1 mg/kg LBP組和10 mg/kg LBP組附睪重量恢復(fù)前后比較,差異顯著(P0.05);而50 mg/kg LBP組附睪重量由0.46 g增加到0.73 g,差異極顯著(P0.01)。經(jīng)過(guò)3個(gè)月恢復(fù)后,DES組、1/10 mg/kg LBP組和維生素組精子數(shù)量與結(jié)束用藥時(shí)相比,精子數(shù)量均顯著增加(P0.01);50 mg/kg LBP組精子數(shù)量恢復(fù)前后變化不明顯。精子畸形率恢復(fù)前后的比較結(jié)果顯示,各組倉(cāng)鼠恢復(fù)3個(gè)月后,精子畸形率均較結(jié)束用藥時(shí)顯著降低(P0.01)。結(jié)論:(1)DES造成睪丸生精細(xì)胞大量凋亡,改變附睪結(jié)構(gòu),增加附睪凋亡蛋白Caspase-8、Caspase-9和P53表達(dá),擾亂AR和ER正常功能,降低精子數(shù)量,增加精子畸形率,導(dǎo)致成年雄性倉(cāng)鼠生殖損傷,生育能力降低。補(bǔ)充不同劑量的LBP后,LBP減少睪丸生精細(xì)胞和附睪上皮細(xì)胞凋亡,使附睪損傷程度減輕,糾正AR和ER功能,增加精子數(shù)量,減少精子畸形率,緩解DES對(duì)F0代雄性倉(cāng)鼠造成的生殖損傷。(2)DES對(duì)F1代倉(cāng)鼠生殖能力造成不良影響,包括降低仔鼠PND14 d、21 d、28 d和56 d體重,降低F1代附睪重量及其器官指數(shù),減少精子數(shù)量,增加睪丸生精細(xì)胞Fas/Fas L及Caspase-3蛋白的凋亡。應(yīng)用LBP后,可以緩解DES對(duì)F1代造成的生殖損傷,其中以LBP高劑量組的作用最明顯。(3)成年雄性倉(cāng)鼠用DES處理后,經(jīng)過(guò)3個(gè)月正常飼喂,各項(xiàng)生殖指標(biāo)均有不同程度好轉(zhuǎn),但精子數(shù)量仍低于對(duì)照組;而用LBP處理的倉(cāng)鼠各項(xiàng)指標(biāo)恢復(fù)良好,且50 mg/kg LBP組精子數(shù)量恢復(fù)到正常水平,說(shuō)明LBP有助于DES引起的生殖損傷恢復(fù)。
[Abstract]:In this experiment , we studied the effects of diethylstilbenes ( DES ) on the apoptosis of spermatogenic cells and their progeny , and then divided them into 6 groups ( n = 15 ) . After the last dose of 24 h , the cells were randomly divided into 6 groups ( n = 15 ) . The results showed that : ( 1 ) There was no significant difference in the morphology of the testis of F0 generation after treatment with DES . The results showed that : ( 1 ) There was no significant difference in the morphology of the testis of F0 generation . The expression of Caspase - 8 , Caspase - 9 and P53 was significantly increased in the high dose group ( P0.01 ) . The expression of Caspase - 8 , Caspase - 9 and P53 was significantly increased after the addition of lbp ( P0.01 ) . The expression of Caspase - 8 , Caspase - 9 and P53 was decreased in the 10 / 50 mg / kg group . The expression of Caspase - 8 , Caspase - 9 and P53 in the 10 / 50 mg / kg group was lower than that of DES ( P0.01 ) . Compared with the control group , there was no significant difference between the weight of female mice and the control group ( P0.05 ) . Compared with the control group , there was no significant difference between the weight of the female mice and the control group . Compared with the control group , the expression of Fas L was significantly higher in the F1 generation testis than in the control group ( P0.01 ) . Compared with the control group , the positive expression of Caspase - 3 in the F1 generation testis was significantly higher than that in the control group ( P0.01 ) . The results showed that : ( 1 ) After 3 months of recovery , the sperm count increased significantly ( P0.01 ) . ( 2 ) The effect of DES on the reproductive ability of F1 generation hamster was reduced . ( 2 ) The effects of DES on the reproductive ability of F1 generation hamster were reduced .
【學(xué)位授予單位】：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：S853.7

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2073093